復(fù)方苦參合劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)研究

谷世平 段雪云 蔡權(quán) 李森 范恒

〔摘要〕 目的 研究復(fù)方苦參合劑的穩(wěn)定性。方法 采用鈉鈣玻璃輸液瓶包裝，在高溫（60 ℃）、高濕（90%±5%）、強(qiáng)光[（4 500±500）lx]照射下10 d;在室溫自然貯存18個(gè)月;于（40±2） ℃、相對(duì)濕度（75%±5%）條件下貯存6個(gè)月，按復(fù)方苦參合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè);采用觀察、口嘗法確定其性狀;采用pH計(jì)測(cè)定pH值;比重瓶法測(cè)定相對(duì)密度;HPLC法測(cè)定含量;微生物限度檢查法測(cè)定微生物限度。結(jié)果 與0月比較，影響因素試驗(yàn)（0、5、10 d）、加速試驗(yàn)（0、1、2、3、6個(gè)月）、長(zhǎng)期試驗(yàn)（0、3、6、9、12、18個(gè)月）中各時(shí)間點(diǎn)，復(fù)方苦參合劑的性狀、pH值含量、相對(duì)密度、微生物限度檢查中各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化（P>0.05），含量變化也在合格范圍內(nèi)。結(jié)論 復(fù)方苦參合劑的有效期暫定12個(gè)月，應(yīng)儲(chǔ)存于干燥陰涼處。

〔關(guān)鍵詞〕 復(fù)方苦參合劑;穩(wěn)定性;影響因素試驗(yàn);加速試驗(yàn);長(zhǎng)期試驗(yàn)

〔中圖分類號(hào)〕R285? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.08.012

Study on the Stability of Compound Sophorae Mixture

GU Shiping1， DUAN Xueyun1， CAI Quan2，3*， LI Sen3， FAN Heng3

（1. Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine/Hubei Province Academy of Traditional Chinese Medicine， Wuhan， Hubei 430061， China; 2. The Fifth Hospital of Huangshi City， Huangshi， Hubei 435005， China; 3. Union Hospital of Tongji Medical College， Huazhong University of Science and Technology， Wuhan， Hubei 430022， China）

〔Abstract〕 Objective To study the stability of Compound Sophorae Mixture. Methods Soda-lime glass infusion bottle was used for packaging; high temperature （60 ℃）， high humidity （90%±5%）， strong light [（4 500±500） lx] for 10 days; natural storage at room temperature for 18 months; at （40±2） ℃， relative humidity （75%±5%） for 6 months; and Compound Sophorae Mixture was tested according to the quality standard of Compound Sophorae Mixture; observation， tasting method was used to determine traits; the pH value was determined by a pH meter; relative density was detected through the pyknometer method; HPLC method was used to detect the content; microbial limit test was used to determine microbial limit. Results Compared with 0 month， there were no significant changes （P>0.05） in the indicators of the traits， pH content， relative density and microbial limit inspection in each time point in influencing factor test （0， 5， 10 d）， accelerated test （0， 1， 2， 3， 6 months） and long-term test （0， 3， 6， 9， 12， 18 months）， and the content changes were within the qualified range. Conclusion The effective period of the Compound Sophorae Mixture is tentatively 12 months， and it should be stored in a dry and cool place.

〔Keywords〕 Compound Sophorae Mixture; stability; influencing factor test; accelerated test; long-term test

復(fù)方苦參合劑是以華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院中西結(jié)合科二十多年治療潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis， UC）常用經(jīng)驗(yàn)方制成，由苦參5 g、地榆炭5 g、青黛1 g、白及3 g、甘草3 g組成，具有清熱解毒、燥濕殺蟲(chóng)、生肌止血、消腫斂瘡等功效，適用于中醫(yī)痢疾及西醫(yī)UC活動(dòng)期（濕熱證）、克隆恩病或放射性腸炎患者的口服治療[1-3]。通過(guò)長(zhǎng)期的臨床應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)研究[4-6]發(fā)現(xiàn)，復(fù)方苦參合劑可祛大腸濕熱穢濁之邪，促進(jìn)腸黏膜糜爛、潰瘍的愈合，修復(fù)腸道黏膜屏障，減輕腸道的炎癥反應(yīng)，改善機(jī)體低下的免疫功能狀態(tài)。臨床治療UC患者3 000多例，療效顯著，有效率達(dá)96%以上，其療效優(yōu)于臨床常用的同類中西醫(yī)藥物[7-10]。因此，復(fù)方苦參合劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用顯得尤為重要和必要，為確保臨床用藥安全有效，本研究將依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部通則9001項(xiàng)下原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則[11]，對(duì)復(fù)方苦參合劑進(jìn)行穩(wěn)定性考察，目前復(fù)方苦參合劑已取得湖北省醫(yī)療機(jī)構(gòu)注冊(cè)批件，本研究將為進(jìn)一步的新藥研究開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

1.1? 儀器

Waters2695高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）;BT25S型十萬(wàn)分之一分析天平（德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;AR1140/C萬(wàn)分之一分析天平（美國(guó)奧豪斯公司）;ZY-600U薄層色譜自動(dòng)成像分析系統(tǒng)（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開(kāi)發(fā)公司）;LHH-80SD藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;CSH-111GD-IPM藥品強(qiáng)光紫外照射試驗(yàn)箱（重慶創(chuàng)測(cè)科技有限公司）。

1.2? 試劑

復(fù)方苦參合劑由武漢協(xié)和醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)，批號(hào)：20181015、20181017、20181022、20181112、20181114、20181116;苦參堿對(duì)照品（批號(hào)：110805-201709，純度98.7%）、氧化苦參堿對(duì)照品（批號(hào)：110780-201508，純度92.5%）、槐定堿對(duì)照品（批號(hào)：110784-201706，純度98.4%）、苦參對(duì)照藥材（批號(hào)：121019-201708）、白及對(duì)照藥材（批號(hào)：121262-201706）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，所有試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1? 性狀考察

按復(fù)方苦參合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)“性狀”項(xiàng)下描述進(jìn)行考察，觀察復(fù)方苦參合劑色澤、氣味、有無(wú)變質(zhì)現(xiàn)象。本品為棕褐色的液體;有少量搖之易散的沉淀，氣微香，味苦。具體檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1-3。

2.2? 薄層色譜鑒別

2.2.1? 苦參的鑒別? 取復(fù)方苦參合劑10 mL，加氨水調(diào)節(jié)pH=11，置分液漏斗中，用二氯甲烷振搖提取3次，每次20 mL，合并提取液，蒸干，殘?jiān)佣燃淄? mL溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對(duì)照品，加二氯甲烷制成0.5 mg/mL的苦參堿對(duì)照品溶液。取槐定堿對(duì)照品，加乙醇制成0.2 mg/mL的槐定堿對(duì)照品溶液。

按照薄層色譜法（《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部通則0502）試驗(yàn)[11]，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-濃氨試液（2∶4∶3∶0.2）為展開(kāi)劑，飽和5 min，展開(kāi)，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。在日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖1。檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1-3。

2.2.2? 白及的鑒別? 取復(fù)方苦參合劑 20 mL，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮至 1 mL，作為供試品溶液。另取白及對(duì)照藥材1 g，加70%甲醇20 mL，超聲處理30 min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使之溶解，按樣品同法制成對(duì)照藥材溶液。

按照薄層色譜法（《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部通則0502）試驗(yàn)[11]，吸取供試品溶液5～10 μL、對(duì)照藥材溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇（6∶2.5∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱數(shù)分鐘，放置30～60 min。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖2。檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1-3。

2.3? 相對(duì)密度測(cè)定

按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部相對(duì)密度檢查法（通則0601）測(cè)定[11]。檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1～3。

2.4? pH值測(cè)定

按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部pH檢查法（通則0631）測(cè)定[11]。檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1-3。

2.5? 含量測(cè)定

按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法測(cè)定[12-13]。本品每1 mL含苦參堿、氧化苦參堿總計(jì)，不得少于 0.50 mg。見(jiàn)圖3。

2.5.1? 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)? 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液（81∶8∶11）為流動(dòng)相;柱溫為30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。

2.5.2? 對(duì)照品溶液的制備? 取苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，以乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液（81∶8∶11）混合溶液分別制成每1 mL含苦參堿78.96 μg、氧化苦參堿74.00 μg的溶液，即得。

2.5.3? 供試品溶液的制備? 精密量取離心（12 000 r/min，10 min，離心直徑10 cm）后的本品上清液2 mL，加濃氨溶液0.2 mL、飽和氯化鈉溶液1.0 mL;用二氯甲烷振蕩提取4 次，每次5 mL，合并提取液，蒸干，殘?jiān)? mL二氯甲烷溶解后上堿性氧化鋁柱（100～200目，5 g，內(nèi)徑10 mm），用二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇（7∶3）各20 mL洗脫，收集兩次的洗脫液，蒸干，殘?jiān)粤鲃?dòng)相溶解并定容至10 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.5.4? 測(cè)定方法? 精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1-3。

2.6? 微生物限度檢查

按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部微生物限度檢查法檢查[11]。結(jié)果見(jiàn)表1～3。

2.7? 影響因素試驗(yàn)

將復(fù)方苦參合劑（批號(hào)：20181112）置于高溫（60 ℃）、高濕（90%±5%）、強(qiáng)照射[（4 500±500）lx]下10 d后，分別于第0、5、10天取樣，檢測(cè)性狀、薄層鑒別、pH值、相對(duì)密度、含量、微生物限度。

復(fù)方苦參合劑（批號(hào)：20181112）在不同時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），該藥物在高溫、高濕以及強(qiáng)光照射下穩(wěn)定性較好。見(jiàn)表1。

2.8? 加速試驗(yàn)

采用鈉鈣玻璃輸液瓶包裝3批復(fù)方苦參合劑，于（40±2） ℃、相對(duì)濕度（75%±5%）條件下貯藏6個(gè)月，分別于第1、2、3、6個(gè)月末取樣，檢測(cè)性狀、相對(duì)密度、pH值、微生物限度檢查。

經(jīng)檢測(cè)，各項(xiàng)指標(biāo)均合格，在不同時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），苦參堿、氧化苦參堿的含量稍有上升趨勢(shì)，但變化趨勢(shì)不明顯，RSD均小于5.0%。見(jiàn)表2、圖4。

2.9? 長(zhǎng)期試驗(yàn)

采用鈉鈣玻璃輸液瓶包裝3批復(fù)方苦參合劑，于室溫下自然貯存18個(gè)月，分別于第3、6、9、12、18個(gè)月取樣，檢測(cè)性狀、相對(duì)密度、pH值、微生物限度檢查。

各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均合格，在不同時(shí)間點(diǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），苦參堿、氧化苦參堿的含量1～18個(gè)月間變化趨勢(shì)不明顯，均在合格范圍，RSD均小于5.0%。見(jiàn)表3、圖5。

3 討論

苦參為復(fù)方苦參合劑方中君藥，現(xiàn)代藥理研究[14]表明，苦參煎劑具有抑菌、抗炎、升高白細(xì)胞等功效;氧化苦參堿、苦參堿為苦參的主要成分，具有抑制體液免疫和調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫的作用[15]，是方中主要藥物活性成分，在加速試驗(yàn)中，其總量變化隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而稍有上升，在長(zhǎng)期試驗(yàn)中沒(méi)有明顯的變化，這些數(shù)據(jù)充分說(shuō)明二者之間的相互轉(zhuǎn)化，所以選擇苦參堿及氧化苦參堿的總量為檢測(cè)指標(biāo)能更好地控制藥物的質(zhì)量。復(fù)方苦參合劑采用鈉鈣玻璃輸液瓶包裝，在高溫（60 ℃）、高濕（90%±5%）、強(qiáng)光[（4 500±500） lx]照射下10 d后;在室溫自然貯存18個(gè)月;于（40±2） ℃、相對(duì)濕度（75%±5%）條件下貯存6個(gè)月，按《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部合劑“通則”項(xiàng)下[11]檢測(cè)均符合本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求;而含量是合劑的主要檢測(cè)項(xiàng)，故本實(shí)驗(yàn)將作為穩(wěn)定性研究的關(guān)鍵檢測(cè)指標(biāo)，影響因素、加速穩(wěn)定性、長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)中的含量變化趨勢(shì)平緩，RSD均小于5.0%。根據(jù)《湖北省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)管理實(shí)施細(xì)則》附件九“醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑使用期限規(guī)定”，結(jié)合本品穩(wěn)定性試驗(yàn)研究結(jié)果，暫定復(fù)方苦參合劑的有效期為12個(gè)月，陰涼處保存。

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