膠乳免疫比濁法C 反應(yīng)蛋白測定試劑盒的準(zhǔn)確度性能驗(yàn)證

黃燕虹（第一作者，通信作者），張旭（第一作者），潘曉芳，朱秀霞

廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所綜合檢驗(yàn)四室 （廣東廣州 510663）

C 反應(yīng)蛋白（C reactive protein，CRP）是由5個相同的亞單位組成的α 球蛋白，由肝細(xì)胞合成，在胎兒期產(chǎn)生。健康人體的血清中CRP 含量很低，但在細(xì)菌感染、惡性腫瘤、創(chuàng)傷、冠心病等發(fā)生后其含量會急劇升高，并在24～48 h 達(dá)到峰值，CRP 含量可反映炎癥反應(yīng)的劇烈程度，其水平與炎癥嚴(yán)重程度成正相關(guān)，炎癥治愈后含量會顯著降低，濃度在一周內(nèi)可恢復(fù)至正常水平。CRP 雖不能作為特定疾病的檢測指標(biāo)，但其對于各種炎癥、組織損傷和細(xì)菌感染過程以及疾病恢復(fù)期的監(jiān)測與病情評估均具有重要的價值[1-5]。

近年來，CRP 指標(biāo)的檢測已成為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的一種常規(guī)手段，被應(yīng)用于臨床各領(lǐng)域，而評估CRP 測定試劑盒的性能有利于保障CRP 測定試劑盒檢測結(jié)果的有效性和準(zhǔn)確性。本研究旨在探討不同企業(yè)的CRP 測定試劑盒在符合企業(yè)自身技術(shù)要求的前提下，準(zhǔn)確度性能是否符合YY/T 1513-2017《C 反應(yīng)蛋白測定試劑盒》[6]行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 儀器和試劑

儀器：全自動生化分析儀（Beckman Coulter，Inc.，AU680型）。

CRP測定試劑盒：來自14家企業(yè)，本研究中各企業(yè)名稱分別以字母A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N表示，所有試劑盒采用的檢測方法為膠乳增強(qiáng)免疫比濁法、膠乳免疫比濁法或免疫比濁法，試劑盒均由R1和R2組成。

1.2 檢測樣本

檢測樣本包括低、中、高3個濃度。高濃度樣本直接采用的是國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM?-DA474/IFCC 的原液，其靶值濃度為41.2 mg/L；低、中濃度樣本的濃度分別為10.3、20.6 mg/L，均由高濃度樣本稀釋而來。

1.3 檢測方法

根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1513-2017中準(zhǔn)確度的要求，采用AU680全自動生化分析儀和14家企業(yè)的試劑盒，嚴(yán)格按照儀器及試劑盒的操作要求分別對3個濃度的準(zhǔn)確度樣本進(jìn)行檢測，每個濃度分別檢測3次，并計(jì)算3次測量結(jié)果的相對偏差（relative deviation，RD），RD=（檢測值-標(biāo)示值）/標(biāo)示值×100%。

2 準(zhǔn)確度性能驗(yàn)證結(jié)果

14家企業(yè)試劑盒對高濃度樣本檢測結(jié)果的RD均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1513-2017的要求，即在-15%～15%之間；11家企業(yè)試劑盒對中濃度樣本檢測結(jié)果的RD符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，3家企業(yè)|RD|在15%～20%之間；只有8家企業(yè)試劑盒對低濃度樣本檢測結(jié)果的RD符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，而6家不符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，其中，3家企業(yè)|RD|在15%～20%之間，3家企業(yè)|RD|>20%，見表1～3。

表1 14家企業(yè)高濃度樣本準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 14家企業(yè)中濃度樣本準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 原因分析

分析準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同企業(yè)檢測國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM?-DA474/IFCC 的結(jié)果存在較大差異，部分企業(yè)的準(zhǔn)確度測試結(jié)果甚至不符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1513-2017的要求，主要原因如下。（1）部分企業(yè)的產(chǎn)品技術(shù)要求達(dá)不到行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求：行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求采用RD法，而部分企業(yè)采用的是比對實(shí)驗(yàn)的方法；行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求分別計(jì)算3次結(jié)果的RD，而部分企業(yè)則計(jì)算的是3次結(jié)果平均值的相對偏差，未嚴(yán)格按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求執(zhí)行；行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求合理設(shè)置2 ～3個濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而部分企業(yè)只檢測了1個濃度。（2）不同企業(yè)自身的溯源體系不同：從結(jié)果分析，在測定濃度為10.3 mg/L 的國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時，6批結(jié)果均不符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相應(yīng)要求，其中有5批在定標(biāo)時采用的是企業(yè)自身提供的校準(zhǔn)品，表明溯源體系對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度具有一定影響；國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的賦值一般選擇該試劑盒產(chǎn)品所對應(yīng)的國際公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行，但在實(shí)際注冊過程中，每個廠家都會用自己內(nèi)部的溯源過程對準(zhǔn)確度參考品進(jìn)行賦值，即使最高一級的溯源是國際標(biāo)準(zhǔn)品，但最終溯源至準(zhǔn)確度參考品時，整個溯源鏈傳遞越長，引入的不確定度便越大，導(dǎo)致準(zhǔn)確度參考品的值越不準(zhǔn)確，這也可以解釋為什么使用企業(yè)提供的準(zhǔn)確度參考品用來做實(shí)驗(yàn)時，RD符合要求，但測試國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的結(jié)果卻較差。

表3 14家企業(yè)低濃度樣本準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4 小結(jié)

隨著CRP 臨床應(yīng)用的日趨廣泛，十分必要提高CRP 檢測的準(zhǔn)確度。14家企業(yè)CRP 測定試劑盒的準(zhǔn)確度性能驗(yàn)證結(jié)果表明，企業(yè)在產(chǎn)品注冊過程中的檢驗(yàn)方法和要求與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求不一致，未嚴(yán)格按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行注冊檢驗(yàn)。

為了解決不同廠家試劑盒檢驗(yàn)結(jié)果不統(tǒng)一的問題，建議企業(yè)和同行從以下4點(diǎn)進(jìn)行改進(jìn)：（1）相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)委員會可開展國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)培訓(xùn)，深刻解讀和討論標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容，便于企業(yè)更好地理解并執(zhí)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的具體要求；（2）各地醫(yī)療器械技術(shù)審評部門應(yīng)加強(qiáng)對相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的學(xué)習(xí)，統(tǒng)一審評尺度；（3）生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)高度關(guān)注相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的更新，并及時對產(chǎn)品技術(shù)要求做出相應(yīng)的調(diào)整；（4）生產(chǎn)企業(yè)可通過參加原衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評等方式進(jìn)一步確證該試劑體系的臨床符合率[6-8]。

本研究尚存在不足之處，首先，所分析試劑盒數(shù)量較少；其次，所選用的國際標(biāo)準(zhǔn)品較為單一，未引入其他國際公認(rèn)參考品和國家標(biāo)準(zhǔn)品，后續(xù)還需更加深入廣泛地研究予以進(jìn)一步驗(yàn)證。