百菌清對(duì)香菇競(jìng)爭(zhēng)性病原的抑菌效果及應(yīng)用*

高 葦，楊利娟，王 勇，訾慧君

（1.天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，天津 300384；2.天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品保鮮與加工技術(shù)研究所，天津 300384）

香菇（Lentinus edodes） 原產(chǎn)于中國(guó)，是世界第二大栽培食用菌[1]?！笆濉睍r(shí)期，受國(guó)家政策支持，我國(guó)香菇產(chǎn)量快速增加，2018年我國(guó)香菇產(chǎn)量為1.043 2×107t，產(chǎn)值超過(guò)1千億元，我國(guó)香菇產(chǎn)量占全球香菇總產(chǎn)量的95%以上，成為我國(guó)生產(chǎn)區(qū)域最廣、總產(chǎn)量最高、影響最大的食用菌產(chǎn)品[2]。香菇發(fā)菌階段菌絲體病害的發(fā)生會(huì)導(dǎo)致大量菌袋或培養(yǎng)料被丟棄，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。菌絲體病害是指競(jìng)爭(zhēng)性病原在已滅菌的培養(yǎng)料上生長(zhǎng)蔓延，形成各種顏色的分生孢子堆。一般在通風(fēng)不良、高溫高濕、培養(yǎng)料滅菌不徹底等條件下容易發(fā)生[3]。香菇生產(chǎn)中主要的競(jìng)爭(zhēng)性病原為木霉（Trichoderma sp.）、脈孢霉（Neuropara sp.）、鏈格孢（Alternaria sp.）、青霉（Penicillium sp.）、曲霉（Aspergillus sp.）等真菌，競(jìng)爭(zhēng)性病害的發(fā)生會(huì)使菌袋無(wú)法使用，造成減產(chǎn)甚至絕收[4-5]。

目前，對(duì)于香菇栽培過(guò)程中競(jìng)爭(zhēng)性真菌病害的控制主要采用化學(xué)防治，多菌靈、二氯異氰尿酸鈉等農(nóng)藥拌料或熏煙控制木霉等真菌的污染[6-7]。但藥劑拌料對(duì)食用菌菌絲生長(zhǎng)或子實(shí)體發(fā)育也會(huì)產(chǎn)生影響[8]，二氯異氰尿酸鈉菇房消毒及煙劑處理安全性低且抑制作用有限，因此生產(chǎn)中需要尋找高效、低毒的殺菌劑通過(guò)菇房消毒抑制競(jìng)爭(zhēng)性侵染源危害。為此，通過(guò)測(cè)定殺菌譜較廣的化學(xué)殺菌劑百菌清對(duì)香菇及其代料栽培中的4種主要競(jìng)爭(zhēng)性病原（木霉、脈孢霉、鏈格孢和鐮刀菌）菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制情況，以期為香菇生產(chǎn)中病害安全有效控制提供技術(shù)參考。

1 材料和方法

1.1 供試藥劑

98.5%百菌清原藥，江蘇龍燈化學(xué)有限公司。10%百菌清煙劑，安陽(yáng)市國(guó)豐農(nóng)藥有限公司。

1.2 供試菌株

香菇品種為香菇le49，來(lái)源于天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品保鮮與加工技術(shù)研究所食用菌研究室。4種香菇競(jìng)爭(zhēng)性病原，分別為木霉、脈孢霉、鏈格孢和鐮刀菌（Fusarium sp.），均從被污染的香菇菌袋中分離得到，并由天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所種苗病害研究室保存。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 百菌清對(duì)香菇及其競(jìng)爭(zhēng)性雜菌菌絲生長(zhǎng)的毒力測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定[9]。用二甲基亞砜將98.5%百菌清原藥溶解配制成質(zhì)量濃度10 g·L-1的母液，再用無(wú)菌水稀釋成系列試驗(yàn)濃度1 000.0 mg·L-1、100.0 mg·L-1、10.0 mg·L-1、1.0 mg·L-1和 0.1 mg·L-1。分別取4 mL各濃度藥劑稀釋液放入滅菌的小三角瓶?jī)?nèi)，加36 mL PDA培養(yǎng)基混合均勻后，即藥劑濃度為 100.0 mg·L-1、10.0 mg·L-1、1.0 mg·L-1、0.1 mg·L-1和0.01 mg·L-1的含藥平板，分別接種木霉、脈孢霉、鏈格孢和鐮刀菌4種競(jìng)爭(zhēng)性病原和香菇菌種，以不含藥的菌種平板為空白對(duì)照，每個(gè)菌種各藥劑稀釋濃度設(shè)定3個(gè)重復(fù)。接種后，置于26℃恒溫箱中，3 d～5 d后采用十字交叉法測(cè)量各處理菌落半徑，并且計(jì)算抑菌率。以濃度對(duì)數(shù)值為X，菌絲生長(zhǎng)抑制率的機(jī)率值為Y，計(jì)算毒力回歸方程以及藥劑的EC50值，以藥劑的EC50值評(píng)價(jià)該藥劑的抑菌活性。觀察不同濃度的百菌清對(duì)香菇le49菌絲生長(zhǎng)的影響。

1.3.2 百菌清對(duì)競(jìng)爭(zhēng)性雜菌孢子萌發(fā)的毒力測(cè)定

采用孢子萌發(fā)法測(cè)定百菌清對(duì)病原孢子萌發(fā)的抑制作用[10]。木霉、脈孢霉、鏈格孢和鐮刀菌4種競(jìng)爭(zhēng)性病原轉(zhuǎn)接到PDA平板上，27℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d～7 d后，用滅菌刷刷下各菌株孢子，分別配成濃度為1×105個(gè)/mL的病原孢子懸浮液。吸取50 μL病原孢子懸浮液，加入10 mL百菌清濃度分別為100.0 mg·L-1、10.0 mg·L-1、1.0 mg·L-1、0.1 mg·L-1和0.01 mg·L-1的溶液中，各病原菌菌液以加入10 mL無(wú)菌水中為空白對(duì)照，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h和48 h后，通過(guò)顯微鏡觀察各處理孢子萌發(fā)數(shù)目，并計(jì)算分生孢子萌發(fā)抑制率（IC，%），公式為：

式中：CG1為未經(jīng)藥劑處理小區(qū)的孢子萌發(fā)數(shù)目（個(gè)）；CG2為處理后孢子萌發(fā)數(shù)量（個(gè)）。

1.3.3 10%百菌清煙劑對(duì)香菇菇房霉菌田間防效測(cè)定

試驗(yàn)于2018年8月27日在天津市食用菌技術(shù)工程中心試驗(yàn)香菇棚中進(jìn)行，試驗(yàn)棚室連續(xù)5年栽培香菇等食用菌，且菌棒每年均受競(jìng)爭(zhēng)性真菌病原污染，試驗(yàn)棚室具通風(fēng)和加濕裝置。

試驗(yàn)設(shè)置10%百菌清煙劑的煙熏用量3.00 g·m-3、4.00 g·m-3、5.00 g·m-3和 66%二氯異氰尿酸鈉煙劑用量4.62 g·m-3及空白對(duì)照（不進(jìn)行煙熏） 5個(gè)處理。每個(gè)處理包含2個(gè)菌菇栽培架，每個(gè)菇架3層，共放置180個(gè)菌棒，小區(qū)面積為4 m2，將各處理用棚膜制成煙帳罩罩于菇架上，使其空間密閉，然后進(jìn)行煙熏處理，密閉24 h后，掀開(kāi)棚膜通風(fēng)。每個(gè)處理分別設(shè)置3個(gè)相同面積重復(fù)。45 d后，統(tǒng)計(jì)各處理發(fā)病菌棒數(shù)，并計(jì)算發(fā)病率及防治效果。

采用Duncan氏方法對(duì)各處理防治效果進(jìn)行方差分析，比較各藥劑處理間防治效果的差異顯著性。發(fā)病率（I，%）的計(jì)算公式為：

式中：N1為各處理總菌棒數(shù)（個(gè)）；N2為處理后發(fā)病菌棒數(shù)（個(gè)）。

防治效果（CE，%）的計(jì)算公式為：

式中：I1為空白對(duì)照的發(fā)病率（%）；I2為各處理發(fā)病率（%）。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)香菇及其競(jìng)爭(zhēng)性雜菌菌絲生長(zhǎng)的毒力測(cè)定

百菌清原藥對(duì)4種競(jìng)爭(zhēng)性病原菌絲生長(zhǎng)的抑制作用結(jié)果統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 百菌清原藥對(duì)4種競(jìng)爭(zhēng)性病原菌絲生長(zhǎng)的抑制作用Tab.1 Inhibitory effects of chlorothalonil to four competitive pathogenson on the mycelial growth

由表1可知，98.5%百菌清原藥對(duì)香菇代料栽培中的競(jìng)爭(zhēng)性病原木霉、脈孢霉、鏈格孢和鐮刀菌具有不同程度的抑制作用。其中，百菌清對(duì)木霉菌絲生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng)，EC50值為0.632 1 mg·L-1，對(duì)脈孢霉抑制作用最弱。不同濃度百菌清對(duì)香菇le49菌絲生長(zhǎng)的抑制作用統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同濃度百菌清對(duì)香菇le49菌絲生長(zhǎng)的抑制作用Tab.2 Inhibitory of different concentrations of chlorothalonil to Lentinus edodes le49 on the growth

由表2可知，不同濃度百菌清對(duì)香菇le49菌絲生長(zhǎng)均存在一定的影響。百菌清使用濃度低于10 mg·L-1時(shí)，對(duì)香菇菌絲生長(zhǎng)無(wú)顯著抑制作用，香菇菌絲的長(zhǎng)勢(shì)（菌絲的稀疏及顏色）也與未施藥對(duì)照相近，而百菌清使用濃度為100 mg·L-1時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度顯著低于對(duì)照。因此，低濃度百菌清對(duì)該香菇品種菌絲無(wú)抑制作用。

2.2 對(duì)競(jìng)爭(zhēng)性雜菌孢子萌發(fā)的毒力測(cè)定

不同濃度百菌清對(duì)4種競(jìng)爭(zhēng)性病原孢子萌發(fā)的抑制作用統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表3。

表3 不同濃度百菌清對(duì)4種競(jìng)爭(zhēng)性病原孢子萌發(fā)的抑制作用Tab.3 Inhibitory of chlorothalonil to four competitive pathogens on spore germination

由表3可知，98.5%百菌清原藥在100 mg·L-1時(shí)對(duì)競(jìng)爭(zhēng)性病原木霉和鐮刀菌具有較高的孢子萌發(fā)抑制率，分別為100%和87.91%，對(duì)鏈孢霉和鏈格孢的孢子萌發(fā)抑制作用較弱，分別為 55.68%和49.14%。98.5%百菌清原藥在 10 mg·L-1以下濃度時(shí)，鏈孢霉與鏈格孢2種競(jìng)爭(zhēng)性病原的孢子萌發(fā)率與空白對(duì)照無(wú)顯著差異；百菌清濃度在1 mg·L-1以下時(shí)，木霉與鐮刀菌2種競(jìng)爭(zhēng)性病原的孢子萌發(fā)率與空白對(duì)照無(wú)顯著差異。

2.3 防效測(cè)定

10%百菌清煙劑防治菇房霉菌藥效試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 10%百菌清煙劑防治菇房霉菌田間藥效試驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Control effect of 10% chlorothalonil fumigant on mushroom mold

由表4可知，藥劑處理45 d后統(tǒng)計(jì)各處理菌棒的發(fā)病率，空白對(duì)照菌棒霉菌發(fā)病率較高，為23.33%，各藥劑處理的平均發(fā)病率在 3.70%～6.48%，10%百菌清煙劑處理的防效分別為72.22%、76.98%和84.12%。經(jīng)方差分析和多重比較結(jié)果表明，試驗(yàn)藥劑10%百菌清煙劑各劑量處理的防效與對(duì)照藥劑處理防效無(wú)顯著差異，均顯著抑制了香菇菌棒的霉菌發(fā)病率。

3 結(jié)論與討論

研究表明百菌清對(duì)香菇代料栽培中4種競(jìng)爭(zhēng)性病原發(fā)生具有抑制作用，其中對(duì)木霉的菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng)，對(duì)脈孢霉和鏈格孢菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制作用最弱。木霉是香菇代料栽培種最主要的競(jìng)爭(zhēng)性病原，因此百菌清藥劑可以用于生產(chǎn)中其競(jìng)爭(zhēng)性病原的防治?？紤]到競(jìng)爭(zhēng)病原生長(zhǎng)繁殖快、在栽培環(huán)境中長(zhǎng)期潛伏，因此可將百菌清用于食用菌發(fā)菌階段。10%百菌清商品化藥劑煙劑菇房消毒后，香菇發(fā)菌階段污染菌袋數(shù)目顯著降低，10%百菌清煙劑5 g·m-3對(duì)菇房霉菌的防效達(dá)到 84.12%。

食用菌栽培中競(jìng)爭(zhēng)性病原引起的菌袋污染不可避免，若未能及時(shí)控制，會(huì)導(dǎo)致大規(guī)模的減產(chǎn)絕收。試驗(yàn)結(jié)果為香菇生產(chǎn)中競(jìng)爭(zhēng)性病原真菌的防控提供參考，在食用菌產(chǎn)品的質(zhì)量安全前提下，推薦采取發(fā)菌前菇房10%百菌清煙劑熏蒸的方式，可以顯著控制發(fā)菌階段的霉菌污染，但對(duì)百菌清煙劑施用后的農(nóng)藥殘留仍需進(jìn)一步試驗(yàn)研究。