基于高效液相色譜法蔬果中滅多威及異丙威的殘留檢測

李智臻 徐冬 李顯波

摘 要：對(duì)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB 23200.112—2018中的方法進(jìn)行改進(jìn)，優(yōu)化樣品前處理方法和液相色譜條件后，能夠同時(shí)定量檢測蔬果中的滅多威及異丙威殘留，且方法具有良好的穩(wěn)定性和精密度。

關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留;色譜法;回收率

農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題已被國家和公眾高度關(guān)注和重視，成為影響消費(fèi)者“菜籃子”安全的焦點(diǎn)問題。特別是蔬菜水果類產(chǎn)品為了防治病蟲害、雜草及其他有害生物的破壞生長，在種植過程中添加殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、促生劑等農(nóng)藥，所以蔬果中不可避免地存在對(duì)人體健康有害的農(nóng)藥殘留[1]。而判斷農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)，檢測監(jiān)管是重要的關(guān)口，農(nóng)殘定量分析的色譜檢測法可為農(nóng)殘精準(zhǔn)把控提供依據(jù)，為消費(fèi)者提供放心蔬果[2]。本文基于食品安全國標(biāo)GB 23200.112—2018，優(yōu)化的高效液相色譜法，準(zhǔn)確測量出蔬果中滅多威及異丙威的農(nóng)藥殘留物的含量[3]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

配有柱后衍生反應(yīng)裝置和熒光檢測器的液相色譜儀（Waters Alliance 2695 FD）;高速勻漿機(jī)（POLYTRON PT3100D）;低速離心機(jī)（LXJ-ILB）、振蕩混勻器（SPEX Geno/Grinder 2010）。

乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、二氯甲烷（分析純）、氯化鈉、鄰苯二甲醛（CAS號(hào)：643-79-8）、氫氧化鈉、十水四硼酸鈉、四氫呋喃、巰基乙醇和固相萃取柱（石墨化炭黑填料500 mg，氨基填料500 mg，6 mL）。

滅多威標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)16752-77-5，純度99.90%）、異丙威標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)2631-40-5，純度99.4%）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理

稱取攪拌打碎試樣20 g（精確至0.01 g）至200 mL玻璃勻漿瓶中，加入40 mL乙腈，用高速勻漿機(jī)勻漿提取2 min，提取液過濾至裝有5 g氯化鈉的50 mL塑料離心管中，旋緊瓶蓋劇烈振蕩1 min后裝入離心機(jī)（3 000 r/min）中離心5 min。準(zhǔn)確吸取20 mL上清液至旋蒸雞心瓶中，40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)近干，加入2 mL甲醇溶解殘余物，待凈化[4]。

1.2.2 樣品凈化

將固相萃取柱用4 mL甲醇與二氯甲烷混合溶液（體積比1︰99）預(yù)淋洗，當(dāng)液面達(dá)到柱吸附層頂時(shí)，加入處理好的樣品，用15 mL離心管收集洗脫液，用3 mL甲醇二氯甲烷混合液清洗旋蒸雞心瓶后過柱，并重復(fù)2次，收集的洗脫液與40 ℃水浴中氮吹蒸發(fā)近干，準(zhǔn)確加入2 mL甲醇溶液，渦旋超聲混勻，用0.22 μm微孔濾膜過濾，待測。

1.2.3 液相色譜儀器條件

流動(dòng)相加入四氫呋喃，其中A相為10%甲醇水溶液+1%四氫呋喃，B相為90%甲醇水溶液+1%四氫呋喃，色譜柱Waters Symmetryshield RP C18柱（粒徑5 μm，250 mm×4.6 mm），柱溫42 ℃，熒光檢測器激發(fā)波長330 nm，發(fā)射波長465 nm[5]。流動(dòng)相梯度設(shè)置如表1所示。

1.2.4 柱后衍生系統(tǒng)條件

溫度95 ℃，衍生溶液A為0.05 mol/L氫氧化鈉;衍生溶液B為鄰苯二甲醛/硼酸緩沖液（OPA試劑），其溶液制備為10.4 g十水四硼酸鈉和0.4 g氫氧化鈉溶于800 mL純水中，加入100 mL溶有30 mg鄰苯二甲醛的甲醇溶液，將兩種溶液充分混合后加入25 μL巰基乙醇混勻即可。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理優(yōu)化

該檢測方法基于GB 23200.112—2018，在樣本提取方面將國家標(biāo)準(zhǔn)方法的振蕩后靜置30 min等待鹽析分層，優(yōu)化為振蕩后離心加速鹽析分層，從而使上清液更加澄清，同時(shí)減少不必要的等待時(shí)間。在樣品濃縮方面，國家標(biāo)準(zhǔn)方法采用高溫水浴氮吹的方式，會(huì)導(dǎo)致提取液飛濺至氮吹針上，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果降低且蒸發(fā)效率低，同時(shí)高溫會(huì)增加實(shí)驗(yàn)室環(huán)境危險(xiǎn)性。該實(shí)驗(yàn)優(yōu)化為40 ℃水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸干，溫和操作避免提取液飛濺、污染和成分損失，減壓蒸發(fā)的效率高于傳統(tǒng)的高溫氮吹形式，縮短實(shí)驗(yàn)前處理時(shí)間，提高效率。

2.2 液相色譜條件優(yōu)化

GB 23200.112—2018方法的流動(dòng)相為純水和甲醇，本方法在流動(dòng)相加入了少量的1%四氫呋喃。經(jīng)對(duì)比試驗(yàn)驗(yàn)證表明，四氫呋喃在反相色譜中具有很強(qiáng)的洗脫能力，加入1%四氫呋喃的流動(dòng)相提升農(nóng)藥的分離度，峰型得到改善。不過由于四氫呋喃的自身不穩(wěn)定性，應(yīng)避免使用生產(chǎn)日期過久的試劑，同時(shí)四氫呋喃本身需在干燥避光條件下保存，流動(dòng)相也應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.3 樣品分析及回收率

在蔬果樣品中加入不同濃度的滅多威及異丙威進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)添加檢測。其濃度分別為0.05 mg/kg、0.20 mg/kg。試樣分析獲得的蔬果（菠菜、蘋果）中農(nóng)藥添加回收率及精密度結(jié)果見表2。由表2結(jié)果可知，對(duì)于菠菜全部農(nóng)藥回收率最低為73.3%，最高為74.7%，對(duì)于蘋果全部農(nóng)藥回收率最低為80.2%，最高為87.7%。精密度均未超過10%，證明該方法有較高的精密度，且各水平回收率基本一致，具備比較穩(wěn)定的前處理和儀器條件，能夠分析樣品中農(nóng)藥殘留的情況。

3 結(jié)論

因異丙威和滅多威均為廣譜速效殺蟲劑，因殘存期短的特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品種植中，但不合理使用會(huì)存在農(nóng)殘超標(biāo)問題，影響食品的安全性。該檢測方法選取菠菜為代表性蔬菜，蘋果為代表性水果，采用振蕩離心分層澄清、40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)減壓蒸干的樣品處理，通過液相色譜流動(dòng)相添加1%四氫呋喃的定量檢測，能夠同時(shí)獲得精準(zhǔn)的兩種農(nóng)藥的殘留數(shù)值，具有良好的穩(wěn)定性和精密度。并且該方法相對(duì)國標(biāo)前處理操作更加簡便實(shí)用，且改善了部分實(shí)驗(yàn)操作中的不穩(wěn)定性因素。

參考文獻(xiàn)

[1]張秀花，苑婷婷，李季，等.蔬菜中農(nóng)藥殘留快速檢測與定量檢測結(jié)果符合性分析[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2020，11（4）：1281-1286.

[2]王麗娜.農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)研究[J].農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣，2020，51（4）：54.

[3]國家衛(wèi)生健康委員會(huì)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部，國家市場監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中9種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-柱后衍生法：GB 23200.112—2018.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2018.

[4]李彩均.高效液相色譜法同時(shí)檢測蔬菜7中農(nóng)藥殘留的方法[J].現(xiàn)代食品，2017，7（4）：97-100.

[5]王小芳.等.高效液相色譜柱后衍生法測定化妝品中的甲萘威[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2017（10）：2905-2907.