河南省豫北地區(qū)副豬嗜血桿菌分子流行病學(xué)調(diào)查與分析

王 翠，劉 敏，靳 冬，王英華

（河南省動物疫病預(yù)防控制中心，河南 鄭州 450000）

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌引起的一種新發(fā)細菌性傳染病。該病的主要感染對象是斷奶前后的仔豬。發(fā)病的仔豬常常表現(xiàn)為漿膜炎，關(guān)節(jié)炎和腦膜炎等癥狀。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)副豬嗜血桿菌的血清型已達到15種，有些血清型比較常見，如4和5型，有些血清型比較稀有。該病的傳染源是發(fā)病的豬和帶有病原菌的豬。健康豬群接觸了被副豬嗜血桿菌污染的飼料，墊料等，都會引發(fā)此病的發(fā)生和傳播，該病的發(fā)生和流行給當(dāng)?shù)氐酿B(yǎng)豬行業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。本文以我們收集的6個地市無害化處理廠的408份樣本檢測結(jié)果為依據(jù)，分析豫北地區(qū)副豬嗜血桿菌感染情況，為我省副豬嗜血桿菌的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 病料的收集 在本次調(diào)查中，我們收集的樣本是取自6個地市無害化處理廠的病死豬組織，共有樣本408份，其中樣本組成主要是病死豬的脾臟，肺臟，腎臟，肝臟等，樣本收集后冷凍保存。

1.2 主要儀器設(shè)備和試劑 在本次檢測當(dāng)中所用到的儀器設(shè)備有熒光定量PCR儀（購自ABI）、核酸提取儀（購自西安天隆生物）、生物安全柜（購自美國熱電）、組織研磨儀（購自上海凈信）、恒溫水浴鍋（購自美國熱電）等。所用到的試劑有核酸提取試劑盒（西安天隆生物），副豬嗜血桿菌核酸檢測試劑盒（萊普生）。

1.3 病料的處理和核酸提取 我們將采集的病料剪切成黃豆大小的肉粒，放入組織研磨管中，往研磨管中加入1mLPBS生理鹽水和一顆研磨鋼球，并將其放入研磨儀中進行充分研磨，之后用離心機將其離心，析出上清液。在生物安全柜中，用移液器抽取組織上清液200μL，加入到西安天隆公司生產(chǎn)的全自動核酸提取試劑盒中，另外再加入20μL蛋白酶K，放入核酸提取儀中提取核酸。等30min后，將抽提到的核酸轉(zhuǎn)移到96孔板上，并將96孔板放入冰箱保存。

1.4 PCR擴增 將副豬嗜血桿菌熒光定量PCR擴增試劑盒放在室溫融化后，按照說明書進行配制反應(yīng)液，然后往反應(yīng)板中加入核酸和陰性，陽性對照，并按照說明書給定的程序進行設(shè)置，反應(yīng)程序如下：95℃10min，1個循環(huán)；95℃5s，60℃30 s，40個循環(huán)，并收集熒光信號；20℃2min冷卻，待反應(yīng)結(jié)束后，對檢測結(jié)果進行分析。

2 結(jié)果

2.1 PCR檢測結(jié)果 我們用熒光定量PCR技術(shù)對所收集的408份病死豬樣本進行檢測分析，發(fā)現(xiàn)，這408份樣本的總體陽性數(shù)為220，總體陽性率為54%，其中各個地市的陽性數(shù)分別為：52，49，28，57，42，43，陽性率分別為：49%，48%，61%，63%，42%，58%（見表1）。

表1 豫北地區(qū)副豬嗜血桿菌感染情況

3 討論與分析

本次對6個地市無害化處理廠收集的408份樣本進行檢測發(fā)現(xiàn)，這6個地市的樣本均呈副豬嗜血桿菌核酸陽性，其中陽性率最高的是D市，高達63%，陽性率最低的是E市，陽性率為42%。不同地區(qū)間，副豬嗜血桿菌陽性率之間的差異非常明顯。另外，我們將這一數(shù)據(jù)與近3年同期數(shù)據(jù)相比發(fā)現(xiàn)，我省這6地市的副豬嗜血桿菌的整體陽性率逐年下降。這可能與2018年國內(nèi)各地相繼暴出非洲豬瘟后，養(yǎng)殖場對疫病的防控達到前所未有的重視有關(guān)。在進行流行病學(xué)調(diào)查的時候我們發(fā)現(xiàn)，無害化處理廠中的副豬嗜血桿菌陽性豬均有心包炎和關(guān)節(jié)炎，且這些病死的豬多數(shù)是斷奶前后的仔豬，與仔豬免疫系統(tǒng)發(fā)育不健全，易受細菌病毒感染有關(guān)。雖然市場上有副豬嗜血桿菌疫苗，但是臨床上的試驗證明，這種疫苗的免疫保護效果并不是很理想。因此，對于該病的防控，主要在于預(yù)防。預(yù)防本病和其他疫病最基本的辦法還是加強豬群的飼養(yǎng)管理，提高豬群的免疫力。