果蔬汁中毒死蜱考核樣測定的方法比對研究

王冉冉，程曉華，呂 警，肖 瀟*

（1.新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心，新疆烏魯木齊 830002；2.烏魯木齊市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，新疆烏魯木齊 830000）

我國果蔬資源日益豐富多樣[1]，果蔬汁越來越頻繁的出現(xiàn)在人們的日常生活中。在過去的50年里，農(nóng)業(yè)發(fā)展的一個(gè)關(guān)鍵組成部分就是使用殺蟲劑來提高果蔬產(chǎn)量。嬰幼兒食品中用到了一定比例的果蔬。在過去的10年，毒死蜱一直排在嬰幼兒食品中超標(biāo)殺蟲劑的首位。因此，建立快速、有效、安全的樣品預(yù)處理和檢測方法來檢測、鑒定和量化毒死蜱農(nóng)殘成為當(dāng)前研究和探索的熱點(diǎn)[2]。

目前，國外的研究大都集中在采用QuEChERS前處理方法結(jié)合反相高效液相色譜熒光檢測器對水果蔬菜樣品中的毒死蜱進(jìn)行測定，或是使用固相萃取技術(shù)與便攜式拉曼分析儀相結(jié)合的檢測方法，以及使用納米纖維固相萃取法對水和果汁樣品進(jìn)行前處理后用氣相色譜測定毒死蜱的含量[3-4]。國內(nèi)對水果和蔬菜樣品中農(nóng)藥多殘留的檢測方法研究較多，但對于果蔬汁中的農(nóng)藥多殘留檢測方法卻研究較少[5-9]。已有的方法陳舊且耗時(shí)較長。而國家標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于農(nóng)藥殘留的分析檢測方法也尚未細(xì)化到果蔬汁，所以目前還缺少一些安全、高效且準(zhǔn)確的方法作為日常監(jiān)測果蔬汁中農(nóng)殘的參考。因此，為了有效控制毒死蜱農(nóng)藥殘留安全問題，進(jìn)一步提高果蔬汁的質(zhì)量安全，實(shí)驗(yàn)室通過對試驗(yàn)條件的比對和優(yōu)化，篩選得到了可快速準(zhǔn)確測定果蔬汁中毒死蜱殘留量的分析方法，并將篩選得到的方法應(yīng)用于能力驗(yàn)證，取得了滿意的考核結(jié)果。為果汁中農(nóng)藥殘留分析以及實(shí)驗(yàn)室面臨的考核工作提供更多借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

Agilent7890A氣相色譜儀（FPD檢測器，美國安捷倫科技有限公司）；島津GC-2014氣相色譜儀（NPD檢測器，島津國際貿(mào)易有限公司）；凝膠滲透色譜-氣相色譜-四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（島津國際貿(mào)易有限公司）；氮吹 儀 OA-HEAT Heating System（Organomation）； 離心 機(jī)Thermo Electron LED GmbH D-37520 Osterode（ThermoFisher SCIENTIFIC）；邦潔BG-08C超聲波儀（廣州邦潔電子產(chǎn)品有限公司）；其林貝爾VORTEX/KB3渦旋均質(zhì)器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

1.2 試劑及標(biāo)準(zhǔn)溶液

丙酮（色譜純，霍尼韋爾（中國）有限公司）；乙腈（色譜純，西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司）；無水硫酸鎂（分析純，使用前于600 ℃烘烤4 h）；氯化鈉（分析純，使用前于120 ℃烘烤4 h）；無水硫酸鈉（分析純，使用前于600 ℃烘烤4 h）；二氯甲烷（色譜純，賽默飛世爾科技（中國）有限公司）；正己烷（色譜純，韓國德山公司）；毒死蜱（GSB05-1869-2016，100 μg/mL）；丙酮。

1.3 實(shí)驗(yàn)樣品

果蔬汁，能力驗(yàn)證樣品，由華測檢測認(rèn)證集團(tuán)股份有限公司（CNAS認(rèn)可的能力驗(yàn)證提供者）提供。

將購買的橙子用榨汁機(jī)榨汁，過濾，離心。加入一定量的毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混合均勻，于冰箱中（-4 ℃）冷藏保存，測定前放至室溫，混合均勻使用。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)步驟

果蔬汁樣品經(jīng)過乙腈、丙酮、二氯甲烷及乙酸乙酯等提取，顏色較深的提取液經(jīng)過石墨化炭黑凈化，再用無水硫酸鎂或無水硫酸鈉進(jìn)行脫水處理，以NPD、FPD與質(zhì)譜3種檢測器進(jìn)行檢測，外標(biāo)法定量。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

將毒死蜱（GSB05-1869-2016，100 μg/mL）標(biāo)準(zhǔn)原液用色譜純丙酮稀釋成10.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，再次用色譜純丙酮稀釋成1.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液，之后用標(biāo)準(zhǔn)使用液準(zhǔn)確配制成 0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.25 μg/mL、0.50 μg/mL和1.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，搖勻冷藏待測。

1.4.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取5 g果蔬汁樣品于塑料離心管中，加入10 mL乙腈或丙酮等有機(jī)試劑渦旋振蕩5 min后，加入3 g氯化鈉再次渦旋振蕩1 min，在室溫下靜置10 min使乙腈和水相分層或者低溫離心分層，吸取有機(jī)試劑層，用無水硫酸鈉或無水硫酸鎂進(jìn)行干燥，再次低溫離心，上清液用有機(jī)系濾膜過濾后轉(zhuǎn)入進(jìn)樣瓶中待測。

1.4.4 儀器條件

GC-NPD（SHIMADZU，GC-2014）：所用色譜柱為Rtx-5 型（30 m×320 μm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度為 250 ℃；檢測器溫度為255 ℃；色譜柱升溫程序：初始溫度50 ℃保持2 min，15 ℃/min升至250 ℃，保持7 min；柱流量為1.71 mL/min；氫氣流速為35 mL/min；空氣流速為55 mL/min；進(jìn)樣方式為不分流；進(jìn)樣量為1.0 μL。

GC-FPD（Agilent，7890A）：所用色譜柱為HP-5型（30 m×320 μm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度為 250 ℃；檢測器溫度為200 ℃；色譜柱升溫程序：初始溫度50 ℃，保持1 min；20 ℃/min升至270 ℃，保持8 min；柱流量為2.0 mL/min；氫氣流速為75 mL/min；空氣流速為100 mL/min；尾吹流量為60 mL/min；進(jìn)樣方式為分流（分流比1∶1）；進(jìn)樣量為1.0 μL。

GPC-GC-MS（SHIMADZU，QP2010Ultra）：所用色譜柱為Rxi-5Sil MS（30 m×250 μm×0.25 μm），進(jìn)樣口初始溫度為120 ℃，后升至250 ℃,色譜柱升溫程序：初始溫度82 ℃，保持5 min；15 ℃/min升至300 ℃，保持2 min；柱流量為1.75 mL/min；進(jìn)樣方式為不分流；電離方式：電子轟擊離子源（EI）70 eV；接口溫度為280 ℃；離子源溫度為200 ℃；溶劑延遲為9.70 min；掃描方式：SIM模式；載氣：高純氦氣，純度99.999%。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理所用的萃取試劑對毒死蜱農(nóng)藥萃取效率的影響

固定加標(biāo)量為（125 ng/mL），4種不同的萃取試劑（丙酮、乙腈、二氯甲烷/丙酮、乙酸乙酯）對目標(biāo)分析物萃取效率的影響見圖1。由圖1可知，4種萃取溶劑中，乙腈的萃取效果較理想。

圖1 溶劑種類對目標(biāo)化合物萃取效果的影響

2.2 氯化鈉加入順序?qū)Χ舅莉甾r(nóng)藥提取效果的影響

在果蔬汁中提取農(nóng)藥殘留的前處理方法中，均加入鹽（氯化鈉或硫酸鈉）進(jìn)行鹽析，降低目標(biāo)分析物在水相中的溶解度，以達(dá)到更好的萃取效果。由圖2可知，在目標(biāo)分析物提取過程中，氯化鈉在萃取試劑之前或是之后加入，對萃取效果無明顯差異。

圖2 氯化鈉加入順序?qū)δ繕?biāo)化合物提取效果的影響

2.3 提取溶劑的體積對毒死蜱農(nóng)藥萃取效果的影響

固定加標(biāo)量為（125 ng/mL，理論值），考察4種不同的萃取試劑（丙酮、乙腈、二氯甲烷/丙酮、乙酸乙酯）的體積對目標(biāo)分析物萃取效率的影響。圖3結(jié)果表明，萃取試劑體積在5.0～15.0 mL范圍內(nèi)變化時(shí)，萃取試劑體積為10.0 mL時(shí)，達(dá)到較理想的萃取效果，加入兩倍體積的萃取試劑時(shí)，萃取效率并無明顯變化，為了節(jié)能減排，后續(xù)試驗(yàn)選取萃取試劑體積為10.0 mL。

圖3 提取溶劑的體積對目標(biāo)化合物提取效果的影響

2.4 使用GC-FPD、GC-NPD、GPC-GC/MS 3種檢測器對能力驗(yàn)證樣品的分析測定

用樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)以及質(zhì)控樣品試驗(yàn)對測定結(jié)果進(jìn)行校正，3種檢測器測定結(jié)果并無顯著性差異（使用單因素方差分析，得P＞0.05），測定數(shù)據(jù)見表1。用GPCGC/MS對能力驗(yàn)證樣品進(jìn)行分析測定，測定結(jié)果見圖4。

圖4 毒死蜱考核樣的碎片離子峰譜圖

表1 3種儀器的考核樣測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

3.1 建立一種快速準(zhǔn)確的前處理方法

搖勻后稱取5 g果蔬汁樣品，準(zhǔn)確加入10 mL乙腈，加入3 g氯化鈉，渦旋混勻，低溫超聲提取10 min，靜置后，取上清液適量加入無水硫酸鈉干燥，離心后上機(jī)測定。

3.2 樣品適用性

采用本研究檢測方法對能力驗(yàn)證樣品中毒死蜱殘留量進(jìn)行檢測，能力驗(yàn)證試驗(yàn)取得了滿意的結(jié)果（Z=0.1），說明以上實(shí)驗(yàn)方法有著較好的準(zhǔn)確性和實(shí)用性，適合果汁中毒死蜱農(nóng)藥殘留的檢測。