益氣活血解毒方聯(lián)合化療治療晚期卵巢癌療效及對(duì)患者免疫通路相關(guān)靶基因的影響

李成斐，朱 萍，于 佳，劉俊彥，劉葉玲

(1.海軍第九七一醫(yī)院，山東 青島 266000；2.山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，山東 濟(jì)南250000；3. 泰安市中心醫(yī)院，山東 泰安 271000)

卵巢癌具有發(fā)病率高的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量。臨床上多采用化療治療晚期卵巢癌患者，TC方案(紫杉醇聯(lián)合卡鉑)化療是晚期卵巢癌患者的常用治療方式，雖然可以降低晚期卵巢癌患者的病死率，但隨著化療次數(shù)的增加，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)增加化療藥物對(duì)正常細(xì)胞的毒性，加之部分患者耐受能力較差，治療效果仍需進(jìn)一步提升[1-2]。中醫(yī)學(xué)中卵巢癌屬于“積聚” “癥瘕”等范疇，內(nèi)有情志不節(jié)、外有六淫之邪、飲食不當(dāng)?shù)戎職馓撗龆l(fā)病，應(yīng)以健脾益氣、活血化瘀、解毒散結(jié)為治則[3-4]。益氣活血解毒方由青陳皮、莪術(shù)、川楝子、白術(shù)等多種中藥組成，常用于治療肺癌，具有健脾益氣，活血解毒的功效[5]。絲裂原活化蛋白激酶3(Mitogen-activated protein kinase3，MAPK3)、白細(xì)胞分化抗原(Cluster of differentiation，CD40)、殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體2DL3(Recombinant killer cell immunoglobulin like receptor 2DL3，KIR2DL3)、人類淋巴細(xì)胞抗原DQA(Human lymphocyte antigen，HLA-DQA)等免疫通路相關(guān)靶基因表達(dá)水平與卵巢癌患者腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)[6]，但目前關(guān)于益氣活血解毒方聯(lián)合TC方案是否能夠調(diào)節(jié)MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA免疫通路相關(guān)靶基因表達(dá)的研究尚少，鑒于此，本研究選取108例晚期卵巢癌(氣虛血瘀型)患者，探究益氣活血解毒方聯(lián)合TC方案的治療效果，并分析免疫通路相關(guān)靶基因的表達(dá)情況，以期為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年2月至2020年3月本院收治的108例晚期卵巢癌氣虛血瘀證患者為研究對(duì)象，以隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組，每組均為54例。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①中醫(yī)診斷參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[7]，符合氣虛血瘀證；②西醫(yī)診斷參照《卵巢惡性腫瘤診斷與治療指南(第四版)》[8]，符合Ⅲ-Ⅳ期卵巢癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)細(xì)胞學(xué)或病理組織學(xué)證實(shí)；③既往未接受過放療者；④均簽署知情同意書；⑤預(yù)計(jì)生存時(shí)間>3個(gè)月；⑥卡氏功能狀態(tài)(Karnofsky)評(píng)分≥60分。排除標(biāo)準(zhǔn)：①溝通障礙者；②伴有嚴(yán)重心、肝、腎等臟器功能不全者；③患精神系統(tǒng)疾病或存在認(rèn)知障礙者；④自身免疫疾病者；⑤凝血功能障礙者；⑥伴有其他部位原發(fā)惡性腫瘤者；⑦對(duì)本研究中治療藥物過敏者。對(duì)照組年齡45～76歲，平均(60.12±6.78)歲；腫瘤分期：Ⅲ期38例，Ⅳ期16例；病理分型：漿液型39例，黏液型8例，其他7例；Karnofsky評(píng)分62～76分，平均(68.25±3.28)分；腫瘤分化程度：低分化12例，中分化28例，高分化14例。觀察組年齡46～76歲，平均(60.24±6.82)歲；腫瘤分期：Ⅲ期36例，Ⅳ期18例；病理分型：漿液型38例，黏液型7例，其他9例；Karnofsky評(píng)分61～75分，平均(68.32±3.31)分；腫瘤分化程度：低分化14例，中分化27例，高分化13例。兩組年齡、病理分型、腫瘤分化程度、Karnofsky評(píng)分等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法

1.2.1 對(duì)照組：采用TC方案化療。第1天給予患者靜脈注射卡鉑注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字H20020180)300～400 mg/m2，3周1次；第2天給予患者靜脈注射紫杉醇注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字H20113538)150 mg/m2，輸注時(shí)間>180 min，3周1次，21 d為1個(gè)療程，治療兩個(gè)療程，治療至患者出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)或病情進(jìn)展時(shí)應(yīng)停止化療。

1.2.2 觀察組：在對(duì)照組的基礎(chǔ)上聯(lián)合益氣活血解毒方治療。中藥組方：青陳皮、莪術(shù)、川楝子各9 g，白術(shù)、白花蛇舌草、山藥各15 g，黃芩30 g，肉桂、三棱各6 g，全蝎5 g。水煎煮取汁400 ml，每日1劑，早晚各服用1次，200 ml/次。21 d為1個(gè)療程，治療2個(gè)療程。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 觀察兩組治療前后中醫(yī)癥狀評(píng)分：治療前1 d、治療6周后分別評(píng)估兩組中醫(yī)癥候，參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》，內(nèi)容包括氣短、膚色晦暗、乏力、疼痛、舌有瘀斑、舌有齒痕或舌苔薄白、舌暗、舌下靜脈青紫，按照癥候輕重程度分為3分(癥狀嚴(yán)重，不能堅(jiān)持日?；顒?dòng))、2分(癥狀較輕，勉強(qiáng)維持日常活動(dòng))、1分(癥狀不明顯，可進(jìn)行日?；顒?dòng))、0分(癥狀無(wú))，癥狀累計(jì)總分為24分，癥狀累積總分越高代表癥狀越嚴(yán)重。

1.3.2 兩組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群：治療前1 d、治療6周后分別采集患者的外周血5 ml，離心10 min，轉(zhuǎn)速為1500 r/min，離心半徑為10 cm，取上清液，采用流式細(xì)胞儀(貝克曼庫(kù)爾特商貿(mào)有限公司)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+細(xì)胞的比例。試劑盒生產(chǎn)廠家為上海研生實(shí)業(yè)有限公司。

1.3.3 兩組治療前后血液mRNA表達(dá)水平：采用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)法檢測(cè)外周血免疫通路相關(guān)靶基因表達(dá)水平，治療前1 d、治療6周后采集患者外周血5 ml，采用Trizol試劑從患者樣本中分離出總核糖核酸(Ribonucleic Acid，RNA)，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京伊塔生物科技有限公司)將上述總RNA轉(zhuǎn)錄至互補(bǔ)脫氧核糖核酸(Complementary DNA，cDNA)。采用SYBR GReen熒光擴(kuò)增試劑盒(哈爾濱新海基因檢測(cè)有限公司)平行測(cè)定3次，通過2-△△Ct法[9]計(jì)算MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA血液信使核糖核酸(Messenger RNA，mRNA)表達(dá)量。

1.3.4 比較兩組治療期間不良反應(yīng)發(fā)生情況：根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)提出的抗癌藥物不良反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[10]，根據(jù)不良反應(yīng)程度從輕到重按照Ⅰ-Ⅳ級(jí)評(píng)估；兩組治療期間不良反應(yīng)發(fā)生情況，內(nèi)容包括貧血、惡心嘔吐、脫發(fā)、白細(xì)胞降低、血小板減少。

1.4 療效標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)實(shí)體腫瘤療效評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)(1.1版)[11]評(píng)估兩組臨床療效，完全緩解(Complete remission，CR)：腫瘤完全消失；部分緩解(Partial response，PR)：腫瘤消退>50%；疾病穩(wěn)定(Stable disease，SD)：腫瘤增大<25%或腫瘤消退≤50%；疾病進(jìn)展(Progressive disease，PD)：出現(xiàn)新的病灶或腫瘤增大≥25%。臨床控制率=(CR+PR+SD)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組治療前后中醫(yī)癥候評(píng)分比較 見表1。治療前，兩組中醫(yī)癥候評(píng)分比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組中醫(yī)癥候評(píng)分均比治療前低(P<0.05)，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)。

表1 兩組治療前后中醫(yī)癥候評(píng)分比較(分)

2.2 兩組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群比較 見表2。治療前，兩組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；治療后，兩組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均比治療前高(P<0.05)，且觀察組高于對(duì)照組(均P<0.05)。

表2 兩組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群比較

2.3 兩組治療前后血液mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較 見表3。治療前，兩組MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA均降低(P<0.05)，且觀察組均比對(duì)照組低(P<0.05)。

表3 兩組治療前后血液mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較

2.4 兩組臨床療效比較 見表4。觀察組臨床控制率比對(duì)照組高(83.33%與64.81%，P<0.05)。

表4 兩組臨床療效比較[例(%)]

2.5 兩組治療期間不良反應(yīng)發(fā)生比較 見表5。兩組治療期間貧血、惡心嘔吐、脫發(fā)、白細(xì)胞降低等Ⅲ和Ⅳ級(jí)不良反應(yīng)發(fā)生率相近(P>0.05)。

表5 兩組治療期間不良反應(yīng)發(fā)生比較[例(%)]

3 討 論

晚期卵巢癌患者給予TC方案治療，雖能夠改善患者的臨床癥狀，但在化療的同時(shí)，可沖擊機(jī)體正常免疫系統(tǒng)功能，在增加生存率方面仍然存在一定的局限性[12-13]。當(dāng)前，中西醫(yī)聯(lián)合治療在多種惡性腫瘤中取得良好效果[14-15]。晚期卵巢癌多伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，惡病質(zhì)出現(xiàn)，屬正衰而毒、痰、瘀強(qiáng)盛，病機(jī)多為氣虛血瘀，而中醫(yī)更注重扶正祛積、益氣養(yǎng)血，應(yīng)以健脾益氣、活血化瘀、解毒散結(jié)為治則[16-17]。

本研究結(jié)果顯示，治療后觀察組氣虛血瘀證中醫(yī)癥狀評(píng)分低于對(duì)照組，且臨床控制率優(yōu)于對(duì)照組，提示益氣活血解毒方聯(lián)合TC方案用于治療氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者能夠改善臨床癥狀，療效顯著。益氣活血解毒方由青陳皮、莪術(shù)、川楝子、白術(shù)、白花蛇舌草、山藥、黃芩、肉桂、三棱等多種中藥組成，黃芪為君藥，味甘，性微溫，歸屬于肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表、托毒化膿的功效；三棱、莪術(shù)均為臣藥，味苦，性平，歸屬于脾、肝經(jīng)，具有消積止痛、破血行氣的功效，諸藥合同，可達(dá)活血化瘀、健脾益氣、解毒散結(jié)之功[18]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明[19]，益氣活血散毒方能夠抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄以及翻譯。T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+可參與機(jī)體多種免疫反應(yīng)，可在一定程度上反應(yīng)機(jī)體免疫功能水平，本研究結(jié)果顯示，治療后觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比對(duì)照組高，提示益氣活血解毒方聯(lián)合TC方案用于治療氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者，可調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫炎性反應(yīng)。既往研究[20]采用益氣活血解毒方治療晚期卵巢癌患者，可改善患者的生活質(zhì)量及免疫功能，與本研究結(jié)果類似。MAPK3對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)具有協(xié)同抑制作用；CD40可促進(jìn)腫瘤擴(kuò)散和腫瘤血管的生成；KIR2DL3有助于恢復(fù)自然殺傷細(xì)胞的腫瘤作用；HLA-DQA能夠反應(yīng)機(jī)體抗腫瘤免疫監(jiān)視能力的強(qiáng)弱，本研究結(jié)果顯示，治療后觀察組MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA均低于對(duì)照組，提示益氣活血解毒方聯(lián)合TC方案用于治療氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者，可下調(diào)MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA表達(dá)水平，從而發(fā)揮抗腫瘤作用，其具體的作用機(jī)制仍待進(jìn)一步探究[21]。

本研究結(jié)果顯示，兩組治療期間Ⅲ和Ⅳ級(jí)不良反應(yīng)發(fā)生率相近，提示益氣活血解毒方聯(lián)合TC方案用于治療氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者并不會(huì)顯著增加用藥不良反應(yīng)。益氣活血解毒方全方配伍合理，藥性平和，用法、用量均符合晚期卵巢癌中醫(yī)治療規(guī)范[22]。

綜上所述，氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者采用益氣活血解毒方聯(lián)合TC方案治療，能夠改善患者的臨床癥狀，療效顯著，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能水平及相關(guān)免疫通路，且較安全。然而本研究部分評(píng)定結(jié)果依靠患者主觀感覺進(jìn)行評(píng)定，另外本研究選取病例有限，研究結(jié)果可能存在一定偏差，仍需進(jìn)一步深入研究，探明具體作用機(jī)理。