三七蜜片輔助降血脂及抗氧化功效研究

余汪平 郭冬梅 孔慶龍 朱卓 李樺軍 游燕

摘 要：目的：考察三七蜜片對(duì)大鼠輔助降血脂及體內(nèi)抗氧化功效的作用。方法：參照保健食品輔助降血脂及抗氧化功能評(píng)價(jià)方法，選用健康大鼠進(jìn)行混合型高脂血癥以及乙醇致大鼠氧化損傷模型構(gòu)建，給藥30 d后分別對(duì)血清 TC、TG、LDL-C、HDL-C以及肝臟GSH、MDA、蛋白質(zhì)羰基和 SOD活力進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)保健食品評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范進(jìn)行最終結(jié)果判定。結(jié)果：三七蜜片樣品對(duì)混合型高血脂大鼠的血脂具有一定的降低作用;對(duì)于血脂升高相對(duì)較低的大鼠高膽固醇血癥模型，三七蜜片樣品對(duì)該模型大鼠血清中的TC、LDL-C具有顯著的降低作用，對(duì)TG無(wú)明顯降低作用;三七蜜片低、中、高劑量均能明顯提升模型大鼠肝臟GSH含量，中、高劑量均能明顯降低模型大鼠肝臟 MDA含量，低、中、高劑量均無(wú)明顯降低模型大鼠肝臟蛋白質(zhì)羰基含量，提升 SOD 活力的作用。結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)劑量條件下三七蜜片具有一定輔助降血脂及抗氧化功效。

關(guān)鍵詞：三七蜜片;高脂血癥;降血脂;抗氧化;大鼠;模型

研究表明，三七皂苷有一定的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用[1]，對(duì)心腦血管疾病有良好的預(yù)防和治療作用[2]。國(guó)內(nèi)外都在積極探索調(diào)節(jié)血脂作用的生物資源，而中藥及中藥制劑在這些方面具有良好的發(fā)展空間[3]。大量研究表明，三七除具有活血補(bǔ)血作用外，還具有改善心肌缺血、抗心律失常、降血脂[4]、降血壓、抗炎等作用[5-6]。本文結(jié)合中藥記載及現(xiàn)在醫(yī)學(xué)研究，將三七按照飲片相關(guān)工藝結(jié)合保健食品相關(guān)技術(shù)規(guī)范[7-8]，制成三七蜜片保健食品，探討三七蜜片在大鼠血脂和抗氧化兩個(gè)水平的影響，為三七類保健食品開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

豹七三七，云南白藥中藥資源有限公司;油菜蜂蜜，云南白藥中藥資源有限公司;總膽固醇（TC）試劑盒，南京建成生物工程研究所;三酰甘油（TG）試劑盒，南京建成生物工程研究所;低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒，南京建成生物工程研究所;高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒，南京建成生物工程研究所;SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所;丙二醛（MDA）試劑盒，南京建成生物工程研究所;GSH試劑盒，南京建成生物工程研究所;蛋白質(zhì)羰基試劑盒，南京建成生物工程研究所;考馬斯亮藍(lán)試劑盒，南京建成生物工程研究所;無(wú)水乙醇，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑廠;冰醋酸，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑廠;乙酸乙酯，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑廠;SPF級(jí)健康雄性SD大鼠[（200±20）g]：廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滇）2017—0004，發(fā)證單位：昆明市科技局。

1.2 儀器與設(shè)備

PL-203型電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;JJ2000型電子天平，美國(guó)雙杰兄弟（集團(tuán)）有限公司常熟市雙杰測(cè)試儀器廠;一次性 20 μL 微量采血吸管，姜堰市健華醫(yī)療器械有限公司;3K15 型高速冷凍離心機(jī)，Sigma公司;Multiskan Go型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，美國(guó) Thermo公司;GZX-9240MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海博訊醫(yī)療設(shè)備廠;組織勻漿機(jī)，南京馬內(nèi)里儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 輔助降血脂方法[9-10] 雄性SD大鼠87 只，取SD大鼠（12 只）作為空白對(duì)照組，給予普通飼料。75 只給予高脂飼料（配方：20.0%蔗糖、15%豬油、1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉，余為維持飼料）作為造模組。造模組給予高脂飼料 2 周后，空白對(duì)照組和造模組的大鼠不禁食采血（眼內(nèi)眥），采血后分離血清，按試劑盒方法測(cè)定血清 TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平[11-12]。初步設(shè)計(jì)三七樣品為1.00 g/kg，即人臨床日服用 6 g/d的 10 倍量算;三七蜜片（包含水分）為低劑量 1.32 g/kg、中劑量 2.64 g/kg、高劑量 5.28 g/kg。根據(jù)TC水平將造模成功的大鼠隨機(jī)分成 5 組，每組 15 只，分別為模型對(duì)照組、豹七三七組（1.00 g/kg）、三七蜜片低劑量組（1.32 g/kg）、中劑量組（2.64 g/kg）、高劑量組（5.28 g/kg）。每日按 1.0 mL/100 g灌胃給予受試樣品給藥1次，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組同時(shí)給予同體積的相應(yīng)溶劑，連續(xù)給藥 30 d。各組動(dòng)物間隔 3 d稱重 1 次，調(diào)整給藥劑量。空白對(duì)照組給予普通飼料，各給藥組及模型對(duì)照組給予高脂飼料[13]。

1.3.2 抗氧化實(shí)驗(yàn)方法[14-16] 選用雄性SD鼠 60 只，按體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、三七蜜片低劑量組、三七蜜片中劑量組、三七蜜片高劑量組，每組 12 只。每周稱量體重1次。除空白對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠灌胃給予等容量純水外，其余各組每天按劑量灌胃給予對(duì)應(yīng)樣品1次，連續(xù) 30 d，給藥容積為 10 mL/kg。末次給藥后，除空白對(duì)照組外，其余各組禁食 16 h（過(guò)夜），然后 1 次性灌胃給予 50%乙醇 12 mL/kg BW，6 h后腹主動(dòng)脈采血，取肝臟。全血 4 ℃靜置 3 h后使用離心機(jī)制備血清（3 500 r/min）。在肝臟相同位置處稱取約 0.5 g 肝臟組織，加定量生理鹽水，冰浴條件下用勻漿機(jī)勻漿（2 000 r/min），制備 10%勻漿液[17-19]。參照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定血清和肝組織中GSH含量、MDA含量、蛋白質(zhì)羰基含量和 SOD活力。

1.3.3 三七蜜片研制 選用云南白藥中藥資源有限公司提供的豹七三七凍干片為原料，經(jīng)過(guò)初篩厚度在1.5～2.5 mm、截面寬度3～5 mm 作為三七蜜片制備材料。先用50%油菜蜂蜜水浸泡30～60 min至三七凍干片吸水均勻，之后選用相同濃度油菜蜂蜜水按照三七凍干片∶油菜蜂蜜水=1∶10比例進(jìn)行熬煮、濃縮。用折光儀及密度計(jì)進(jìn)行濃縮液比重測(cè)試，濃縮至比重為1.2停止加熱熬煮。過(guò)夜12 h浸泡后撈出三七片，50 ℃條件熱風(fēng)烘干2 h后30 ℃吹干，即得實(shí)驗(yàn)用三七蜜片樣品。

2 結(jié)果與分析

2.1 三七蜜片對(duì)混合高脂血癥大鼠血脂的影響

如表1所示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組的鼠血清TC、TG、LDL-C的含量均顯著升高（P<0.01）。與模型對(duì)照組比較，豹七三七組大鼠血清 TC、TG、LDL-C、HDL-C的含量均無(wú)明顯影響作用（P>0.05）。與模型對(duì)照組比較，三七蜜片低劑量組的大鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C的含量均無(wú)明顯影響作用（P>0.05）;三七蜜片中劑量組的LDL-C、高劑量組的TC、LDL-C含量有不同程度的降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01、P<0.05、P<0.05）。

2.2 三七蜜片對(duì)大鼠抗氧化功效的影響

表2表明，與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠肝臟GSH含量顯著降低（P<0.001）、MDA含量顯著升高（P<0.001）、蛋白質(zhì)羰基含量顯著升高（P<0.05）、SOD 活力顯著降低（P<0.05），表明造模成功。與模型對(duì)照組比較，三七蜜片低、中、高劑量組大鼠肝臟GSH含量顯著升高（P<0.05、P<0.001、P<0.001），中、高劑量組大鼠肝臟MDA含量顯著降低（P<0.01、P<0.01），低、中、高劑量組大鼠肝臟蛋白質(zhì)羰基含量無(wú)明顯變化，低、中劑量組大鼠肝臟SOD活力明顯降低（P<0.01、P<0.05）。

3 結(jié)論與討論

輔助降血脂實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三七蜜片樣品對(duì)混合型高血脂大鼠的血脂具有一定的降低作用;對(duì)于血脂升高相對(duì)較低的大鼠高膽固醇血癥模型，三七蜜片樣品對(duì)該模型大鼠血清中的TC、LDL-C具有顯著的降低作用，對(duì)TG無(wú)明顯降低作用。三七蜜片低、中、高劑量均能明顯提升模型大鼠肝臟GSH含量，中、高劑量均能明顯降低模型大鼠肝臟 MDA含量，低、中、高劑量均無(wú)明顯降低模型大鼠肝臟蛋白質(zhì)羰基含量，提升 SOD 活力的作用。

綜合功效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，單純的三七蜜片在輔助降血脂以及抗氧化功能方面有一定的功效作用，但整體作用效果按照保健食品評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)均未達(dá)到要求，分析可能一是由于處方單一，按照中醫(yī)君臣佐使理論，應(yīng)該進(jìn)行復(fù)方設(shè)計(jì)，協(xié)同增強(qiáng)抗氧化功效以及輔助降血脂功效[20-21];二是可能由于單方產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)劑量未達(dá)到藥理功能評(píng)價(jià)劑量，后續(xù)可進(jìn)行提高實(shí)驗(yàn)劑量以及試驗(yàn)周期進(jìn)行考察驗(yàn)證[22-23];三是可能由于在三七蜜片制備過(guò)程中工藝對(duì)三七有效成分損失較大，后期可對(duì)產(chǎn)品工藝進(jìn)行改進(jìn)?！?/p>

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Effect of Panax Notoginseng Honey Tablet on Lowering Blood Lipid and Anti-oxidation

YU Wang-ping，GUO Dong-mei，KONG Qing-long，ZHU Zhuo，LI Hua-jun，YOU Yan

（Yunnan Institute of MateriaMedica/Yunnan Bai Yao Group Innovation and R&D Center/3Yunnan Province Company Key Laboratory for TCM and Ethnic Drug of New Drug Creation，Kunming 650111，China）

Abstract：Objective To investigate the effect of panax notoginseng honey tablet on helping to reduce blood lipid and antioxidation in rats.Method With reference to the evaluation methods of health-food-assisted lowering blood lipid and antioxidant functions，healthy rats were selected for the establishment of a model of mixed hyperlipidemia and ethanol induced oxidative damage in rats.The activity of serum TC，TG，LDL-C and HDL-C as well as liver GSH，MDA，protein carbonyl and SOD were detected 30 days after administration.According to the health food evaluation technical specifications to determine the final results.Result The samples of panax notoginseng honey tablets had a certain effect on the reduction of blood lipid in mixed hyperlipidemia rats.As for the rat hypercholesterolemia model with relatively low increase of blood lipid，panax notoginseng tablet had significant effect on reducing TC and LDL-C in the serum of the model rats，but no significant effect on TG.The low，medium and high doses of panax notoginseng honey tablets could significantly increase the content of GSH in the liver of the model rats，while the high and medium doses could significantly reduce the content of MDA in the liver of the model rats，while the low，medium and high doses could not significantly reduce the content of carbonyl protein in the liver of the model rats and increase the activity of SOD.Conclusion In this experiment，panax notoginseng honey tablet has certain auxiliary effect of lowering blood lipid and anti-oxidation.

Keywords：panax notoginseng honey table;hyperlipidemia;lowering blood lipid;anti-oxidation;rat;model