云南地區(qū)月季灰霉菌致病力及抗藥性鑒定

韓洋琳，李思思，袁文斌，劉家訊，賀水蓮，吳紅芝

摘要：【目的】明確云南地區(qū)月季灰霉菌的致病力及對(duì)不同殺菌劑的抗藥性，為生產(chǎn)上月季灰霉病的有效防控提供指導(dǎo)?！痉椒ā坎捎脝捂叻蛛x法從云南15個(gè)月季切花主產(chǎn)區(qū)灰霉病株上分離月季灰霉菌株，將灰霉菌株孢子懸浮液無(wú)創(chuàng)傷接種于月季品種粉紅雪山完整花瓣上，通過(guò)測(cè)量花瓣病斑面積大小鑒定不同灰霉菌株的致病力;將灰霉菌株菌絲塊接種于添加有不同殺菌劑的PSA培養(yǎng)基中，通過(guò)計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率（抑菌率）鑒定月季灰霉菌對(duì)甲基硫菌靈、腐霉利、啶菌惡唑、吡唑醚菌酯、啶酰菌胺、嘧菌環(huán)胺和吡噻菌胺7種不同類型殺菌劑的抗藥性?！窘Y(jié)果】從云南地區(qū)15個(gè)月季主產(chǎn)區(qū)采集的灰霉病株中分離獲得141株灰霉菌株，根據(jù)月季灰霉病田間癥狀、菌株形態(tài)特征及顯微特征判定屬于葡萄孢屬（Botrytis spp.）真菌。不同灰霉菌株致病力差異明顯，病斑面積為3.10～781.50 mm2，未檢測(cè)到完全不致病的灰霉菌株，弱致病力灰霉菌株較少。來(lái)自不同切花產(chǎn)區(qū)的灰霉菌株致病力差異不明顯。月季灰霉菌株對(duì)不同殺菌劑的敏感性為：啶菌惡唑（吡啶惡唑啉類）>吡唑醚菌酯（甲氧基丙烯酸酯類）>嘧菌環(huán)胺（苯胺嘧啶類）>啶酰菌胺（煙酰胺類）>腐霉利（二甲酰亞胺類）>吡噻菌胺（酰胺類）>甲基硫菌靈（苯并咪唑類），其中啶菌惡唑、吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺對(duì)灰霉菌的抑制效果最好，抑菌率分別為95.49%、85.78%和77.70%;啶酰菌胺和腐霉利的效果次之，抑菌率為69.73%和64.37%;甲基硫菌靈和吡噻菌胺的效果最差，抑菌率僅為44.36%和56.16%?！窘Y(jié)論】云南地區(qū)不同月季灰霉菌的致病力差異明顯，月季灰霉菌株的致病力與菌株采集地區(qū)無(wú)關(guān)。啶菌惡唑、吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺可作為目前云南地區(qū)月季切花生產(chǎn)中灰霉病防治的主要藥劑。

關(guān)鍵詞： 月季灰霉病;殺菌劑;抗藥性;致病力;云南

中圖分類號(hào)： S436.81? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2021）09-2489-09

Identification of pathogenicity and fungicide resistance of Botrytis cinerea on rose in Yunnan

HAN Yang-lin， LI Si-si， YUAN Wen-bin， LIU Jia-xun， HE Shui-lian， WU Hong-zhi*

（College of Landscape Architecture and Horticulture， Yunnan Agricultural University， Kunming? 650201， China）

Abstract：【Objective】Identified the pathogenicity and fungicide resistance of Botrytis cinerea strains from cut roses in Yunnan， and provided the basis for effective prevention and control of B. cinerea in rose production. 【Method】Strains of B. cinerea were isolated from 15 main rose cut flower producing areas in Yunnan by single spore isolation method. The spore suspension was inoculated on the complete petals of rose cultivar Pink Snow Mountain non-invasively. The pathogenicity of different strains of B. cinerea was identified by measuring the area of petal lesion. The mycelium was inoculated in PSA medium with different fungicides to control B. cinerea. Through the calculation of mycelial growth inhibition rate（antibacterial rate）， the resistance of B. cinerea to thiophanate methyl， procymidone， dinitroxazole， pyrazoxystrobin， picrylamide， azoxycycline and pyrthifenamide was identified. 【Result】A total of 141 isolates collected from 15 main rose producing areas in Yunnan were determined to be Botrytis spp. according to the field symptoms， morphological characteris-tics and microcharacteristics of cut rose. There were obvious differences in pathogenicity among different strains of B. cinerea， with the lesion area of 3.10-781.50 mm2. No completely non-pathogenic strains were detected， and a few weak pathogenic strains were detected. There was no obvious difference in the pathogenicity of B.cinerea strains from diffe-rent cut flower producing areas. The sensitivity of B. cinerea to seven main fungicides for controlling B. cinerea were as follows： pyridoxazole（pyridoxazoline）>pyrazoxystrobin （methoxyacrylate）>pyrimethanil （anilinopyrimidine）>pichiani-lamide（nicotinamide）>procymidone（diformylimine）>pyrthiazolamide（amide）>thiophanate methyl（benzimidazole）. Inhibition effects of pyridoxazole， pyrazoxystrobin and pyrimethanil were the best， the inhibition rates of mycelium growth were 95.49%，85.78% and 77.70% respectively. Followed by pichianilamide and procymidone， the inhibition rates of mycelium growth were 69.73% and 64.37% respectively. The inhibition effects of pyrthiazolamide and thiophanate methyl were the worst，the inhibition rates of mycelium growth were 44.36% and 56.16% respectively. 【Conclusion】The pathogenic difference B. cinerea strains on cut rose in Yunnan is obvious. The pathogenicity of B. cinerea on cut rose in Yunnan is not related to the place where the strain was collected. Pichiazole， pyrazoxystrobin and pyrimethanil can be used as the main fungicides to control Botrytis cinerea in cut rose production in Yunnan.

Key words： rose gray mold; fungicide; drug resistance; pathogenicity; Yunnan

Foundation item： National Key Research and Development Program of China（2018YFD1000407）;Yunnan Key Science and Technology Project（202102AE090001）; Academician Expert Workstation Project of Yunnan Science and Technology Department （2018IC098）

0 引言

【研究意義】灰霉病是由葡萄孢屬真菌（Botrytis spp.）引起的死體營(yíng)養(yǎng)型真菌病害（尹大芳，2015），灰霉病菌具有極強(qiáng)的腐生性和較長(zhǎng)的潛伏期，其寄主范圍廣泛，可侵染1400多種寄主植物（Fillinger and Elad，2016），其中包括大量花卉、蔬菜和水果，是世界范圍內(nèi)分布最廣、為害最嚴(yán)重、造成經(jīng)濟(jì)損失最大的植物病原菌之一，也是引起采后植物病害的重要病原菌，灰霉菌被列為世界第二大植物真菌病害（鄭媛萍，2018）。月季是我國(guó)十大傳統(tǒng)名花之一，月季切花占世界切花總數(shù)的30%～32%，被稱為“花中皇后”。云南是全球三大鮮切花產(chǎn)區(qū)之一，鮮切花種植面積及產(chǎn)量均位居全球第一，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)占有率超過(guò)70%。月季切花是云南生產(chǎn)量最大的花卉，據(jù)云南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳統(tǒng)計(jì)，2017年云南月季切花種植面積6593 ha，產(chǎn)量49.7億支，占云南省鮮切花產(chǎn)量的45.1%，出口到亞洲和歐洲等46個(gè)國(guó)家和地區(qū)，在國(guó)際貿(mào)易中占有重要地位（呂和君，2018）。灰霉病是月季生產(chǎn)中常見(jiàn)且危害嚴(yán)重的一種真菌性病害，被侵染的月季花瓣產(chǎn)生褐色腐爛及灰色霉層，嚴(yán)重影響切花品質(zhì)（郎立新和蔣蘭玲，2006）?；颐共【哂械蜏刂虏⌒?。月季切花運(yùn)輸過(guò)程中需低溫高濕環(huán)境，低溫可抑制大多數(shù)病菌擴(kuò)散，但不能抑制灰霉菌，灰霉病被稱為月季切花采后的“癌癥”。因此，研究月季灰霉病菌及其防治方法，對(duì)月季切花產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】灰霉菌的致病力分化及對(duì)殺菌劑的抗藥性研究是生產(chǎn)中防治灰霉病的基礎(chǔ)。胡夢(mèng)瓊（2016）、張艷杰等（2017）采用菌絲塊創(chuàng)傷接種法分別測(cè)定藍(lán)莓和葡萄灰霉菌的致病力，結(jié)果表明灰霉菌致病力分化嚴(yán)重且致病力與菌株的形態(tài)、采集地的地理位置、寄主的種類、ISSR指紋圖譜間無(wú)明顯相關(guān)性，與氣候區(qū)具有一定的相關(guān)性。張雙艷等（2019）通過(guò)ITS和RPB2基因聯(lián)合分析對(duì)云南地區(qū)月季灰霉病病原進(jìn)行分類和鑒定，表明引起云南地區(qū)月季灰霉病的主要病原菌為灰葡萄孢（Botrytis cinerea），且種內(nèi)變異十分豐富。目前，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中防治灰霉病仍以化學(xué)防治為主。防治灰霉病的化學(xué)殺菌劑主要有七大類：二甲酰亞胺類、煙酰胺類、苯胺嘧啶類、苯并咪唑類、甲氧基丙烯酸酯類、苯吡咯類和酰胺類。不同類型的殺菌劑作用機(jī)理不同，灰霉菌株產(chǎn)生的抗藥性程度也不相同?；颐咕哂蟹敝晨臁⒎N內(nèi)遺傳變異大和適合度高等特點(diǎn)（王克勤，2000），各種殺菌劑使用之初的防效通常在80%以上，但連續(xù)使用單一殺菌劑導(dǎo)致灰霉菌產(chǎn)生了抗藥性，防治效果下降，已被列為高抗藥性風(fēng)險(xiǎn)病原菌。苯并咪唑類殺菌劑（如多菌靈和甲基硫菌靈等）是最早應(yīng)用于灰霉病防治的化學(xué)殺菌劑，灰霉菌株對(duì)該類殺菌劑已普遍產(chǎn)生抗藥性。張亞等（2016）、趙虎等（2016）通過(guò)最小抑制濃度法發(fā)現(xiàn)湖南和江蘇等地的草莓灰霉病菌已對(duì)多菌靈產(chǎn)生了抗藥性。二甲酰亞胺類殺菌劑（如腐霉利和異菌脲等）是一類廣譜保護(hù)性殺菌劑，可引起病原菌菌株甘油過(guò)量積累，從而改變其體內(nèi)滲透壓，抑制病原菌;灰霉菌株對(duì)該類殺菌劑不同產(chǎn)品間存在正交互抗藥性，抗性菌株多為低、中等抗藥性，且抗性不穩(wěn)定（陳樂(lè)等，2020）。甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（如嘧菌酯和吡唑醚菌酯等）有很高的抗性風(fēng)險(xiǎn)，多數(shù)病原菌使用該類殺菌劑后均會(huì)產(chǎn)生抗藥性。肖婷等（2018）采用區(qū)分劑量法對(duì)上海地區(qū)草莓灰霉病進(jìn)行抗藥性分析，結(jié)果表明供試菌株對(duì)吡唑醚菌酯的抗性頻率較高。苯胺嘧啶類殺菌劑（如嘧菌環(huán)胺和嘧霉胺等）通過(guò)抑制甲硫氨酸的合成進(jìn)而抑制病原菌菌株的菌絲生長(zhǎng)和分生孢子芽管伸長(zhǎng)。戴啟東等（2019）通過(guò)菌絲生長(zhǎng)速率抑制法對(duì)藍(lán)莓灰霉病抗藥性測(cè)定結(jié)果表明，嘧菌環(huán)胺及其復(fù)配劑對(duì)藍(lán)莓灰霉病的抑制效果較好。煙酰胺類殺菌劑（如啶酰菌胺等）與甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑作用機(jī)制相似，但作用靶點(diǎn)不同，不存在交互抗藥性。范飛等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，湖北10個(gè)地級(jí)市中僅有2個(gè)市發(fā)現(xiàn)草莓灰霉菌抗啶酰菌胺菌株，為國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)灰霉菌株對(duì)啶酰菌胺抗性的報(bào)道。吡啶惡唑啉類殺菌劑（如啶菌惡唑）具有保護(hù)與治療雙重作用。啶菌惡唑是一類結(jié)構(gòu)獨(dú)特的新型殺菌劑，具有廣譜和突出的離體殺菌活性，與其他類型的殺菌劑均無(wú)交互抗藥性，暫時(shí)未發(fā)現(xiàn)對(duì)其有高抗藥性的菌株（Zhu et al.，2016）?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，有關(guān)月季灰霉病菌致病力和抗藥性的研究尚未見(jiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采用無(wú)創(chuàng)傷接種法和菌絲生長(zhǎng)速率抑制法分別對(duì)從云南地區(qū)主要月季切花產(chǎn)區(qū)采集的月季灰霉菌株進(jìn)行致病力鑒定，并選用目前國(guó)內(nèi)外灰霉病防治的主要七大類殺菌劑中的六類（甲基硫菌靈、腐霉利、吡唑醚菌酯、啶酰菌胺、嘧菌環(huán)胺和吡噻菌胺）以及國(guó)內(nèi)市場(chǎng)普遍使用的真菌病害防治藥劑啶菌惡唑共7種不同類型殺菌劑進(jìn)行抗藥性測(cè)定，明確月季灰霉菌的致病力分化和抗藥性情況，為云南地區(qū)月季灰霉病的防治提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試灰霉菌株為從云南昆明市、楚雄州、文山州、紅河州和玉溪市等15個(gè)月季切花主產(chǎn)區(qū)的灰霉病株上分離純化獲得。供試月季切花品種為粉紅雪山，由云南省彌勒市品元園藝有限公司提供。接種時(shí)選擇開(kāi)放至第2階段（花瓣伸出萼片0.5～1.0 cm）的花朵，要求花瓣無(wú)損傷、大小均一。通過(guò)查閱文獻(xiàn)和常用殺菌劑市場(chǎng)調(diào)查結(jié)果，選用7種商品化殺菌劑，根據(jù)殺菌劑提供的參考濃度選擇合適的濃度開(kāi)展抗藥性試驗(yàn)（表1）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 培養(yǎng)基配制 馬鈴薯蔗糖瓊脂固體培養(yǎng)基（PSA培養(yǎng)基）：將200 g馬鈴薯切絲，放入燒開(kāi)的蒸餾水中煮軟，4層紗布過(guò)濾，濾液定容至1 L，重新倒入鍋中，加入20 g蔗糖和18 g瓊脂，煮沸，倒入玻璃瓶中，121 ℃高溫高壓滅菌。馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基（PB培養(yǎng)基）：將200 g馬鈴薯切絲，放入燒開(kāi)的蒸餾水中煮軟，4層紗布過(guò)濾，濾液定容至1 L，重新倒入鍋中，加入20 g蔗糖，121 ℃高溫高壓滅菌。

1. 2. 2 灰霉菌株的獲得與保存 采用單孢分離法分離月季灰霉菌株。對(duì)于發(fā)病初期的病株，分離菌株時(shí)將發(fā)病部位用無(wú)菌水清洗，取3 mm×3 mm病健交界處小塊，置于PSA培養(yǎng)基上;對(duì)于發(fā)病后期的病株，分離菌株時(shí)用滅菌后的牙簽在發(fā)病部位挑取病原物，接入PSA培養(yǎng)基中。接種后的培養(yǎng)基放入25 ℃的培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌絲后挑選菌絲相同條件繼續(xù)培養(yǎng)，重復(fù)3～5次后，得到純凈的病原分離物，通過(guò)顯微觀察菌絲和孢子形態(tài)確定為灰霉菌株。

用滅菌打孔器打取純化后培養(yǎng)約5 d的灰霉菌株菌落菌餅，放入裝有20%甘油的凍干管中，標(biāo)明菌株名稱、保存時(shí)間后，于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 3 病原菌致病力鑒定

1. 2. 3. 1 孢子懸浮液制備 純化得到的灰霉菌株于25 ℃黑暗環(huán)境中培養(yǎng)3～4周后產(chǎn)生分生孢子。將配制好的PB培養(yǎng)液濃度稀釋為20%，倒入灰霉菌中，用滅菌接種環(huán)刮取培養(yǎng)基表面的孢子及菌絲，用超細(xì)尼龍網(wǎng)紗（400目）過(guò)濾以除去菌絲殘留物。孢子懸浮液即配即用。用血球計(jì)數(shù)板對(duì)所制備的孢子懸浮液進(jìn)行計(jì)數(shù)，用20% PB將孢子懸浮液的濃度稀釋至1×106個(gè)/mL。

1. 2. 3. 2 接種 在托盤(pán)內(nèi)倒入無(wú)菌水，鋪蓋1層吸水紙，無(wú)菌水不能沒(méi)過(guò)紙面。撕下粉紅雪山完整花瓣放在吸水紙上，每個(gè)花瓣中間接種5 μL的孢子懸浮液，蓋上蓋子。接種后72 h測(cè)量病斑直徑，計(jì)算病斑面積，并進(jìn)行致病力等級(jí)分級(jí)。

灰霉菌株致病力分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（吳紅芝等，2011）：0級(jí)，接種液滴清澈，無(wú)侵染跡象;1級(jí)，菌株開(kāi)始侵染，病斑在接種液滴內(nèi)，0<病斑面積≤20.00 mm2;2級(jí)，侵染擴(kuò)展到液滴外，病斑大小為液滴的2～5倍，20.00<病斑面積≤100.00 mm2;3級(jí)，病斑大于液滴5倍，小于接種花瓣1/2面積，100.00<病斑面積≤350.00 mm2;4級(jí)，病斑超過(guò)接種花瓣面積的1/2，350.00<病斑面積≤700.00 mm2;5級(jí)，接種花瓣幾乎完全被侵染，病斑面積>700.00 mm2。

1. 2. 4 病原菌的抗藥性鑒定 殺菌劑按濃度配制好后與滅菌、冷卻至50 ℃的PSA培養(yǎng)基混勻，以不加殺菌劑的培養(yǎng)基為對(duì)照，倒入培養(yǎng)皿中，每皿15～20 mL;保存的菌株在PSA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)3 d，用打孔器打取菌餅，接種在培養(yǎng)基上，每皿1個(gè)菌餅，每株菌株3個(gè)重復(fù)，倒置在恒溫培養(yǎng)箱中25 ℃黑暗培養(yǎng)。48 h后測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率（抑菌率）。

抑菌率（%）=（對(duì)照菌落直徑-藥劑處理的菌落

直徑）/對(duì)照菌落直徑×100

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用Excel 2007和SPSS 19進(jìn)行整理分析并作圖。

2 結(jié)果與分析

2. 1 月季灰霉病田間癥狀

如圖1所示，月季生長(zhǎng)的各個(gè)階段且花朵、葉片和莖均可發(fā)生灰霉病，其中花朵最易發(fā)病。雨季為灰霉病發(fā)病高發(fā)期，在溫暖潮濕條件下，灰霉孢子長(zhǎng)滿整個(gè)受侵染部位。月季葉片被侵染后，從葉片邊緣向內(nèi)部擴(kuò)散，病部變黃并長(zhǎng)出灰色孢子（圖1-A）?；ɡ俦桓腥竞?，花托腐爛變黑，花蕾停止發(fā)育并長(zhǎng)滿灰色孢子，最后腐爛枯死（圖1-B）?；ǘ浔桓腥竞?，初期花瓣上出現(xiàn)紅色或褐色斑點(diǎn)，有的花朵花瓣邊緣變褐色（圖1-C和圖1-D），侵染后期病部腐爛，長(zhǎng)出灰色孢子（圖1-E）。月季切花在運(yùn)輸過(guò)程中需要低溫高濕的環(huán)境，但此環(huán)境并不能抑制灰霉菌的生長(zhǎng)。切花在運(yùn)輸前或運(yùn)輸過(guò)程被灰霉菌侵染后，在病部會(huì)產(chǎn)生大量孢子，并侵染其他切花，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失（圖1-F）。月季切花無(wú)論在哪個(gè)階段發(fā)病，在高濕條件下被侵染部位長(zhǎng)出灰色霉層是灰霉病的重要癥狀。

2. 2 灰霉菌株分離及致病力分析結(jié)果

從云南省昆明市安寧市、富民縣、晉寧區(qū)、石林縣、宜良縣、祿勸縣和嵩明縣;楚雄州楚雄市和祿豐縣;玉溪市通?？h、紅塔區(qū)和澄江市;文山州丘北縣、紅河州彌勒市和麗江市15個(gè)月季主產(chǎn)區(qū)采集的灰霉病株中分離獲得141株灰霉菌株。根據(jù)月季灰霉病田間癥狀、菌株的形態(tài)特征、顯微特征，判定屬于葡萄孢屬（Botrytis spp.）真菌。

將分離的141株灰霉菌株接種到月季品種粉紅雪山花瓣后，觀察花瓣發(fā)病情況。接種后72 h觀察到清晰的病斑，且不同灰霉菌株間表現(xiàn)出明顯差異，能達(dá)到鑒定不同致病力菌株的效果?；颐咕臧l(fā)病穩(wěn)定，病斑為近似橢圓形的黃色水漬狀，病斑邊界清晰，發(fā)病率為100%（圖2）。

由表2可知，不同灰霉菌株的致病力存在明顯差異。分離得到的141株灰霉菌株中，致病力1級(jí)的菌株7株，占4.96%;致病力2級(jí)的菌株10株，占7.09%;致病力3級(jí)的菌株60株，占42.55%;致病力4級(jí)的菌株59株，占41.84%;致病力5級(jí)的菌株5株，占3.55%。大多數(shù)菌株的致病力在3～4級(jí)，致病力特別弱和特別強(qiáng)的菌株較少，所測(cè)的菌株中無(wú)完全不致病的菌株。菌株SLBQ-5、SMDUS-2、SMDUS-1、PZH-4、SMB-4、YXHT-6和SLBQ-8的病斑面積小于20.00 mm2，致病力弱;菌株SLJY-18、SLJY-16、JNSC-1、SMW-2和YZH-5幾乎完全侵染整張?jiān)录净ò?，致病力?qiáng)。

采集的菌株中來(lái)自昆明市月季主產(chǎn)區(qū)灰霉菌株導(dǎo)致的病斑面積均值為327.88 mm2;玉溪市為360.30 mm2;楚雄州為287.12 mm2;紅河州為316.87 mm2;文山州為371.19 mm2;麗江市為369.23 mm2。不同地區(qū)采集的灰霉菌株病斑面積差異不明顯，表明灰霉菌株的致病力與采集地?zé)o關(guān)。

2. 3 灰霉菌對(duì)不同殺菌劑的抗藥性分析結(jié)果

由表3可看出，不同殺菌劑對(duì)灰霉菌株的抑菌率存在明顯差異。甲基硫菌靈和吡噻菌胺的抑菌效果最差，其中甲基硫菌靈對(duì)灰霉菌的抑菌率為18.9%～65.4%，64.5%的菌株的抑菌率小于50.0%，多數(shù)菌株產(chǎn)生了抗藥性;吡噻菌胺對(duì)供試菌株的抑菌率為28.9%～72.8%，均值為56.16%，其對(duì)灰霉菌雖有抑制效果，但抑菌率偏低，有22.7%的菌株的抑菌率小于50.0%。啶酰菌胺和腐霉利的抑菌效果較好，其中腐霉利對(duì)供試菌株的抑菌率為45.8%～90.5%，有95.0%的菌株的抑菌率大于50.0%;啶酰菌胺的抑菌率為50.5%～89.1%，有49.6%的菌株的抑菌率大于70.0%。嘧菌環(huán)胺、吡唑醚菌酯和啶菌惡唑?qū)颐咕囊种菩Ч詈茫?種殺菌劑對(duì)灰霉菌株的抑制率分別為57.8%～95.3%、65.8%～98.3%和80.4%～100.0%，其中啶菌惡唑的抑菌率均值高達(dá)95.49%，且30.5%的菌株的抑菌率達(dá)100.0%，是理想的殺菌劑。

綜上所述，月季灰霉菌對(duì)殺菌劑的敏感性為：啶菌惡唑>吡唑醚菌酯>嘧菌環(huán)胺>啶酰菌胺>腐霉利>吡噻菌胺>甲基硫菌靈?；颐咕鷮?duì)甲基硫菌靈和吡噻菌胺產(chǎn)生了不同程度的抗性，2種殺菌劑的抑菌效果較差;啶酰菌胺和腐霉利抑制灰霉菌的效果較好;嘧菌環(huán)胺、吡唑醚菌和啶菌惡唑防治云南地區(qū)月季灰霉病的效果最好。

3 討論

3. 1 月季灰霉病菌的致病力特征

李娜（2015）、馮曉菲（2018）通過(guò)對(duì)草莓、黃瓜和番茄灰霉菌株進(jìn)行致病力分化分析，表明不同灰霉菌致病力差異顯著，且灰霉菌株致病力強(qiáng)弱與菌株寄主和地理位置無(wú)關(guān)。周梓良（2015）對(duì)湖北地區(qū)草莓灰霉菌致病力分化研究結(jié)果表明弱致病力菌株數(shù)量極少。本研究顯示月季灰霉菌致病力呈現(xiàn)相似的結(jié)果，不同月季灰霉菌株致病力差異顯著，弱致病力菌株較少，未發(fā)現(xiàn)完全不致病的菌株。

3. 2 月季灰霉病菌致病力測(cè)定適宜方法

灰霉病菌致病力鑒定方法通常采用菌餅接種葉片（李娜，2015）或孢子接種花瓣圓片（Cao et al.，2019）、孢子噴灑植株。月季的花朵是其主要觀賞部位，灰霉病菌的分生孢子、分生孢子梗和菌絲均可侵染花朵，但在田間尤其是月季切花采后運(yùn)輸過(guò)程中灰霉病菌的侵染源主要是分生孢子。采用噴灑植株的接種方式需要的孢子量和植株多、成本高、時(shí)間長(zhǎng)，同時(shí)會(huì)造成接種不均勻等問(wèn)題;花瓣圓片失水率較高易萎蔫。本研究接種材料采用完整無(wú)損傷的月季花瓣進(jìn)行月季灰霉菌致病力鑒定省時(shí)、省力且花瓣不易失水，使鑒定更加高效、準(zhǔn)確。

本研究選擇接種的月季切花品種為粉紅雪山，該品種對(duì)灰霉病菌為中等抗性，能區(qū)分出不同致病力的灰霉菌株?？剐蕴珡?qiáng)的月季切花品種不能準(zhǔn)確篩選出弱致病力的灰霉菌株，抗性較弱的月季切花品種接種后病斑擴(kuò)散較快，而強(qiáng)致病力的灰霉菌株易長(zhǎng)滿整個(gè)花瓣，不易測(cè)量。此外，粉紅雪山花瓣顏色較淺，接種灰霉菌株后發(fā)病穩(wěn)定、病斑邊界清晰，易測(cè)量病斑面積。

3. 3 云南地區(qū)月季灰霉病防治藥劑的選擇

本研究灰霉菌株對(duì)供試殺菌劑的敏感性為：啶菌惡唑>吡唑醚菌酯>嘧菌環(huán)胺>啶酰菌胺>腐霉利>吡噻菌胺>甲基硫菌靈。啶菌惡唑、吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺防治月季灰霉病效果最好，啶酰菌胺和腐霉利效果次之，甲基硫菌靈和吡噻菌胺防效最差。

甲基硫菌靈是最早應(yīng)用于灰霉病防治的化學(xué)殺菌劑，這種20世紀(jì)60年代末便投入使用的殺菌劑在1971年就已發(fā)現(xiàn)抗性菌株。目前，大多數(shù)月季上的灰霉菌株對(duì)甲基硫菌靈均產(chǎn)生了抗藥性，生產(chǎn)上不推薦使用甲基硫菌靈防治灰霉病。嘧菌環(huán)胺和腐霉利這2種殺菌劑先后在遼寧（王猛，2019）、湖北和浙江（盧曉雪等，2018）等地發(fā)現(xiàn)有抗性菌株，且抗性頻率高達(dá)75%（陳樂(lè)等，2020）;吡唑醚菌酯屬于甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，該類殺菌劑具有較高的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，肖婷等（2018）研究表明上海地區(qū)草莓灰霉菌對(duì)吡唑醚菌酯的抗性頻率逐年升高。而在本研究中云南地區(qū)月季灰霉菌對(duì)吡唑醚菌酯、嘧菌環(huán)胺和腐霉利的抑菌率分別為為85.78%、77.70%和64.37%，仍較敏感，原因可能是云南地區(qū)在防治月季灰霉病中對(duì)吡唑醚菌酯、腐霉利和嘧菌環(huán)胺的使用年限或使用頻率不高，該地區(qū)灰霉病病原菌尚未形成高抗變種。啶菌惡唑在本研究中效果最佳，是優(yōu)秀的殺菌劑，奉代力等（2013）、藺菊芬（2013）和趙佳振（2019）對(duì)番茄灰霉病菌的研究、姜彩鴿等（2017）對(duì)葡萄灰霉病菌的研究等也表明啶菌惡唑?qū)颐共〉姆乐涡Ч芎?。因此，生產(chǎn)中可用啶菌惡唑、吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺交替使用防治月季灰霉病，同時(shí)，下一步應(yīng)開(kāi)發(fā)新型化學(xué)殺菌劑復(fù)配劑及生物制劑，以防止灰霉菌株產(chǎn)生較強(qiáng)抗藥性，導(dǎo)致防治效果下降。

4 結(jié)論

云南地區(qū)不同月季灰霉菌的致病力差異明顯，月季灰霉菌株的致病力與菌株采集地區(qū)無(wú)關(guān)。云南地區(qū)月季灰霉菌株對(duì)不同殺菌劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，月季切花生產(chǎn)中可交替使用啶菌惡唑、吡唑醚菌酯和嘧菌環(huán)胺作為目前防治灰霉病的主要藥劑。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）