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    半夏瀉心湯治療胃黏膜異型增生療效及對患者胃癌相關(guān)基因甲基化的影響

    2021-08-19 07:40:12紀(jì)安來慶1
    陜西中醫(yī) 2021年8期
    關(guān)鍵詞:癌基因瀉心湯癥候

    馮 璇,寇 玉,薛 峰,紀(jì)安來,倪 慶1,

    (1.揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院,江蘇 揚州 225009;2.揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院 江蘇省中西醫(yī)結(jié)合老年病防治重點實驗室,江蘇 揚州 225001;3.揚州大學(xué)附屬醫(yī)院,江蘇 揚州 225009)

    胃黏膜異型增生(Gastric epithelial dysplasia,GED)為病理形態(tài)由單純性增生向腫瘤性增生演進(jìn)的一種胃黏膜上皮、腺體異常分化的增生性疾病,是癌前病變的常見病理類型[1-2]。及時、有效的規(guī)范化治療是預(yù)防GED向癌變進(jìn)展,并改善其預(yù)后的重要措施。該病發(fā)病機制復(fù)雜,幽門螺旋桿菌感染可能為其促發(fā)因素。中醫(yī)認(rèn)為GED的主要病因為氣機升降失常、脾胃陰陽失調(diào)[3-4]。半夏瀉心湯用于治療消化道疾病已歷千年,是調(diào)理脾胃的傳統(tǒng)中藥方劑,主要由半夏、黃芩和干姜等組成,有調(diào)和脾胃、寒熱平調(diào)和消痞散結(jié)等功效[5-6]。我院應(yīng)用半夏瀉心湯治療GED方面具有多年臨床經(jīng)驗,且在實踐過程中經(jīng)半夏瀉心湯化裁了健脾益氣化瘀解毒方應(yīng)用于臨床,對GED具有同樣的療效。多發(fā)性腫瘤抑制因子1(p16)和磷酸酶和張力蛋白同源物基因(PTEN)均屬重要抑癌基因,與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7-8]。本研究探討半夏瀉心湯治療GED的療效,并分析其對抑癌基因p16和PTEN甲基化的影響。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 以隨機數(shù)字表法將2019年2月至2020年7月于揚州大學(xué)附屬醫(yī)院診治的92例GED患者均分為對照組和觀察組,各46例。對照組男24例,女22例;年齡37~50歲,平均(43.26±3.67)歲;病程0.15~9年,平均(4.75±2.31)年。觀察組男25例,女21例;年齡37~50歲,平均(42.89±3.75)歲;病程0.28~8年,平均(4.68±2.28)年。兩組上述基線資料對比,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),有可比性。診斷標(biāo)準(zhǔn):以《中國慢性胃炎共識意見》[9]及《慢性胃炎中醫(yī)診療專家共識意見》[10]為準(zhǔn)。病例納入標(biāo)準(zhǔn):滿足西、中醫(yī)GED診斷標(biāo)準(zhǔn);經(jīng)病理組織學(xué)檢查、胃鏡證實為GED;知情理解,簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):伴腎肝功能不全者;伴有消化性潰瘍者;伴神志疾患者。

    1.2 治療方法

    1.2.1 對照組:給予奧美拉唑腸溶膠囊(國藥準(zhǔn)字H20059140)口服,20 mg/次,3次/d。予以葉酸片(國藥準(zhǔn)字H35020215)口服,10 mg/次,3次/d。對合并HP感染者,加以PPI、鉍劑、抗生素組成三聯(lián)或四聯(lián)方案。

    1.2.2 觀察組:于上述基礎(chǔ)上,加服半夏瀉心湯,組方:半夏12 g,干姜、大棗、人參、黃芩、炙甘草各9 g,黃連3 g。由我院煎藥室統(tǒng)一煎制,每日1劑,早晚分服。兩組均給予飲食指導(dǎo)。1個月為1個療程,連續(xù)治療3個療程。

    1.3 觀察指標(biāo)

    1.3.1 甲基化特異性PCR:①DNA提取步驟為,分別抽取觀察組治療前后外周靜脈血各5 ml,DNA提取嚴(yán)格按說明書操作。DNA亞硫酸氫鹽修飾:取100 ng~1 μg DNA用NaOH和ddH2O調(diào)整至終體積20 μl,NaOH終濃度0.3 mol/L,經(jīng)孵育后得到修飾后的DNA。②甲基化特應(yīng)性PCR(MSP):p16、PTEN基因甲基化(M)、非甲基化(U)上下游引物的設(shè)計應(yīng)用Primer 5.0軟件處理,引物合成由上海捷瑞生物工程有限公司完成,引物序列見表1。③PCR反應(yīng)條件:先以95 ℃熱啟動5 min;再95 ℃ 45 s,60 ℃ 45 s,72 ℃ 40 s,重復(fù)40次后以72 ℃延伸10 min。將PCR產(chǎn)物用2%凝脂糖瓊膠電泳后觀測結(jié)果。

    表1 抑癌基因p16、PTEN擴增引物序列

    1.3.2 中醫(yī)癥候評分:治療前后,觀察的主要癥狀的中醫(yī)癥候評分,包括胃脘痛、胃脘脹滿、舌象、食少、乏力和便溏,分為無、輕、中、重4級,分別記為0、2、4、6分。

    1.4 療效標(biāo)準(zhǔn) 治愈:中醫(yī)癥候評分降低≥95%,主要癥狀消失且各項生化指標(biāo)基本正常。顯效:中醫(yī)癥候評分減少70%~94%,主要癥狀及各項生化指標(biāo)顯著改善。有效:中醫(yī)癥候評分降低30%~69%,主要癥狀及各項生化指標(biāo)略有改善。無效:未及有效標(biāo)準(zhǔn)??傆行?(治愈+顯效+有效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

    2 結(jié) 果

    2.1 兩組治療前后中醫(yī)癥候評分比較 見表2。治療后,兩組胃脘痛、胃脘脹滿、舌象、食少、乏力、便溏評分較治療前均顯著降低,且觀察組均低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    表2 兩組治療前后中醫(yī)癥候評分比較(分)

    2.2 兩組臨床療效比較 見表3。觀察組臨床有效率82.61%高于對照組54.35%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    表3 兩組臨床療效比較[例(%)]

    2.3 觀察組治療前后血清p16、PTEN擴增產(chǎn)物變化 見表4(圖1、2)。治療后,觀察組p16、PTEN基因甲基化均受到抑制。血清p16基因甲基化率15.22%低于治療前甲基化率41.30%,血清PTEN基因甲基化率21.74%低于治療前甲基化率45.65%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    表4 觀察組治療前后p16、PTEN基因甲基化比較[例(%)]

    圖1 觀察組治療前后血清p16擴增產(chǎn)物電泳圖

    圖2 觀察組治療前后血清PTEN擴增產(chǎn)物電泳圖

    3 討 論

    GED是一種胃黏膜上皮細(xì)胞及腺體發(fā)生異常分化,并在結(jié)構(gòu)及功能上出現(xiàn)異型性改變的增生性病變,屬于胃癌前期病變,是胃癌級聯(lián)演變過程的必經(jīng)階段和接近胃癌的臨界階段。幽門螺旋桿菌感染、飲食、環(huán)境等為其常見病因[11-12]。GED的臨床癥狀以胃脘痛和胃脘脹滿為主,屬于中醫(yī)“胃痞”和“痞滿”等范疇[13]。GED病灶主要在胃體和胃竇,其病情進(jìn)展與脾、肝功能有關(guān)[14]?!八染佑谖钢校闫啥阆麓竽c”,脾胃為中焦之臟而屬土,脾主升清,以升為健,胃主降濁,以降為順。肝屬木臟,主疏泄,條暢氣機。肝氣疏泄不及,脾氣難升,胃氣難降,造成脾胃升清降濁的功能失調(diào)。經(jīng)曰:“濁氣在上,則生脹;清氣在下,則生飧泄”,由此可見,氣機的升降失常是引發(fā)胃痞、胃滿的重要病機?!饵S帝內(nèi)經(jīng)》中,陰受之以入五臟,入五臟而滿閉塞。巢元方認(rèn)為,臟腑痞塞而不宣乃營衛(wèi)不和,陰陽隔絕之所致。李用粹認(rèn)為,過食寒藥,常可致脾胃虧虛,胃脘作痛等。據(jù)此,胃脘痛、胃痞和胃滿等癥狀與陰陽失調(diào)亦關(guān)系密切[15]。

    半夏瀉心湯乃仲景調(diào)理脾胃之經(jīng)典用方。許愛麗等[16]、王艷威等[17]研究顯示,半夏瀉心湯可顯著提高慢性萎縮性胃炎患者機體免疫力、改善胃黏膜炎癥及臨床癥狀。本研究顯示,兩組治療后中醫(yī)證候各條目評分均顯著降低,且觀察組變化更明顯。在有效率上,觀察組優(yōu)于對照組。這說明西醫(yī)常規(guī)與半夏瀉心湯聯(lián)用療效確切,可顯著改善GED患者臨床癥狀。分析其原因在于,方中半夏可消痞散結(jié);黃芩、黃連清熱燥濕,可降上逆的濁氣;干姜可降凝滯寒邪;人參、炙甘草和大棗甘溫補中,可扶正驅(qū)邪,利于脾胃恢復(fù)氣機升降的功能。諸藥寒熱并用,扶正祛邪,起到調(diào)節(jié)脾胃陰陽平衡和氣機升降的功效[18-19]。因此,GED患者胃脘痛、胃滿等癥狀得到顯著改善。

    p16、PTEN均屬抑癌基因。其中,p16所編碼的蛋白可與細(xì)胞周期蛋白D競爭結(jié)合周期蛋白依賴性激酶,對細(xì)胞周期相關(guān)的磷酸化過程起抑制作用,使細(xì)胞周期無法從G1期進(jìn)入S期,進(jìn)而起到抑制細(xì)胞增殖的作用[20]。PTEN可通過抑制絲裂原蛋白活化激酶阻滯細(xì)胞周期于G1期,抑制細(xì)胞的增殖[21]?;蚣谆歉淖冞z傳表現(xiàn)而不改變DNA序列的一種DNA化學(xué)修飾形式,其甲基基團的合成需要相關(guān)轉(zhuǎn)移酶的參與,甲基基團形成后,干擾RNA聚合酶基因識別,故而引發(fā)基因的正常轉(zhuǎn)錄及表達(dá)異常[22]。本研究治療后,兩組p16、PTEN甲基化率均有所降低,表明GED患者經(jīng)半夏瀉心湯治療后,抑癌基因p16、PTEN的甲基化受抑制,利于抑癌基因p16、PTEN正常轉(zhuǎn)錄、編碼蛋白,進(jìn)而有效避免了GED患者的病情向癌變進(jìn)展。這可能是由于半夏瀉心湯處方中半夏、黃連等藥物含有復(fù)雜的化學(xué)組分,諸如半夏生物堿、谷甾醇等,可參與基因的甲基化和去甲基化過程[23-24]。因此,治療后觀察組p16、PTEN基因的甲基化率顯著降低。

    綜上,半夏瀉心湯治療GED患者可明顯減輕臨床癥狀,提高其療效,且可抑制p16、PTEN基因的甲基化,從而延緩了GED患者病情向癌變進(jìn)展。

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