邊境牧羊犬感染吉氏巴貝斯蟲的診斷和治療

馬鶴嘉，張津朝，李積旭，李英，康明，袁聽，孫亞麗

(1.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，西寧810016；2.重慶三峽職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，重慶404155)

巴貝斯蟲病(Babesiosis)是紅細(xì)胞內(nèi)寄生性原蟲引起的蜱傳性寄生蟲病，巴貝斯蟲隸屬頂復(fù)門梨形蟲綱梨形蟲目巴貝斯科巴貝斯屬，可以感染家畜、野生動(dòng)物和人[1]。犬巴貝斯蟲病的病原體主要有吉氏巴貝斯蟲(Babesia gibsoni)、犬巴貝斯蟲(Babesia canis)、韋氏巴貝斯蟲(Babesia canis vogeli)和犬羅氏巴貝斯蟲(Babesia canis rossi)四種[2]。在我國，犬巴貝斯蟲和吉氏巴貝斯蟲的感染較常見,韋氏巴貝斯蟲和犬羅西巴貝斯蟲少有報(bào)道[3]。吉氏巴貝斯蟲蟲體很小，多位于紅細(xì)胞邊緣或偏中央，大小為1～2.5 μm，呈現(xiàn)橢圓形、圓形、梨籽形、環(huán)形、桿狀等多種形態(tài)，以成對(duì)形態(tài)存在居多[4-6]。

犬巴貝斯蟲病癥狀常呈慢性經(jīng)過，臨床體征從輕度一過性至重度溶血引起死亡的急性疾病不等[7-9]。其致病機(jī)理主要是染蟲紅細(xì)胞裂解導(dǎo)致溶血性貧血，在特殊情況下會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致器官衰竭甚至死亡[10,11]。在早期常表現(xiàn)為間歇熱，喜臥怠動(dòng)，精神沉郁，常出現(xiàn)貧血、黃疸、腹水等一系列癥狀[12]。血液寄生蟲病的診斷方法主要有常規(guī)的病原學(xué)診斷和血清學(xué)診斷，包括PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))、RLB(反向線性斑點(diǎn)雜交)、LAMP(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))、IFAT(間接熒光抗體試驗(yàn))等[12-16]。在本次病例中，根據(jù)臨床癥狀、血常規(guī)檢查以及分子生物檢測結(jié)果，對(duì)一例邊境牧羊犬感染吉氏巴貝斯蟲進(jìn)行了確診及治療。

1 病例介紹

邊境牧羊犬，1.5歲，雄性，體重18kg。于2020年3 月進(jìn)行常規(guī)免疫， 6月進(jìn)行了體內(nèi)驅(qū)蟲，8月進(jìn)行了體外驅(qū)蟲，發(fā)病前未見有異常。2020年9月以來，近一周的時(shí)間，患犬精神沉郁，食欲廢絕，嗜睡，大小便正常。平日飲食不規(guī)律，就診前一天吃過骨頭，并伴有嘔吐等癥狀，直腸體溫為40.3℃，呼吸頻率32次/min，心率129次/min。

2 診斷

2.1血涂片檢查 將患病犬的靜脈抗凝血滴至清潔載玻片上，將其涂成均勻火焰狀薄層。用甲醛固定后，采用吉姆薩染色法染色數(shù)分鐘，蒸餾水清洗后鏡檢。觀察發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞內(nèi)蟲體被染成藍(lán)紫色點(diǎn)狀小體，呈現(xiàn)圓形和梨形。初步診斷為犬巴貝斯蟲病。如圖1所示，患犬血涂片(箭頭標(biāo)記處為蟲體 10×100)A、B圖均為患犬體內(nèi)紅細(xì)胞染色鏡檢結(jié)果。巴貝斯蟲具有多形性，但在染色血涂片的細(xì)胞學(xué)檢查中，通常能觀察到梨狀包涵體。根據(jù)紅細(xì)胞內(nèi)包涵體的大小，將其分為小型(1.0～2.5 μm)或大型(2.6～5.0 μm)巴貝斯蟲。傳統(tǒng)上，將所有大形態(tài)的巴貝斯蟲感染犬指定為犬巴貝斯蟲，而所有小形態(tài)的巴貝斯蟲均認(rèn)定為吉氏巴貝斯。由于并未檢測出紅細(xì)胞中包涵體的大小，因此初步確診為巴貝斯蟲病。

2.2血常規(guī)檢查 表1檢測結(jié)果表明該患病犬紅細(xì)胞數(shù)目下降至1.84 L，其中血紅蛋白下降至44 L，紅細(xì)胞壓積顯示為12.4 L，血小板低至39 L，也低于正常范圍。這些血常規(guī)指標(biāo)主要是由于蟲體寄生在宿主的紅細(xì)胞內(nèi)，所以大量紅細(xì)胞溶血，宿主動(dòng)物產(chǎn)生貧血溶血等臨床癥狀。由于炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞百分比升高至35.5%，中性粒細(xì)胞百分比顯著下降至57.6%。表2生化檢驗(yàn)結(jié)果表明，總膽紅素和球蛋白較正常范圍值分別升高至21 U/L和49 U/L。其肌酐、尿素、血尿素氮/肌酐、總蛋白、白蛋白、丙氮酸轉(zhuǎn)移酶和堿性磷酸酶的指標(biāo)均處在正常范圍之內(nèi)。

表1 血常規(guī)檢測結(jié)果

表2 生化指標(biāo)檢測結(jié)果

2.3PCR診斷 根據(jù)核酸提取試劑盒的說明，按照標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)程序和條件對(duì)采集的抗凝血液樣本提取基因組DNA，利用 PCR方法擴(kuò)增梨形蟲18S rRNA基因[5]。凝膠電泳顯示了與預(yù)測一致的350 bp的核苷酸序列。測序結(jié)果，通過NCBI(National center for biotechnology information)的Blastn比對(duì)分析確定了犬吉氏巴貝斯蟲。采用MEGA7軟件進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化分析(圖2)。結(jié)果顯示了分支長度總和= 1.65819395的最優(yōu)樹。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示(圓點(diǎn)表示本研究中所獲得的序列)，該核苷酸序列與吉氏巴貝斯蟲的相似度100%，可以判定蟲種為吉氏巴貝斯蟲。

圖2 基于18S rRNA基因構(gòu)建的分子系統(tǒng)進(jìn)化樹(★表示本研究中的序列)

3 治療和護(hù)理

首先檢查病犬體表有無蜱蟲，注意犬的頸下部、四肢內(nèi)側(cè)、耳道、毛發(fā)多的地方。使用外用驅(qū)蟲藥(大寵愛或福來恩)抹在叮咬部位，蜱的口器松動(dòng)萎縮就會(huì)自動(dòng)脫落(切忌口器留在皮膚內(nèi))，之后在皮膚破損部位抹上消炎藥并保持清潔。同時(shí)對(duì)患犬肌肉注射血蟲凈，血蟲凈主要清除錐蟲、梨形蟲、焦蟲、附紅細(xì)胞體等。它的主要成分是三氮脒，將該藥配制成5%的溶液，按3mg/kg進(jìn)行深度肌肉注射，病情嚴(yán)重的每隔48h用藥一次，連用3d。此后靜脈注射促進(jìn)紅細(xì)胞生成的藥物并輸血進(jìn)行輔助治療。經(jīng)過22d針對(duì)性治療后，患病犬癥狀趨于好轉(zhuǎn)，嘔吐次數(shù)減少，各項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定在正常范圍內(nèi)，精神狀態(tài)明顯改善，食欲基本恢復(fù)正常。第25d再次血涂片檢測，未發(fā)現(xiàn)蟲體，患病犬痊愈，無復(fù)發(fā)現(xiàn)象。

4 討論和小結(jié)

犬巴貝斯蟲可分為犬吉氏巴貝斯蟲、犬巴貝斯蟲、犬韋氏巴貝斯蟲和犬羅西巴貝斯蟲。本病例根據(jù)患病犬臨床癥狀，結(jié)合血涂片顯微鏡觀察和分子生物學(xué)診斷最終確診為吉氏巴貝斯蟲。巴貝斯蟲裂殖子在宿主紅細(xì)胞內(nèi)度過其生命周期的無性生殖階段，因此會(huì)導(dǎo)致宿主動(dòng)物產(chǎn)生溶血性貧血。要根據(jù)患病犬實(shí)際情況進(jìn)行肌肉注射血蟲凈，嚴(yán)重貧血的輔助輸血治療。要注意和犬瘟、犬細(xì)小病毒病等疾病的鑒別診斷。巴貝斯蟲病治療藥物還有咪唑苯脲、阿奇霉素、阿托伐醌、克林霉素和奎寧等。

蜱的活動(dòng)存在季節(jié)性，要提前做好預(yù)防工作。重點(diǎn)在滅蜱和防蜱上，從而切斷傳播途徑。并且要定期給犬做好體外驅(qū)蟲。在過去十年中，全球許多地區(qū)的犬巴貝斯蟲病例數(shù)量增加，主要原因是對(duì)動(dòng)物福利和疾病問題缺乏認(rèn)識(shí)，經(jīng)濟(jì)條件的限制以及缺乏負(fù)責(zé)任的寵物飼養(yǎng)，增加了蜱傳播疾病的持續(xù)存在。此外，社會(huì)經(jīng)濟(jì)和生態(tài)因素，包括全球化國際貿(mào)易增加、旅游和旅行、氣候變化、犬的流動(dòng)性增加和與野生動(dòng)物接觸，改變了蜱地理性分布和犬巴貝斯蟲病的感染模式。因此，犬巴貝斯病的防控也要從多方面入手，結(jié)合實(shí)際情況，做出合理的防控措施。