清解顆粒制備工藝、質(zhì)量標準及抗病毒的研究

摘 要：清解顆粒是由生石膏670g、金銀花500g、黃芪380g、桔梗365g、黃芩335g、板藍根320g、梔子310g、連翹300g、大青葉280g、甘草270g、生姜125g、蒲公英100g、杜仲（炮制、適量）、茯苓（適量）、桑白皮（少許）等十八味中藥制成，具有清熱解毒、補脾益氣、祛痰止咳、利水消腫、斂瘡生肌、安胎的功效。本方劑是在《中華人民共和國藥典》（2020年版）一部成方制劑和單味制劑“清熱解毒口服液”“清熱解毒片”基礎上，并結合民間驗方配伍而成。經(jīng)可重復性試驗驗證：本新藥制劑——清解顆粒具有顯著的抗病毒作用、安全可靠性高、尚無明顯毒副作用、生產(chǎn)工藝便捷、儲存攜帶方便等優(yōu)勢。

關鍵詞：新藥研發(fā);清解顆粒;藥理活性;質(zhì)量標準;抗病毒

一、緒論

通過本項課題研發(fā)制備的新藥制劑——清解顆粒是根據(jù)《中華人民共和國藥典》（2020年版）一部成方制劑和單味制劑“清熱解毒口服液”“清熱解毒片”基礎上，并結合民間驗方配伍而成，有效地節(jié)省了研發(fā)投入成本和研發(fā)周期，拓寬了新型中藥制劑研發(fā)的路徑，對發(fā)展、傳承和創(chuàng)新中醫(yī)藥事業(yè)具有里程碑作用。

二、處方中各主要藥物及關鍵輔料的研究概況

石膏（CaSO4·2H2O）經(jīng)炮制后所得溶液具有明顯的解熱作用，且對正常體溫無降溫作用，試驗過程中發(fā)現(xiàn)，在用藥55～90mins時，對試驗用小白鼠、家兔和禽類（蛋雞、肉食鴨）體溫下降顯著、呼吸減緩至正常水平，有效提高了動物體內(nèi)代謝酶的活性和免疫活性。

金銀花學名忍冬（拉丁文Lonicera japonica Thunb.）屬多年生半常綠纏繞灌木。它在中國大部分地區(qū)多有分布，日本和朝鮮亦有出產(chǎn)，最早在《名醫(yī)別錄》中記載，并被列為上品。其性寒，味甘，入肺、心、胃經(jīng)，其主要含有綠原酸、木犀草素苷等化學成分，對上呼吸道感染致病病毒和細菌等有較強的抑制力，且具有抗炎、解熱、增強免疫力等作用。

黃芪為多年生草本豆科植物蒙古黃芪的根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》作“黃耆”演變而來。其含多種黃酮類化學成分，黃芪多糖類物質(zhì)是一種干擾素誘導劑，對結核菌感染有明顯對抗作用，其抗病毒機理：通過激發(fā)巨噬細胞和T細胞的功能，促使E環(huán)形成細胞數(shù)分裂增加，促生細胞因子，誘生白細胞介素，進而使內(nèi)源性干擾素在動物體內(nèi)產(chǎn)生，最終起到抗病毒的作用。

β—環(huán)糊精包合技術是利用β—環(huán)糊精自身特有的管狀結構及疏水性空腔包合藥物有效成分，同時具有延長藥物保質(zhì)期、提高藥物溶解度、調(diào)節(jié)釋藥速度、規(guī)避部分不良氣味、減少刺激性和部分毒副作用等。

三、清解顆粒常規(guī)項（粒度、總灰分等）及溶化性研究

分別通過烘干法、甲苯法、減壓干燥法和氣相色譜法對本生產(chǎn)工藝所制備的連續(xù)三批次清解顆粒進行水分測定，通過以上方法測定的水分含量如下表：

在相對密閉的環(huán)境下貯存24個月后，本中藥顆粒制劑按照水分測定法（通則0832）測定，測得其水分含量4.9%，遠低于8.0%的國家藥典標準。在80℃下通過減壓干燥至恒重，測得其減失重量為1.53%，低于國家藥典規(guī)定的2.0%。

隨機抽取供試品10g，常溫條件下（溫度25℃，濕度45%）加入200ml22℃溫水，勻速攪拌邊觀察邊記錄，攪拌至210s時，完全溶解，溶液呈鉻黃色;當室溫為4℃時，隨機抽取供試品10g，加入200ml4℃水，均速攪拌180s靜置，當280s時，完全溶解，溶液仍呈鉻黃色。將以上溶液分別靜置6H、12H、24H、48H、72H后觀察，12H時溶液有輕微渾濁但無明顯析出物，過濾后所得粉末沉淀5.7mg，總灰分11.4μg。采用蒸發(fā)皿蒸發(fā)、濃縮過程中，有少許晶體粉末析出。

四、制劑分劑量的研究

（一）試驗材料及分析

1.試驗動物

（1）清潔級昆明小鼠，雄性，體重20g～22g，共50只。由山東大學趵突泉校區(qū)動物實驗中心提供和飼養(yǎng)。

（2）清潔級Wistar大鼠，雄性，體重190g～210g，共50只。由山東大學趵突泉校區(qū)動物實驗中心提供和飼養(yǎng)。

在常溫下飼養(yǎng)15d后，將以上試驗動物按10只每組分組，依次分為空白組、常規(guī)組、清熱解毒口服液組、清熱解毒片組和清解顆粒組進行試驗。

2.喂食及給藥方法

采用定時定量投食法進行飼養(yǎng)，給藥前12h進行病毒感染，每天一次灌胃法連續(xù)給藥，且給藥劑量相同，灌藥周期10d，每12小時檢測其排便、體重等數(shù)值，每天進行X線檢查，期末進行解剖化驗分析。其中常規(guī)組采用灌入阿司匹林溶液、空白組采用灌入生理鹽水。

試驗第3d率先出現(xiàn)自身免疫組別（清解顆粒組）

在《藥典》成方制劑、單味制劑、民間驗方基礎上配伍而成，根據(jù)藥效學試驗結果得出，通過以上清解顆粒工藝流程制備日服用（按照成人體重60Kg計算）生藥所得中藥顆粒45g，需生藥量133g。

（二）試驗儀器、試劑及色譜分析

色譜柱：InertSustain C18 5μm 250×4.6mm，乙腈為色譜純，水為注射用水，其他試劑為分析純;清解顆粒：濰坊永和藥業(yè)有限公司（濰坊市）企業(yè)技術中心提供。

流速：1ml/min柱溫：25℃檢測波長：276nm進樣量：5μl柱壓：107bar

對照品溶液的制備：依次取黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素四種對照品適量，精密測定，加入70%甲醇制成每1ml含黃芩苷300μg、黃芩素50μg、漢黃芩苷80μg、漢黃芩素20μg的混合溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本顆粒制劑裝量差異下的內(nèi)容物0.1g，研磨至細粉，精密測定，置150ml錐形瓶內(nèi)，加入70%甲醇50ml，密塞，稱定總重量，超聲處理（功率400W，頻率100kHz）15mins，于室溫靜置放冷，再稱定總重量，用70%甲醇補足其失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。從而得出如下圖譜：

從液相圖譜中可得如下評判數(shù)據(jù)表格：

五、結語

經(jīng)如上工藝制備而得的中藥清解顆粒呈鉻黃色或土黃色、氣微、無異味（無焦灼味、無苦味），經(jīng)實驗室實驗、臨床試驗和定向投放應用驗證：其具有顯著的抗病毒和激發(fā)自身免疫作用、安全可靠性高、重現(xiàn)性高、尚無明顯毒副作用，且生產(chǎn)工藝便捷、儲存攜帶方便等優(yōu)點為其推廣應用占據(jù)了優(yōu)勢。

參考文獻：

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[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020.

項目：濰坊市寒亭區(qū)應用技術研究與開發(fā)項目：清解顆粒在蛋雞抗病毒作用的應用研究（ZJ202004）

作者簡介：尹海德（1990— ），男，漢族，中共黨員，本科，工程師，山東省中藥原植物科普教育基地辦公室主任，山東省科技特派員，寒亭區(qū)高里街道青年工作共建委員會成員，濰坊永和藥業(yè)有限公司副總經(jīng)理兼辦公室主任，（濰坊市企業(yè)）技術中心主任，“兩新”團組織書記，濰坊江源生物科技有限公司副總經(jīng)理，濰坊市工程研究中心主任，山東工業(yè)技師學院機電工程系專業(yè)課講師。