淺談PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用

趙婧 程琦云 陳依銘

【摘要】在當(dāng)下，PCR技術(shù)已成為一個(gè)最基本且應(yīng)用十分廣泛的技術(shù)，廣泛應(yīng)用于各大領(lǐng)域，如醫(yī)學(xué)診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品行業(yè)、流行病學(xué)、基因工程等。PCR技術(shù)因其靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)而深受廣大醫(yī)學(xué)學(xué)者的喜愛(ài)。在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作中，PCR技術(shù)在保證了樣品檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性的基礎(chǔ)上還節(jié)省了大量的人力、物力和財(cái)力。PCR技術(shù)也因其較高的應(yīng)用價(jià)值被應(yīng)用于細(xì)菌檢驗(yàn)、寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)、病毒檢驗(yàn)等方面，在臨床檢驗(yàn)診斷中作出了極大的貢獻(xiàn)。本文將簡(jiǎn)單介紹一下PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】PCR技術(shù);醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);應(yīng)用

1.PCR與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)

PCR技術(shù)是一種選擇性體外擴(kuò)增DNA或RNA片段的方法，兩個(gè)人工合成的引物序列決定了其特異性。一次變性、退火、延伸的過(guò)程為一個(gè)PCR的循環(huán)，經(jīng)過(guò)25-30個(gè)循環(huán)之后，可使模板DNA片段的數(shù)量呈幾何級(jí)數(shù)倍增。PCR技術(shù)特異性強(qiáng)、敏感性高、快速、簡(jiǎn)便、對(duì)起始材料質(zhì)量要求低，但也存在一些問(wèn)題，例如：可能會(huì)出現(xiàn)少許非擴(kuò)增性異物和引物聚體，常規(guī)的PCR技術(shù)還可能有浪費(fèi)成本、費(fèi)時(shí)費(fèi)力的現(xiàn)象、待檢樣品還易被污染，導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。經(jīng)眾多專(zhuān)家學(xué)者不斷探索與改進(jìn)，如今已探究出多種先進(jìn)的PCR技術(shù)檢驗(yàn)?zāi)Ｊ?，如?shí)時(shí)定量PCR技術(shù)（RT-PCR）、PCR-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、巢式PCR 等。PCR技術(shù)作為一項(xiàng)臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷方法，為臨床疾病的診斷從基因方面提供了更加準(zhǔn)確的診斷依據(jù)，便于檢驗(yàn)的進(jìn)行。

2.PCR技術(shù)在細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用

人體很多疾病都與腸道菌群失調(diào)有關(guān)，一些與腸道感染性疾病有關(guān)的重要細(xì)菌，如志賀氏菌和沙門(mén)氏菌等，它們的發(fā)病率高、傳播速度快、耐藥發(fā)生率高;細(xì)菌傳統(tǒng)檢測(cè)方法是將其培養(yǎng)并用生化和血清學(xué)對(duì)其鑒定，此法檢測(cè)效率不高，因此，檢驗(yàn)人員在改進(jìn)過(guò)去傳統(tǒng)檢測(cè)方法的同時(shí)結(jié)合時(shí)代技術(shù)的發(fā)展，引進(jìn)了更加先進(jìn)、靈敏度更高的檢測(cè)方法，如PCR技術(shù)。即我們可以把腸道細(xì)菌特異性靶基因作為研究對(duì)象，設(shè)計(jì)并合成PCR引物，以臨床微生物樣本的基因組DNA為模板，用PCR技術(shù)對(duì)腸道細(xì)菌特異性靶基因快速檢測(cè)。傳統(tǒng)PCR有著可能出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性，只可以進(jìn)行定性檢測(cè)的不足。如今更加完善的PCR技術(shù)已應(yīng)用于細(xì)菌檢測(cè)當(dāng)中，如實(shí)時(shí)熒光定量PCR，可進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，用于絕對(duì)或相對(duì)定量分析，還解決了PCR的污染問(wèn)題，常用于志賀菌、沙門(mén)菌、大腸埃希菌的檢測(cè)。

3.PCR技術(shù)在寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)中的應(yīng)用

瘧疾是由瘧原蟲(chóng)引起的蟲(chóng)媒傳染病，是世界上最常見(jiàn)和危害最重的熱帶病之一，其在紅細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行增值，存在著輸血感染的危險(xiǎn)。雖然我國(guó)即將消除本土感染的瘧疾，但輸入性病例逐年增多。因此，我們需要繼續(xù)重視對(duì)瘧原蟲(chóng)的檢測(cè)。顯微鏡鏡檢是診斷瘧疾的金標(biāo)準(zhǔn)，但結(jié)果會(huì)受許多因素的影響，如血片質(zhì)量、染色質(zhì)量、鏡檢人員的檢驗(yàn)習(xí)慣和能力。當(dāng)瘧原蟲(chóng)數(shù)量少、形態(tài)學(xué)不典型時(shí)，就易發(fā)生漏檢，因此，效率更高、精密度更好的PCR技術(shù)被運(yùn)用于瘧原蟲(chóng)的檢測(cè)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道， 巢式PCR的陽(yáng)性檢出率與鏡檢相同，熒光定量PCR法比巢式PCR靈敏性和特異性較高，利于輸入性患者的檢測(cè)以及對(duì)疑似瘧疾患者的快速瘧疾分型鑒定。因此，在瘧疾的復(fù)核診斷中，檢驗(yàn)人員要結(jié)合患者病情及實(shí)驗(yàn)室的具體情況選擇更為合適的檢測(cè)方法，在實(shí)驗(yàn)室條件允許的情況下，可用熒光定量PCR代替巢氏PCR以提高瘧原蟲(chóng)的陽(yáng)性檢出率。由此可見(jiàn)，PCR技術(shù)在寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)中有著重要作用。

4.PCR技術(shù)在病毒檢驗(yàn)中的應(yīng)用

乙型肝炎是一種嚴(yán)重危害人體健康的世界性傳染病，慢性乙肝是一種乙型肝炎病毒持續(xù)感染6個(gè)月以上，肝臟出現(xiàn)不同程度纖維化或炎癥壞死的慢性疾病，該病的病程較長(zhǎng)、臨床癥狀反復(fù)發(fā)作，患者會(huì)出現(xiàn)食欲不振等癥狀，嚴(yán)重影響了患者生活質(zhì)量，還增大了患抑郁的風(fēng)險(xiǎn)。ELISA方法測(cè)定乙肝五項(xiàng)是輔助診斷乙肝的常規(guī)方法，利于發(fā)現(xiàn)急性乙肝，但此法對(duì)于檢測(cè)慢性乙肝的靈敏度逐漸下降，乙肝病毒變異之后，此法更加不靈敏，需檢測(cè)HBV-DNA才可以確診，可用具極高特異性和敏感性的熒光定量PCR檢驗(yàn)。但當(dāng)標(biāo)本出現(xiàn)溶血、脂血和標(biāo)本處理不當(dāng)?shù)那闆r時(shí)，會(huì)使檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。而且它只能檢測(cè)血中游離的HBV-DNA，當(dāng)病毒與肝細(xì)胞染色體整合在一起或者當(dāng)患者的HBV-DNA突變的情況下，F(xiàn)Q-PCR不能檢出病毒，但ELISA可以，因此，在檢驗(yàn)乙肝病毒感染的時(shí)候，我們要靈活選用適當(dāng)?shù)姆椒ǎ岣邫z出率。

小結(jié)

PCR技術(shù)是一種放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物技術(shù)，其可將極微量的生物標(biāo)本中的靶核酸在短時(shí)間內(nèi)大量復(fù)制擴(kuò)增至可檢測(cè)范圍，因此其具有高度靈敏性和特異性。當(dāng)然，在面對(duì)原始PCR費(fèi)時(shí)、成本高、無(wú)法定量等缺點(diǎn)時(shí)，廣大專(zhuān)家學(xué)者對(duì)傳統(tǒng)PCR技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)升級(jí)，將實(shí)時(shí)熒光PCR等技術(shù)運(yùn)用于檢驗(yàn)之中，這些技術(shù)將更加高效、準(zhǔn)確。隨著技術(shù)的不斷改進(jìn)與快速發(fā)展，它在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中發(fā)揮著重要作用，我們需結(jié)合實(shí)際情況，選擇合適的方法，提高檢驗(yàn)效率，相信未來(lái)PCR技術(shù)會(huì)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方面發(fā)揮更大的作用。

參考文獻(xiàn)

[1]龔弘局，金家貴，程曦.聚合酶鏈反應(yīng)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用和進(jìn)展[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，（11）：1131-1133.

[2]李蕓.聚合酶鏈反應(yīng)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用和進(jìn)展[J].中國(guó)城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生，2017，32（08）：18-20.

[3]陳瑩，胡蕊，劉穎勛，等.基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的腸道病原菌檢測(cè)技術(shù)[J].中國(guó)感染控制雜志，2018，（12）：1122-1128.

[4]陳慶愷，何子毅.輸血傳播瘧疾與血液安全[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2021，（01）：122-126.

[5]李素華，李靜，高麗君，等.熒光定量PCR在瘧疾實(shí)驗(yàn)室診斷中的應(yīng)用[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2019，（02）：232-234.

[6]崔鳳芹.乙肝患者發(fā)生抑郁的危險(xiǎn)因素及干預(yù)對(duì)策[J].山東醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào)，2021，43（02）：123-125.

[7]楊巍巍.PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)乙肝中的應(yīng)用[J.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，35（17）：2576-2577.

華北理工大學(xué)? 河北唐山?063000