UPLC法測(cè)定阿奇霉素分散片中阿奇霉素含量的研究

徐凱 藍(lán)美英 石明睿 鄭曉斌

（麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠 廣東珠海 519090）

1 前言

阿奇霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，用于敏感細(xì)菌所引起的上呼吸道、下呼吸道、皮膚和軟組織等感染[1]。阿奇霉素分散片臨床應(yīng)用廣泛，在肺炎支原體感染[2]、宮頸炎[3]和尿道炎[4]等治療方面均有應(yīng)用。阿奇霉素分散片中阿奇霉素的含量測(cè)定方法主要有旋光法[5]、HPLC法[6]和分光光度法[7]，其中，旋光法檢測(cè)迅速，但需要較穩(wěn)定的環(huán)境溫度；HPLC法測(cè)定出峰時(shí)間較晚，檢測(cè)周期較長(zhǎng)；分光光度法需用硫酸顯色后再檢測(cè)，其專屬性有待提高。超高效液相色譜技術(shù)（UPLC）具有超高效、超高分離度、超高靈敏度和試劑用量少等特點(diǎn)[8]，在藥物分析方面應(yīng)用廣泛[8-9]。為減少試劑使用量進(jìn)而減少對(duì)環(huán)境的破壞，更加快速、方便和準(zhǔn)確的獲得檢測(cè)結(jié)果，本文采用UPLC法對(duì)阿奇霉素分散片中阿奇霉素的含量測(cè)定進(jìn)行了研究。

2 儀器與試藥

儀器：WATERS ACQUITY Arc超高效液相色譜儀；MS105DU電子天平。

試藥：阿奇霉素分散片（藥店購買，批號(hào)：27420 0305）；阿奇霉素（批號(hào)：130593-202004，含量94.3%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈為色譜純；水為自制純化水。

3 方法

3.1 色譜條件

色譜柱：WATERS ACQUITY BEH C18，其中柱規(guī)格為50×2.1 mm，粒徑1.7μm；流動(dòng)相：稱取4.6 g磷酸二氫鉀，用1L水溶解后，用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值到7.5作為A相，乙腈作為B相，A相與B相的比例為38∶62；柱溫設(shè)成40℃；流速0.3 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；進(jìn)樣量4μL。

3.2 對(duì)照品溶液配制

取流動(dòng)相做稀釋劑，精密稱取一定量阿奇霉素對(duì)照品，用稀釋劑制得均一溶液（濃度為1 mg/mL），用作對(duì)照品溶液。

3.3 供試品溶液配制

取20片樣品，置于研缽中用研棒研磨，得到藥品細(xì)粉，精密稱取相當(dāng)于50 mg阿奇霉素的細(xì)藥粉，轉(zhuǎn)移至50 mL的容量瓶中，添加25 mL乙腈，振搖20 min，添加流動(dòng)相至刻度后輕輕振搖，把搖勻的液體倒適量于離心管中離心，上清液作為供試品溶液。

4 結(jié)果

4.1 專屬性試驗(yàn)

將樣品置于研缽中用研棒研磨，得到藥品細(xì)粉，精密稱取相當(dāng)于50 mg阿奇霉素的藥粉，共稱5份，轉(zhuǎn)移至50 mL的容量瓶里，添加25 mL乙腈，分別將5份樣品做酸、堿、高溫、氧化和光照破壞后添加流動(dòng)相至刻度，輕輕振搖至溶液均勻，離心后進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果色譜圖中阿奇霉素與前后色譜峰的分離度都達(dá)到定量要求（>1.5），純度分析顯示純度符合含量測(cè)定的要求。

4.2 精密度試驗(yàn)

連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定一份對(duì)照品溶液，結(jié)果顯示6次連續(xù)測(cè)定得到的峰面積RSD為0.61%，說明儀器的精密度達(dá)到測(cè)定要求。

4.3 線性范圍考察

精密稱取一定重量的阿奇霉素對(duì)照品，用流動(dòng)相作稀釋劑制得標(biāo)準(zhǔn)液1（1.703 mg/mL），再取適當(dāng)體積的標(biāo)準(zhǔn)液1用流動(dòng)相配制1.363、1.022、0.6813和0.3406 mg/mL的溶液，記為標(biāo)準(zhǔn)液2、3、4和5。分別進(jìn)樣測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液1、2、3、4和5，用峰面積對(duì)濃度作線性回歸，得到方程為Y=291001X-468，r為0.9999。結(jié)果顯示阿奇霉素進(jìn)樣4μL、檢測(cè)濃度為0.3406～1.703 mg/mL時(shí)線性良好。

4.4 溶液穩(wěn)定性

取阿奇霉素分散片，按3.3步驟制得供試品溶液，分別在配制后的第0、1、2、3和5 h進(jìn)行測(cè)定。把各個(gè)時(shí)間點(diǎn)峰面積與0 h峰面積計(jì)算比值，結(jié)果顯示比值均在98.0%～102.0%范圍內(nèi)，表明供試品溶液配制后在室溫5 h內(nèi)任何時(shí)間進(jìn)樣測(cè)定對(duì)測(cè)定結(jié)果沒有影響。

4.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取阿奇霉素分散片（同一批號(hào)）置于研缽中用研棒研磨，得到藥品細(xì)粉，按3.3制備6份供試品溶液，測(cè)定。根據(jù)記錄的峰面積計(jì)算結(jié)果，得到阿奇霉素平均含量為98.1%，RSD為0.98%，結(jié)果顯示樣品重復(fù)測(cè)定結(jié)果較好。

4.6 回收率試驗(yàn)

將樣品置于研缽中用研棒研磨，得到藥品細(xì)粉，精密稱取相當(dāng)于25 mg阿奇霉素的藥粉，共稱9份，轉(zhuǎn)移到50 mL的容量瓶里，把9份樣品分成3組，每3份樣品作為一組，分別加入對(duì)照品約20、25和30 mg，按供試品溶液配制方法制得測(cè)定回收率的供試溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示本方法準(zhǔn)確度良好。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

4.7 色譜條件耐用性考察

考察色譜條件的耐用性（各個(gè)條件的變化范圍為：流速0.3±0.02mL/min、pH值7.5±0.2，流動(dòng)相比例36∶64和40∶60、柱溫40±2℃、磷酸鹽緩沖液中磷酸二氫鉀濃度4.6±0.2 g/L），將各條件所測(cè)得含量與上文提到的色譜條件測(cè)得含量進(jìn)行比較，結(jié)果顯示比值都在98.0%～102.0%范圍內(nèi)，說明色譜條件發(fā)生了一些細(xì)微變化，并不會(huì)影響含量測(cè)定的結(jié)果。

5 討論

采用PDA檢測(cè)器在190～400 nm范圍對(duì)阿奇霉素對(duì)照品溶液進(jìn)行掃描，根據(jù)吸收曲線設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。

對(duì)流動(dòng)相pH值進(jìn)行優(yōu)化，考察pH值為7.0、7.5、8.0和8.5，結(jié)果顯示pH值調(diào)至7.5時(shí)，色譜峰峰形最好、柱效最高，因此將流動(dòng)相的pH值確定為7.5。

本文對(duì)UPLC法測(cè)定阿奇霉素分散片中阿奇霉素的含量進(jìn)行研究，所建立方法具有快速、準(zhǔn)確、試劑消耗少的特點(diǎn)，進(jìn)行大批量的樣品檢驗(yàn)時(shí)能極大地提高檢驗(yàn)效率，值得應(yīng)用于阿奇霉素分散片的質(zhì)量控制，尤其適用于檢品龐大的藥檢機(jī)構(gòu)。