CLEC7A在顱內動脈瘤組織和血清中的表達及臨床意義▲

胡瑞婷 黃利強 周夢曉 周少旦 胡瑞光

(1 廣西醫(yī)科大學附屬民族醫(yī)院神經內科，廣西南寧市 530001；2 廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院神經內科，廣西南寧市 530021；3 廣西醫(yī)科大學附屬民族醫(yī)院老年科，廣西南寧市 530001)

顱內動脈瘤(intracranial aneurysm，IAA)是一種顱內動脈管壁上的瘤樣突起，我國成年人IAA的發(fā)病率約為7%，IAA破裂可導致嚴重的致殘率和死亡率，因而需要探討其發(fā)病機制以采用合理的預防和治療措施應對。研究顯示遺傳因素、血管壁結構、血流動力學因素和分子表達異常等均在動脈瘤的形成中發(fā)揮重要作用[1-2]。CLEC7A也稱為Dectin-1，是基因編碼C型凝集素/C型凝集素樣結構域超家族的成員。CLEC7A在多種細胞中發(fā)揮調控作用，如CLEC7A激活的漿細胞樣樹突狀細胞可以顯著促進Th2型T細胞應答，而CLEC7A激活的髓樣樹突狀細胞則降低Th2型T細胞應答[3]。在人的肺組織中，過表達CLEC7A可以增強肺上皮細胞對流感嗜血桿菌的促炎免疫應答[4]。在動脈瘤研究方面，有研究顯示CLEC7A過表達與栓塞后動脈瘤的愈合相關[5]。這些研究均提示CLEC7A參與多種細胞的炎癥損傷修復過程。然而，CLEC7A在IAA中的作用尚未清楚。本研究通過分析CLEC7A在IAA組織和血清中的表達水平，探討CLEC7A在IAA發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)集篩選 在GEO數(shù)據(jù)庫檢索IAA的數(shù)據(jù)集，檢索詞“Intracranial Aneurysm”，對檢索到的數(shù)據(jù)集進行篩選，限定“人類(Homo sapiens)”“組織(tissue)”“基因芯片(Expression profiling by array)”， 樣本數(shù)量>10個，最終獲得2個IAA基因芯片結果，分別為GSE75436和GSE54083數(shù)據(jù)集，其中GSE75436有30個樣本，包括15例IAA血管樣本和15例配對的淺表動脈血管樣本；GSE54083有23個樣本，包括13例IAA血管樣本和10例配對的淺表動脈血管樣本。

1.2 研究對象 收集廣西民族醫(yī)院2018年1月至2019年12月收治的IAA患者的血清標本60例，收集患者的年齡、性別、動脈瘤是否破裂等臨床資料。其中40例未發(fā)生IAA破裂，20例發(fā)生IAA破裂?；颊吣挲g(45.5±7.9)歲，男28例，女32例。IAA的診斷均經影像學或血管造影證實。排除合并有腫瘤、免疫性疾病、外傷以及嚴重肝腎功能不全的患者。另選取正常人的血清標本20例作為對照，年齡(43.6±8.4)歲，男10例，女10例。

1.3 血清CLEC7A檢測 予IAA患者入院后第二天清晨采集靜脈血5 mL，室溫放置2 h后，以3 000 r/min離心10 min，離心結束后吸取血清放入-80 ℃冰箱保存。采用ELISA法檢測CLEC7A水平(ELISA試劑盒購自美國CUSABIO公司，檢測范圍31.25～2 000 pg/mL，檢測靈敏度7.81 g/mL)，檢測流程嚴格按照相應試劑盒說明書進行。

2 結 果

2.1 CLEC7A在IAA組織的表達 對CLEC7A在GSE75436和GSE54083數(shù)據(jù)集的表達水平進行分析顯示，IAA組織中的CLEC7A表達量高于淺表動脈的表達量(P<0.05)，見表1。進一步分析GSE54083數(shù)據(jù)集中的CLEC7A表達水平與患者性別和年齡的關系，結果顯示不同性別和年齡段IAA組織中CLEC7A表達水平的比較，差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。見表2。

表1 CLEC7A在IAA和正常動脈組織中表達的比較 ()

表2 GSE54083數(shù)據(jù)集中IAA組織的CLEC7A 表達水平與患者年齡和性別的關系 ()

2.2 CLEC7A在IAA患者血清中的表達 使用ELISA法檢測了CLEC7A在未破裂IAA、破裂IAA患者和健康人血清中的表達水平，單因素方差分析結果顯示血清CLEC7A在上述3組中表達水平差異有統(tǒng)計學意義(F=3.568，P=0.001)，其中在破裂IAA患者的表達水平最高(321.90±12.54)pg/mL，未破裂IAA患者次之(227.68±14.22)pg/mL，健康人最低(174.80±9.29)pg/mL；兩兩比較顯示血清CLEC7A在未破裂IAA、破裂IAA患者的表達水平均顯著高于健康人表達水平(均P<0.05)。

在不同性別方面，血清CLEC7A水平在男性和女性患者的表達差異無統(tǒng)計學意義[(259.51±45.94)vs.(255.86±56.88),t=0.163,P=0.875]；而在年齡方面，年齡高(≥60歲)的患者其血清CLEC7A水平比年齡低(<60歲)的患者明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義[(273.46±48.12)vs.(232.38±30.20),t=4.051，P=0.001]。

2.3 血清CLEC7A水平對IAA的診斷價值 以健康人血清作為對照，使用ROC曲線分析血清CLEC7A水平對IAA的診斷價值，結果顯示，血清CLEC7A水平對IAA的診斷靈敏度為0.618，特異度為0.700，AUC值為0.798，最佳截斷值為232.56 pg/mL。結果顯示血清CLEC7A水平對IAA有一定的診斷價值。見圖1。

圖1 血清CLEC7A水平診斷IAA的ROC曲線

3 討 論

隨著影像學技術的發(fā)展，臨床上對IAA的檢出率不斷提高。IAA一旦破裂將會導致蛛網(wǎng)膜下腔出血，其中高達35%蛛網(wǎng)膜下腔出血患者的預后不良。目前IAA形成的機制尚不完全清楚，但已有研究報道了數(shù)個與IAA發(fā)病密切相關的基因，如 KLF2[6]、TNF-α[7]等。近年來，一些新的與IAA發(fā)病相關的基因不斷被發(fā)現(xiàn)，如Marchese等[8]采用基因芯片技術分析了破裂IAA血管、破裂IAA患者的顳淺動脈血管，以及未破裂IAA血管、未破裂IAA患者的顳淺動脈血管，對照顳淺動脈的基因表達情況，發(fā)現(xiàn)金屬蛋白酶抑制劑、一氧化氮及凋亡相關信號通路與IAA破裂相關。Nakaoka等[9]利用微陣列技術檢測破裂IAA血管、未破裂IAA血管和顳淺動脈血管的基因表達水平，發(fā)現(xiàn)早期破裂IAA中有430個基因表達升高，617個基因表達降低。這些結果表明基因的改變在IAA的發(fā)病過程中發(fā)揮重要的作用。

人的CLEC7A基因通過轉錄后可產生8個亞型，2個主要亞型(A、B)和6個次要亞型(C、D、E、F、G、H)。其中只有三個亞型(A、B、E)同時具有完整的CRD結構域和ITAM基序。CLEC7A的細胞內結構域而非配體結合結構域決定著物種特異性配體[10]。CLEC7A能特異性識別可溶性及顆粒性葡聚糖。CLEC7A也可識別CD4和CD8 T淋巴細胞表面的內源性配體，促進T淋巴細胞的增生。目前CLEC7A在真菌感染免疫領域的研究較多，如研究表明CLEC7A是介導固有免疫細胞識別β-葡聚糖的主要受體[11]。CLEC7A還介導了宿主細胞識別并殺死真菌感染的過程。在炎癥反應方面，CLEC7A可以反應性激活mTOR-sonic-hedgehog信號級聯(lián)通路，進而刺激脂質代謝酶的表達[12]。這些研究結果提示CLEC7A參與免疫和炎癥性疾病發(fā)生。

本研究分析了兩個基因芯片中CLEC7A的表達情況，發(fā)現(xiàn)IAA組織中CLEC7A表達水平顯著高于正常組織的CLEC7A表達水平，表明CLEC7A參與了IAA的發(fā)病過程，并且CLEC7A高表達可能促進IAA的發(fā)病過程。既然CLEC7A在IAA組織中高表達，則其表達也有可能在血清標本中發(fā)生改變。因而本文進一步檢測了CLEC7A在IAA患者血清中的表達情況，結果發(fā)現(xiàn)與在組織中的表達相似，CLEC7A在IAA患者血清中的表達也明顯升高，且發(fā)生破裂IAA患者的CLEC7A表達水平更高，表明CLEC7A表達水平越高，IAA破裂的風險越高。此外，本研究發(fā)現(xiàn)了血清CLEC7A表達水平與患者年齡相關，盡管在組織中沒有看到類似結果，我們考慮這與血管組織標本例數(shù)較少相關。這些結果提示年齡增大、血管變硬等因素可能導致CLEC7A表達升高，進而共同促進IAA的發(fā)生。此外，本研究分析了血清CLEC7A水平對IAA的診斷價值，結果顯示血清CLEC7A水平對IAA的診斷有較高的敏感度和特異度。因此，血清CLEC7A水平可作為IAA的一個輔助診斷指標。

綜上所述，CLEC7A表達水平在IAA組織和血清中均顯著升高，提示CLEC7A與IAA的發(fā)病密切相關。血清CLEC7A水平可作為IAA的輔助診斷指標之一。