UPLC-MS法測(cè)定卡泊三醇中催化劑四丁基氟化銨殘留量

呂興祥

摘要目的：建立超高效液相色譜-質(zhì)譜連用法測(cè)定卡泊三醇原料藥中催化劑四丁基氟化銨殘留量的方法。方法：色譜柱為Waters HILIC （2.1mm×100mm，1.7μm），流動(dòng)相：乙腈-0.01mol·L-1甲酸銨（PH3.0）80：20，流速0.3mL·min-1，通過(guò)UPLC-MS電噴霧離子源正離子模式進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：本法線性范圍為0.0042～0.0419μg·mL-1（r=0.9992）;檢出測(cè)限為0.1ng·mL-1，定量限為0.2ng·ml-1;回收率為90.9%。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于原料藥卡泊三醇中催化劑四丁基氟化銨的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：催化劑 四丁基氟化銨 UPLCMS

卡泊三醇，分子式C27H40O3，是維生素D的衍生物，能夠與細(xì)胞表面VD3受體結(jié)合調(diào)控細(xì)胞內(nèi)DNA和角蛋白合成，抑制皮膚細(xì)胞的過(guò)度增生和誘導(dǎo)分化，從而糾正銀屑病皮膚細(xì)胞的增生及分化異常。同時(shí)能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞炎性因子的釋放，起到抗炎作用?？ú慈际悄壳爸委熅窒扌糟y屑病最有效的非糖皮質(zhì)激素外用藥之一，對(duì)于頭皮等特殊部位的銀屑病治療效果更佳。在卡泊三醇的合成過(guò)程中，二甲基叔丁基硅醚（TBDMS）作為必要的羥基保護(hù)劑，在合成的最后都會(huì)利用四丁基氟化銨（TBAF）脫去TBDMS而得到卡泊三醇。

隨著藥品安全意識(shí)的不斷提高，國(guó)家不斷加強(qiáng)藥品的監(jiān)管力度，對(duì)于雜質(zhì)的監(jiān)控也跟家嚴(yán)格。在有機(jī)合成中TBAF常被用為硅醚保護(hù)基團(tuán)的去保護(hù)試劑，也經(jīng)常被用為相轉(zhuǎn)移催化劑以及溫和的有機(jī)堿，其對(duì)機(jī)體有一定的毒性和刺激性，需要特別控制。由于TBAF在成品中殘留量較少，本文建立了利用UPLCMS法來(lái)監(jiān)測(cè)，方法操著簡(jiǎn)單，選擇性好，靈敏度高。

1.儀器與試劑

儀器：Waters UPLC-IClass-SQD2（waters公司），XP6百萬(wàn)分之一天平（梅特勒公司），Milli-Q Integral 超純水系統(tǒng)（美國(guó)密理博公司）

試劑：超純水（自制），甲醇、乙腈、甲酸、甲酸銨均為色譜級(jí)（美國(guó)默克公司），四丁基氟化銨對(duì)照品（Sigma-Aldrich），卡泊三醇原料藥客戶提供。

2.測(cè)定條件

2.1色譜質(zhì)譜條件：

2.2溶液配制

2.2.1 空白溶劑：乙腈

2.2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液：取四丁基氟化銨標(biāo)準(zhǔn)品適量，以空白溶劑配制成2μg·mL-1的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液配制：精密量取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，加乙腈配制成每1ml含四丁基氟化銨4，10，16，20，40ng的對(duì)照品工作液。

2.2.4 供試品溶液配制：精密稱取20mg供試品至10mL容量瓶中，以溶劑溶解并稀釋至刻度搖勻并定容，即得2mg·mL-1的供試品溶液。

3.結(jié)果與分析

3.1 專屬性

取空白溶劑、供試品溶液、供試品加標(biāo)溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法采集數(shù)據(jù)，考察方法專屬性。試驗(yàn)結(jié)果表明，空白溶劑、供試品對(duì)于檢測(cè)都沒(méi)有干擾。結(jié)果見(jiàn)圖一。

3.2檢測(cè)限和定量限

取四丁基氟化銨儲(chǔ)備液逐步稀釋，進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)限為0.1ng·mL-1（以3倍信噪比計(jì)），定量限為0.2ng·mL-1（以10倍信噪比計(jì)）

3.3 線性

取“2.2.3”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，以四丁基氟化銨的質(zhì)譜響應(yīng)為Y軸，濃度為X軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線，方程為y=8445.733.1175X-582.5889，r=0.9992，線性范圍4～40ng·mL-1。線性擬合曲線見(jiàn)圖1。

3.4 準(zhǔn)確度

取卡泊三醇供試品適量，置于10mL容量瓶中，分別精密加入2.2.2 項(xiàng)下四丁基氟化銨對(duì)照品儲(chǔ)備液50μL、100μL、150μL，各水平平行配制三份。精密量取1μL注入液相質(zhì)譜儀，按“2”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算。平均回收率90.9%，RSD 2.7%，方法回收率良好，此方法可準(zhǔn)確測(cè)定卡泊三醇中四丁基氟化銨的殘留量。

3.5 精密度

取精密移取2.2.3項(xiàng)下濃度為2ng·mL-1的對(duì)照品溶液溶液1μL，注入串聯(lián)四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀，連續(xù)測(cè)定六次，記錄數(shù)據(jù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。保留時(shí)間RSD為0.39%，峰面積RSD為2.57%精密度良好，結(jié)果見(jiàn)表三。

4 樣品測(cè)定

取卡泊三醇20mg至10ml容量瓶中，以空白溶劑溶解并定容，作為供試品溶液，平行配制兩份。取供試品溶液1μl，分別注入串聯(lián)四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀，記錄色譜圖。三批卡泊三醇供試品中四丁基氟化銨均低于檢出限，低于0.001%的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，符合質(zhì)檢要求。結(jié)果見(jiàn)表4。

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