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    肌酸化學(xué)交換飽和轉(zhuǎn)移加權(quán)成像評估大鼠膠質(zhì)瘤模型肌酸濃度變化

    2021-09-01 03:44:40唐湘雍張玉忠陳彥孜沈苑玉吳仁華
    關(guān)鍵詞:波點波譜非對稱

    唐湘雍,張玉忠,陳彥孜,丁 玲,沈苑玉,吳仁華*

    (1.龍華區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像科,廣東 深圳 518109;2.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像科,廣東 汕頭 515041)

    膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤[1],影像學(xué)檢查為主要診斷方法。傳統(tǒng)MRI雖能準(zhǔn)確顯示腫瘤形態(tài)學(xué)特點及血供情況,但不能從分子層面評估病灶。磁共振波譜(magnetic resonance spectroscopy, MRS)能檢測組織的分子成分,直觀顯示全腦分子變化水平,其缺點是組織分辨率低?;瘜W(xué)交換飽和轉(zhuǎn)移(chemical exchange saturation transfer, CEST)成像是由磁化傳遞技術(shù)發(fā)展而來的MR分子成像新方法,能從分子水平探測組織中特定物質(zhì)濃度的變化并進行成像,獲得空間圖譜[2],已用于腦腫瘤、腦梗死及癲癇等相關(guān)研究[3]。既往研究[4-7]表明,針對多數(shù)MRS能檢出的代謝物可實現(xiàn)CEST成像,主要包括谷氨酸[4]、肌醇[5]和肌酸(creatine, Cr)[6-7]等。Cr是人體組織能量代謝過程中的重要物質(zhì)[8],目前已有學(xué)者[6-9]采用Cr-CEST成像研究心臟、肌肉及顱腦相關(guān)疾病。腦膠質(zhì)瘤腫瘤區(qū)域細(xì)胞繁殖迅速,使能量代謝發(fā)生變化,導(dǎo)致Cr濃度改變。本研究觀察Cr-CEST成像評估大鼠膠質(zhì)瘤Cr濃度的價值。

    1 材料與方法

    1.1 體外實驗 于直徑8 mm試管中配置濃度為10 mmol/L的pH 7.0 Cr溶液,以濃度1%瓊脂糖溶液固定,獲得單一Cr試管;另于5支相同試管中分別配置濃度20、40、60、80、100 mmol/L,pH均為7.0的Cr溶液,并以相同方法固定于容器中,獲得混合Cr試管;行MR掃描。

    1.2 體內(nèi)實驗 選取8只6周齡雄性SD大鼠(購于廣東省實驗動物中心),體質(zhì)量200~250 g,中位數(shù)231.5 g。將10 μl對數(shù)生長期C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞(濃度為106個/10 μl)接種于大鼠右側(cè)基底節(jié)區(qū),制作大鼠膠質(zhì)瘤模型。于造模后第2~3周采集大鼠頭部MRI。本研究經(jīng)汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號:SUMC2013-039)。

    1.3 儀器與方法

    1.3.1 體外實驗 采用安捷倫7.0 T動物MR儀(美國安捷倫科技有限公司),配備雙通道正交體線圈,行T2W、連續(xù)波點分辨波譜序列及連續(xù)波平面回波序列掃描。T2W參數(shù):TR 2 500 ms,TE 80 ms,層厚2 mm。參考文獻[10-11]方法設(shè)置連續(xù)波點分辨波譜序列及連續(xù)波平面回波成像序列掃描參數(shù),以連續(xù)波點分辨波譜序列掃描單一Cr試管時,TR 6 000 ms,TE 26.51 ms,預(yù)飽和能量(B1)為0.5、1.0、3.0、5.0 μT,射頻脈沖持續(xù)時間為4 s,體素3 mm×3 mm×3 mm,飽和偏移頻率為+5~-5 ppm,間隔0.25 ppm;掃描混合Cr試管時,B1為1.0 μT,余同上。以連續(xù)波平面回波成像序列掃描混合Cr試管時,翻轉(zhuǎn)角90°,TR 6 000 ms,TE 26.51 ms,矩陣64×64,層厚2 mm,F(xiàn)OV 40 mm×40 mm,采集次數(shù)2,B1 0.5、1.5、2.5 μT,射頻脈沖持續(xù)時間為4 s,飽和偏移頻率2.0、-2.0、300 ppm。

    1.3.2 體內(nèi)實驗 連續(xù)波點分辨波譜序列參數(shù):根據(jù)T2WI所見,于腫瘤區(qū)域避開出血及壞死區(qū)設(shè)置ROI,體素3 mm×3 mm×3 mm,B1為0.5 μT,射頻脈沖持續(xù)時間4 s,F(xiàn)OV 30 mm×30 mm,余參數(shù)同混合Cr試管。連續(xù)波平面回波成像序列參數(shù):B1 0.5 μT,射頻脈沖持續(xù)時間4 s,F(xiàn)OV 30 mm×30 mm,余參數(shù)同混合Cr試管。

    1.3.3 圖像后處理 采用MATLAB(2013b)對原始數(shù)據(jù)進行后處理,通過連續(xù)波點分辨波譜序列圖像獲得試管及大鼠腦膠質(zhì)瘤模型的Z譜及相應(yīng)非對稱譜;于連續(xù)波平面回波序列圖像試管/大鼠腦膠質(zhì)瘤中心區(qū)域(盡量與連續(xù)波點分辨波譜序列掃描ROI保持一致)及對側(cè)正常組織放置體素為3×3個的方形ROI,測量其Cr-CEST效應(yīng)Cr-CESTR值,Cr-CESTR=(M-2 ppm-M+2 ppm)/M0,M-2ppm、M+2ppm、M0分別為頻率-2 ppm、+2 ppm、300 ppm處的信號強度,其中300 ppm處偏離水峰較遠(yuǎn),相當(dāng)于未施加預(yù)飽和脈沖,取其絕對值的均值為最后結(jié)果,并獲得相應(yīng)的Cr-CEST加權(quán)圖。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 21.0統(tǒng)計分析軟件。計量資料采用中位數(shù)(上下四分位數(shù))表示,比較采用Mann-WhitneyU檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 體外實驗 于單一Cr試管的Z譜及非對稱曲譜(圖1)頻率2.0 ppm處見明顯波谷及波峰,提示存在Cr-CEST效應(yīng),且B1值為0.5~3.0 μT時Cr-CEST效應(yīng)隨其增高而上升,B1值升至5.0 μT后Cr-CESTR效應(yīng)降低。

    圖1 不同射頻預(yù)飽和能量下單一Cr試管的Z譜(A)及非對稱曲譜(B)

    混合Cr試管Z譜及非對稱曲譜(圖2A、2B)顯示,頻率2.0 ppm處Cr-CEST效應(yīng)隨Cr濃度升高而增強?;旌螩r試管Cr-CEST加權(quán)圖像(圖2C)亦顯示,Cr-CEST效應(yīng)隨Cr濃度升高而增強,試管由藍色向紅色轉(zhuǎn)變,且隨B1值升高,Cr-CEST效應(yīng)增強。B1值為0.5 μT時,20、40、60、80及100 mmol/L Cr試管的Cr-CESTR分別為6.31%、9.91%、14.46%、18.07%及21.45%;1.5 μT時,相應(yīng)Cr-CESTR分別為16.75%、28.49%、37.66%、45.73%及49.87%;2.5 μT時分別為21.34%、34.84%、42.64%、50.75%及53.28%。

    圖2 混合Cr試管的Cr-CESTR效應(yīng)相關(guān)圖譜 A、B.分別為B1為1.0 μT時的Z譜(A)及非對稱譜(B);C.B1 為0.5、1.5、2.5 μT時混合Cr試管的Cr-CEST加權(quán)圖像

    2.2 體內(nèi)實驗 成功制備8只大鼠膠質(zhì)瘤模型,腫瘤T2WI呈高信號,邊界不清,占位效應(yīng)明顯(圖3A)。大鼠腦膠質(zhì)瘤Z譜及非對稱曲譜(圖3B、3C)顯示,B1值為0.5 μT時,于頻率2.0 ppm處見水信號減低,提示存在Cr-CEST效應(yīng);Cr-CESTR加權(quán)圖(圖4)顯示,腫瘤區(qū)域顏色較對側(cè)正常腦組織為淺,即Cr-CEST效應(yīng)低于對側(cè),頻率2.0 ppm處腫瘤區(qū)域Cr-CESTR絕對值[0.098(0.012,0.393)%]低于對側(cè)正常腦組織區(qū)域[3.499(3.072,3.656)%,Z=-3.361,P<0.001]。

    圖3 大鼠腦膠質(zhì)瘤模型Cr-CESTR效應(yīng)相關(guān)圖譜 A.T2WI,黑框區(qū)域為掃描ROI;B.Z譜;C.非對稱譜

    圖4 大鼠腦膠質(zhì)瘤模型Cr-CEST效應(yīng)圖 A.T2WI;B.Cr-CEST加權(quán)圖(方框為ROI)

    3 討論

    CEST技術(shù)利用特定高斯分布的預(yù)飽和脈沖對溶質(zhì)中的特定物質(zhì)進行預(yù)飽和,即射頻標(biāo)記。假設(shè)有兩個溶質(zhì)池,一個是自由水池,一個是可交換質(zhì)子池。由于MR能探測氫質(zhì)子信號,卻無法直接探測特定大分子質(zhì)子池的信號。多種大分子物質(zhì)內(nèi)含有可與自由水進行化學(xué)交換的氫質(zhì)子,在適當(dāng)條件下(如適宜的溫度、pH),交換質(zhì)子池中的氫質(zhì)子能與自由水池的氫質(zhì)子發(fā)生化學(xué)交換,通過磁化傳遞探測水信號變化,間接反映溶質(zhì)中特定的低濃度物質(zhì)變化,從而顯示組織微環(huán)境的變化程度。CEST成像彌補了MRS空間分辨率低、不能獲得圖像的不足,得到探測物質(zhì)的CEST效應(yīng)圖可直觀顯示特定溶質(zhì)分子微觀狀況下的濃度分布及變化。

    SCHMIDT等[12]指出,溫度升高使CEST效應(yīng)增強;而pH對CEST效應(yīng)亦存在影響。本研究在恒定室溫、pH 7.0下進行觀察,以減少其他因素對Cr-CEST效應(yīng)的影響。SUN等[13]發(fā)現(xiàn)B1與CEST效應(yīng)并非呈無極限正相關(guān),能量增高到一定程度后,CEST效應(yīng)將發(fā)生溢出,即減低,故優(yōu)化CEST掃描參數(shù)具有重要意義。本研究通過試管實驗優(yōu)化掃描參數(shù),發(fā)現(xiàn)相同條件下,B1值為0.5~3.0 μT時,Cr-CEST效應(yīng)隨B1值增高而加強,而B1值增高至5.0 μT時CEST效應(yīng)發(fā)生溢出[13]而有所下降;提示在一定范圍內(nèi)提高B1值可提升Cr-CEST效應(yīng),但并非B1值越高則交換速率越快。隨Cr濃度增高,Cr-CEST效應(yīng)增強,與既往研究[12]結(jié)果相符,這是由于濃度增高后,相同條件下質(zhì)子池內(nèi)可交換質(zhì)子增多,導(dǎo)致交換增多,使水信號減低更明顯,而Cr-CEST效應(yīng)增強。

    在體實驗中的最佳B1值與Cr試管掃描并非完全相同。SINGH等[6]采用較低B1值(1.45 μT)對健康成人行頭部Cr-CEST成像。考慮到腦組織Cr濃度較低,其CEST效應(yīng)相對試管而言較為微弱,較大B1值不利于活體成像,且B可能導(dǎo)致腦組織溫度增高而損害腦細(xì)胞,進而影響實驗結(jié)果,本研究采用B1值0.5 μT對大鼠腦膠質(zhì)瘤進行Cr-CEST掃描,結(jié)果顯示大鼠膠質(zhì)瘤頻率2.0 ppm處Cr-CEST效應(yīng)絕對值較對側(cè)正常腦組織減低,提示其Cr濃度低于正常腦組織,與既往Cr-CEST研究[6,11]結(jié)果基本相符,并與MRS顯示腦膠質(zhì)瘤腫瘤區(qū)域N-乙酰天門冬氨酸、Cr減低和膽堿增高[14]相呼應(yīng)。

    由于頻率-2.0~-3.5 ppm處存在核奧式效應(yīng)[15-16],無法去除-2.0 ppm處及附近部分物質(zhì)交換的影響,計算Cr-CEST效應(yīng)時,-2.0 ppm處存在水信號減低,難免影響結(jié)果,故Cr-CEST成像并非是絕對濃度成像,此為本研究不足之處。

    綜上,Cr-CEST成像有助于評估大鼠腦膠質(zhì)瘤模型Cr濃度變化,有望為活體檢測腦內(nèi)Cr代謝提供影像學(xué)新方法。

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