• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    銀杏內(nèi)酯B通過Nrf2/HO-1通路抑制糖尿病大鼠肝損傷機制研究

    2021-08-19 07:40:10侯書鵬
    陜西中醫(yī) 2021年8期
    關(guān)鍵詞:明顯降低氧化應(yīng)激肝臟

    侯書鵬

    (河北省涿州市醫(yī)院,河北 保定 072750)

    國際糖尿病聯(lián)盟(IDF)研究顯示,2019年全球糖尿病患者超過4.6億,并預(yù)計到2045年將超過7億,其中約90%屬于2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者[1]。持續(xù)高血糖能夠誘發(fā)100多種并發(fā)癥,其中肝損傷是其最常見的并發(fā)癥之一,是導(dǎo)致糖尿病患者死亡的重要原因[2]。

    糖尿病性肝損傷病理機制復(fù)雜,其中氧化應(yīng)激在糖尿病性肝損傷的發(fā)生及其進展過程中發(fā)揮著重要作用,因此,抗氧化應(yīng)激被視為重要的治療靶點[3-4]。核因子E2相關(guān)因子2/血紅素加氧酶1(Nuclear factor E2 related factor 2/Heme oxygenase 1,Nrf2/HO-1)是機體非常重要的抗氧化信號通路,有研究顯示,激活Nrf2/HO-1通路能夠?qū)μ悄虿⌒愿螕p傷具有抑制作用[5]。銀杏內(nèi)酯B(Ginkgolide B,GB)是銀杏葉的主要活性成分之一,具有良好的抗氧化作用[6]。本實驗旨在探討GB對糖尿病大鼠肝臟的保護作用及其機制,為臨床應(yīng)用GB防治糖尿病肝損傷提供理論依據(jù),現(xiàn)報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 85只清潔級雄性SD大鼠,體重200 g~240 g,購自河北省實驗動物中心提供,許可證號:SYXK(冀)2018-004。清潔環(huán)境分籠飼養(yǎng)(室溫23 ℃~25 ℃、相對濕度50%~60%、光照黑暗12 h∶12 h)1周后開展實驗。本實驗經(jīng)涿州市醫(yī)院倫理委員會審查批準(zhǔn),倫理批件號[ZZYY(K)2020-013]。

    1.2 藥物與試劑 GB購自上海詩丹德生物技術(shù)有限公司(純度≥95%,批號:201907);二甲雙胍(Metformin,MET)購自齊魯制藥有限公司(批號:20200114);鏈尿佐菌素(Streptozotocin,STZ)購自美國Sigma公司(批號:S0130);谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)試劑盒和HE、TUNEL染色試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司(批號:BC1550、BC1560、BC0170、BC1170、BC0020、G1120、T2190);二喹啉甲酸(Quinolinic acid,BCA)檢測試劑盒購自上海圓創(chuàng)生物科技有限公司(批號:1912027);Nrf2、HO-1、核因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)、β-肌動蛋白(β-actin)抗體和IgG二抗購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司(批號:bs-1074R、bs-23397R、bs-20160R、bs-0061R、bs-0295G);3,3二氨基聯(lián)苯胺(3,3-Diaminobenzidine,DAB)顯色試劑盒購自武漢博士得生物工程有限公司(批號:20191124)。高糖高脂飼料配置:基礎(chǔ)飼料67.5%、20%蔗糖、10%豬油、2.5%膽固醇。

    1.3 模型制備與給藥 隨機取65只大鼠參照文獻[7]報道制備T2DM大鼠模型:給予高脂高糖飲食4周后腹腔注射濃度1%的STZ溶液(45 mg/kg),造模成功判斷標(biāo)準(zhǔn):注射STZ 72 h后通過血糖儀(One Touch Ⅱ型,美國強生公司)檢測空腹血糖(Fasting blood glucose,F(xiàn)BG)水平≥16.7 mmol/L。共造模成功62只大鼠(造模成功率95.38%),剔除FBG最高和最低各1只后,將剩余60只T2DM模型大鼠按血糖值分層隨機分為模型組、GB組和MET組,各20只;取剩余20只大鼠設(shè)為正常對照組(常規(guī)飼料喂養(yǎng))。GB組1次/d灌胃給予濃度0.5 mg/ml的GB溶液(10 ml/kg)[8],MET組1次/d灌胃給予濃度30 mg/ml的MET溶液(10 ml/kg)[9],正常對照組和模型組1次/d灌胃給予等體積(10 ml/kg)的0.9%氯化鈉溶液,療程8周。

    1.4 FBG水平和血清ALT、AST水平檢測 每組隨機取10只大鼠,經(jīng)尾靜脈采空腹血,通過血糖儀(One Touch Ⅱ型,美國強生公司)檢測各組大鼠FBG水平。腹腔注射10%水合氯醛(4 ml/kg)實施麻醉,經(jīng)腹主動脈采血并3500 r/min離心(r=10 cm)5 min取血清,通過全自動生化分析儀(LX-20型,美國貝克曼庫爾特有限公司)檢測各組大鼠血清ALT、AST水平。

    1.5 HE染色法行肝組織病理學(xué)檢查與非酒精性肝臟損傷評分(NAS) 頸椎脫臼處死后取肝臟,于肝臟右葉相同部位取各只大鼠部分肝組織,置10%中性甲醛溶液中固定3 d,行石蠟包埋、石蠟切片機(RM2245型,德國Leica公司)切片(4 μm厚度)和梯度乙醇水化處理后,取部分切片行HE染色,通過光學(xué)顯微鏡(DS-5M-L1型,日本尼康儀器有限公司)觀察肝組織病理學(xué)改變。

    1.6 TUNEL法觀察肝細胞凋亡狀況并計算凋亡指數(shù)(AI) 取剩余肝臟組織切片行TUNEL染色后通過光學(xué)顯微鏡(DS-5M-L1型,日本尼康儀器有限公司)觀察肝細胞凋亡狀況(細胞核黃褐色為凋亡細胞),每張染色切片選取5個不重疊的視野計數(shù)細胞總數(shù)和凋亡細胞數(shù),AI=(凋亡細胞數(shù)/細胞總數(shù))×100%。

    1.7 生化分析法檢測肝組織SOD、GSH-Px活性和MDA含量 取每組剩余的10只大鼠,腹腔注射10%水合氯醛(4 ml/kg)麻醉后頸椎脫臼處死后,于肝臟右葉相同部位取各只大鼠部分肝組織,稱重后按1∶8質(zhì)量體積比加入4 ℃裂解液,研磨勻漿后4 ℃、3500 r/min離心(r=10 cm)10 min取上清液,采用黃嘌呤氧化法檢測SOD活性,鉬酸銨法檢測CAT活性,硫代巴比妥酸法檢測MDA含量。

    1.8 Western blot法檢測肝組織Nrf2、HO-1、NF-κB蛋白表達 于肝臟右葉相同部位取各只大鼠約100 g肝組織,加入適量4 ℃ RIPA裂解液、冰上靜置15 min后,4 ℃、12000 r/min離心(r=10 cm)20 min取上清液,BCA法檢測蛋白濃度后上樣,通過電泳儀(DYCZ-40D型,北京六一儀器廠)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰凝膠電泳分離蛋白、通過轉(zhuǎn)膜槽(DYCZ-24DN型,北京六一儀器廠)濕法轉(zhuǎn)聚偏二氟乙烯(PVDF)膜、牛血清白蛋白(濃度5%)室溫封閉1 h,滴加Nrf2(1∶1000)、HO-1(1∶1000)、NF-κB(1∶1000)、β-actin(1∶1500)一抗后4 ℃孵育過夜,TBST溶液洗滌3次,滴加IgG二抗(1∶3000)后室溫孵育2 h,TBST溶液洗滌3次后滴加DAB顯色,根據(jù)目的條帶與β-actin(內(nèi)參)條帶灰度值比值進行半定量分析。

    1.9 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用LSD-t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 GB對T2DM大鼠FBG水平的影響 見表1。模型組FBG水平較正常對照組明顯升高(P<0.05);與模型組相比,GB組和MET組FBG水平明顯降低(均P<0.05);GB組和MET組FBG水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。

    2.2 GB對T2DM大鼠血清ALT、AST水平的影響 見表1。模型組血清ALT、AST水平較正常對照組明顯升高(均P<0.05);與模型組相比,GB組和MET組ALT、AST水平明顯降低(均P<0.05);與MET組比,GB組ALT、AST水平明顯降低(均P<0.05)。

    表1 GB對T2DM大鼠FBG水平和血清ALT、AST水平的影響

    2.3 GB對T2DM大鼠肝組織病變和NAS評分的影響 正常對照組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)和肝細胞形態(tài)均未見異常;模型組可見肝索結(jié)構(gòu)模糊、假性肝小葉形成,散在肝細胞空泡樣脂肪變性,炎性細胞浸潤等病變;與模型組相比,GB組和MET組大鼠肝組織上述病變明顯改善,并且GB組效果優(yōu)于MET組(圖1)。

    A:正常對照組;B:模型組;C:GB組;D:MET組

    2.4 GB對T2DM大鼠肝細胞凋亡的影響 見表2(圖2)。正常對照組大鼠肝組織可見很少量的凋亡細胞;模型組凋亡細胞數(shù)量較正常對照組明顯增多;與模型組相比,GB組和MET組肝細胞凋亡數(shù)量減少。模型組AI較正常對照組明顯升高(P<0.05);與模型組相比,GB組和MET組AI明顯降低(均P<0.05);與MET組相比,GB組AI明顯升高(均P<0.05)。

    A:正常對照組;B:模型組;C:GB組;D:MET組

    2.5 GB對T2DM大鼠肝組織SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影響 見表3。模型組肝組織SOD、GSH-Px活性較正常對照組明顯降低,MDA含量明顯升高(P<0.05);與模型組相比,GB組和MET組SOD、GSH-Px活性明顯升高,MDA含量明顯降低(均P<0.05);與MET組相比,GB組SOD活性明顯升高且MDA含量明顯降低(均P<0.05),兩組間GSH-Px活性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    表3 GB對T2DM大鼠肝組織SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影響

    2.6 GB對T2DM大鼠肝組織Nrf2、HO-1、NF-κB蛋白表達的影響 見表4(圖3)。

    表4 GB對T2DM大鼠肝組織Nrf2、HO-1、NF-κB蛋白相對表達的影響

    A:正常對照組;B:模型組;C:GB組;D:MET組

    模型組肝組織Nrf2、HO-1表達較正常對照組明顯下調(diào),NF-κB表達明顯上調(diào)(均P<0.05);與模型組相比,GB組和MET組Nrf2、HO-1表達明顯上調(diào)且NF-κB明顯下調(diào)(均P<0.05);與MET組相比,GB組Nrf2、HO-1表達明顯上調(diào)且NF-κB明顯下調(diào)(均P<0.05)。

    3 討 論

    長期高血糖將導(dǎo)致多器官并發(fā)癥,肝臟是糖脂代謝的主要場所,也是糖尿病最易累及的器官之一。有研究報道糖尿病性肝損傷并發(fā)率約占糖尿病患者的70%,具有發(fā)病隱匿、臨床表現(xiàn)不典型的特點,糖尿病終末期肝病致死率高于其心血管并發(fā)癥[10-11]。病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),胰島素分泌不足導(dǎo)致糖脂代謝紊亂,誘發(fā)氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)大量生成,引發(fā)氧化應(yīng)激損傷和細胞凋亡是糖尿病并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的重要病理機制[12-13]。徐源等[14]和周少英等[15]研究發(fā)現(xiàn)通過藥物干預(yù)抑制氧化應(yīng)激和細胞凋亡對糖尿病大鼠肝臟具有保護作用。

    糖尿病在中醫(yī)屬“消渴”范疇,其病機在于氣陰兩虛、脾腎陽虛、瘀血濁毒內(nèi)停。銀杏是中國獨有的一種中生代孑遺植物,銀杏果和銀杏葉為我國傳統(tǒng)中藥品種。其中,銀杏葉性平、味苦澀,具有活血化瘀、通絡(luò)止痛、化濁降脂之功效。GB為銀杏葉的主要活性成分,化學(xué)結(jié)構(gòu)屬于萜類內(nèi)酯化合物,現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),GB具有抑制血小板活化、抗氧化、抗凋亡等生物學(xué)活性。MET能夠提高胰島素敏感性、抑制肝糖原異生、抑制腸壁細胞攝取葡萄糖,是糖尿病治療一線用藥,并且對糖尿病所致肝損傷具有良好的治療效果[16];此外,白福瑞[17]研究發(fā)現(xiàn)MET對中醫(yī)痰濕體質(zhì)和陰虛體質(zhì)的糖尿病均效果顯著。本實驗結(jié)果顯示,給予GB治療能夠明顯降低T2DM大鼠FBG水平和血清ALT、AST水平,明顯改善肝細胞氣球樣變、脂肪性病變、炎性細胞浸潤等病理學(xué)改變和細胞凋亡狀況,降低AI;并且GB組上述作用優(yōu)于MET組,提示GB對T2DM大鼠肝臟具有保護作用。

    持續(xù)高血糖導(dǎo)致ROS大量生成與釋放,使以ROS為底物的抗氧化酶SOD、GSH-Px被過度消耗、ROS不能完全還原清除,過剩的ROS破壞生物膜、蛋白質(zhì)等生成有毒性的MDA,所以SOD、GSH-Px活性和MDA含量能夠間接反映機體氧化應(yīng)激水平[18]。本實驗結(jié)果顯示,給予GB治療能夠明顯提高T2DM大鼠肝組織SOD、GSH-Px活性并降低MDA含量,并且GB組對SOD活性和MDA含量的調(diào)節(jié)作用優(yōu)于MET組,提示GB對T2DM大鼠肝組織氧化應(yīng)激損傷具有抑制作用。

    生理狀態(tài)下,Nrf2與特異性抑制劑Keap1結(jié)合而無活性,ROS則能夠破壞“Nrf2-Keap1”結(jié)合體使Nrf2游離,Nrf2核轉(zhuǎn)位而誘導(dǎo)SOD、GSH-Px等轉(zhuǎn)錄與表達[19]。HO-1為Nrf2下游基因,能夠催化降解血紅素、CO等而抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)[20-21]。NF-κB能夠誘導(dǎo)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表達與活化而促進細胞凋亡,而HO-1對NF-κB表達與活化具有抑制作用[22-23]。本實驗結(jié)果顯示,給予GB治療能夠明顯上調(diào)T2DM大鼠肝組織Nrf2、HO-1表達并下調(diào)NF-κB表達,并且GB組對Nrf2、HO-1、NF-κB表達的調(diào)節(jié)作用優(yōu)于MET組,這可能是GB抑制T2DM大鼠肝組織氧化應(yīng)激損傷的重要分子機制。

    綜上所述,GB對糖尿病大鼠肝臟具有保護作用,可能與激活Nrf2/HO-1信號通路進而抑制氧化應(yīng)激有關(guān)。

    猜你喜歡
    明顯降低氧化應(yīng)激肝臟
    七種行為傷肝臟
    中老年保健(2022年4期)2022-11-25 14:45:02
    肝臟里的膽管癌
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:49:00
    基于炎癥-氧化應(yīng)激角度探討中藥對新型冠狀病毒肺炎的干預(yù)作用
    肝臟減負在于春
    沙利度胺對IL-1β介導(dǎo)的支氣管上皮細胞炎癥反應(yīng)的影響
    李克強:中國政府正在研究“明顯降低企業(yè)稅費負擔(dān)的政策”
    中外管理(2018年10期)2018-11-19 17:28:46
    IL-17A促進肝部分切除后IL-6表達和肝臟再生
    氧化應(yīng)激與糖尿病視網(wǎng)膜病變
    運動訓(xùn)練能夠抑制異丙基腎上腺素誘導(dǎo)的心臟炎癥反應(yīng)
    氧化應(yīng)激與結(jié)直腸癌的關(guān)系
    国产伦人伦偷精品视频| 午夜福利视频在线观看免费| 伦理电影免费视频| a级毛片在线看网站| 国产伦理片在线播放av一区| 丝袜在线中文字幕| 一二三四在线观看免费中文在| 日本av手机在线免费观看| 午夜激情久久久久久久| 视频区图区小说| 91国产中文字幕| 大型av网站在线播放| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品久久久av美女十八| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 曰老女人黄片| 欧美性长视频在线观看| 久久久国产一区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品人妻1区二区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 制服诱惑二区| 国产精品九九99| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一本大道久久a久久精品| 亚洲国产欧美在线一区| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费在线观看完整版高清| 新久久久久国产一级毛片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产片内射在线| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 91麻豆av在线| 久久久国产成人免费| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产91精品成人一区二区三区 | 新久久久久国产一级毛片| 在线观看66精品国产| 久久青草综合色| 日韩大片免费观看网站| 免费看十八禁软件| 露出奶头的视频| 国产主播在线观看一区二区| 少妇粗大呻吟视频| 我要看黄色一级片免费的| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲伊人久久精品综合| 嫁个100分男人电影在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲,欧美精品.| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产亚洲av高清不卡| 欧美人与性动交α欧美软件| 在线观看免费高清a一片| 久久国产精品人妻蜜桃| 777米奇影视久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久99一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| av国产精品久久久久影院| 亚洲国产中文字幕在线视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | av线在线观看网站| av免费在线观看网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久久久国产一级毛片高清牌| av福利片在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 波多野结衣一区麻豆| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 男女免费视频国产| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 两性夫妻黄色片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一进一出好大好爽视频| 男人舔女人的私密视频| 不卡av一区二区三区| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产单亲对白刺激| 后天国语完整版免费观看| 久久中文字幕一级| 他把我摸到了高潮在线观看 | 男女之事视频高清在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久精品国产a三级三级三级| 日本黄色视频三级网站网址 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 免费日韩欧美在线观看| 美国免费a级毛片| 日日爽夜夜爽网站| 久久久久久久久免费视频了| 成人18禁在线播放| 国产单亲对白刺激| av福利片在线| 色精品久久人妻99蜜桃| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 又黄又粗又硬又大视频| 国产99久久九九免费精品| 亚洲国产中文字幕在线视频| 在线av久久热| 精品国产一区二区久久| 成年人黄色毛片网站| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | av线在线观看网站| 9热在线视频观看99| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产99久久九九免费精品| 欧美大码av| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 99热网站在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 满18在线观看网站| 免费观看av网站的网址| 久久中文字幕一级| 午夜福利在线免费观看网站| 日韩三级视频一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 国产在线观看jvid| 男女午夜视频在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 日韩欧美国产一区二区入口| 超碰97精品在线观看| 在线观看www视频免费| 999精品在线视频| 男人舔女人的私密视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日韩视频在线欧美| 久久亚洲精品不卡| 男女床上黄色一级片免费看| 十八禁网站网址无遮挡| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲中文av在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 90打野战视频偷拍视频| 大香蕉久久网| 中文字幕人妻丝袜制服| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲精华国产精华精| 男女免费视频国产| 亚洲黑人精品在线| 亚洲人成电影观看| 操出白浆在线播放| 首页视频小说图片口味搜索| 91大片在线观看| 我的亚洲天堂| 怎么达到女性高潮| 亚洲国产欧美网| 老司机亚洲免费影院| 成年版毛片免费区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 激情视频va一区二区三区| 亚洲国产成人一精品久久久| 97在线人人人人妻| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 建设人人有责人人尽责人人享有的| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日本黄色视频三级网站网址 | 伊人久久大香线蕉亚洲五| www.自偷自拍.com| 啦啦啦免费观看视频1| kizo精华| 岛国毛片在线播放| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 五月天丁香电影| 女同久久另类99精品国产91| 国产野战对白在线观看| 国产av一区二区精品久久| 天堂动漫精品| 狠狠狠狠99中文字幕| 1024视频免费在线观看| 69精品国产乱码久久久| 免费人妻精品一区二区三区视频| 男女下面插进去视频免费观看| 男女下面插进去视频免费观看| 视频区欧美日本亚洲| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲精品美女久久av网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久av网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 黄色视频不卡| 久久精品人人爽人人爽视色| 在线天堂中文资源库| 久久久久精品人妻al黑| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 成年人免费黄色播放视频| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产伦人伦偷精品视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人精品久久二区二区91| 国产精品 国内视频| 亚洲精华国产精华精| 超色免费av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 黄色片一级片一级黄色片| 97人妻天天添夜夜摸| av欧美777| 99国产精品一区二区蜜桃av | 人妻一区二区av| 久久99一区二区三区| 国产精品成人在线| 国产成人欧美在线观看 | 欧美一级毛片孕妇| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 美女扒开内裤让男人捅视频| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美大码av| 脱女人内裤的视频| 午夜91福利影院| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 丰满少妇做爰视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 在线观看舔阴道视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 一进一出好大好爽视频| 99国产综合亚洲精品| 电影成人av| 国产单亲对白刺激| 大片免费播放器 马上看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲第一青青草原| 精品国产乱码久久久久久男人| 免费人妻精品一区二区三区视频| 两性夫妻黄色片| 18在线观看网站| 男女下面插进去视频免费观看| 99re6热这里在线精品视频| 热99久久久久精品小说推荐| 日韩欧美三级三区| 亚洲性夜色夜夜综合| 一区二区三区精品91| 99热网站在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久热在线av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 9热在线视频观看99| 天堂俺去俺来也www色官网| 韩国精品一区二区三区| 少妇精品久久久久久久| 国产伦理片在线播放av一区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产av精品麻豆| 亚洲av第一区精品v没综合| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 国产精品av久久久久免费| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品久久电影中文字幕 | 日本wwww免费看| 夫妻午夜视频| 精品第一国产精品| 九色亚洲精品在线播放| 国产深夜福利视频在线观看| h视频一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 色播在线永久视频| 国产视频一区二区在线看| 国产精品影院久久| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久免费观看电影| 十分钟在线观看高清视频www| 国产男女内射视频| 一级毛片精品| 一级a爱视频在线免费观看| 欧美激情 高清一区二区三区| av超薄肉色丝袜交足视频| 成人国产av品久久久| 淫妇啪啪啪对白视频| 一级a爱视频在线免费观看| 成人av一区二区三区在线看| 国产成人系列免费观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 成在线人永久免费视频| a级毛片在线看网站| 视频区图区小说| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲三区欧美一区| 丝袜喷水一区| 午夜福利,免费看| 色精品久久人妻99蜜桃| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 最近最新中文字幕大全电影3 | 中文亚洲av片在线观看爽 | 亚洲精品在线美女| 亚洲第一av免费看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 大型av网站在线播放| 99香蕉大伊视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国精品久久久久久国模美| 妹子高潮喷水视频| 精品一区二区三卡| 老司机影院毛片| 国产麻豆69| 日本五十路高清| 久热这里只有精品99| 母亲3免费完整高清在线观看| 夫妻午夜视频| av不卡在线播放| 欧美日韩亚洲高清精品| 在线永久观看黄色视频| 国产福利在线免费观看视频| 99久久国产精品久久久| 久久热在线av| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美在线黄色| 国产精品一区二区在线观看99| 视频区图区小说| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲美女黄片视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 午夜激情久久久久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 多毛熟女@视频| 成年版毛片免费区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 又大又爽又粗| 久久99热这里只频精品6学生| 12—13女人毛片做爰片一| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 亚洲专区字幕在线| 国产亚洲av高清不卡| 在线观看人妻少妇| 国产免费现黄频在线看| 最黄视频免费看| 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产在线观看jvid| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产片内射在线| 欧美日韩精品网址| 日韩成人在线观看一区二区三区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 大香蕉久久成人网| 午夜成年电影在线免费观看| 午夜福利影视在线免费观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 1024香蕉在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 国产男女内射视频| 无限看片的www在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 国产三级黄色录像| 一区二区av电影网| 热re99久久国产66热| 精品亚洲成a人片在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 国产精品欧美亚洲77777| www日本在线高清视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲精品乱久久久久久| netflix在线观看网站| 嫩草影视91久久| 老司机影院毛片| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 日本欧美视频一区| 69av精品久久久久久 | 丁香六月天网| 男女免费视频国产| 国产片内射在线| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 免费黄频网站在线观看国产| 大香蕉久久网| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲色图av天堂| 精品一品国产午夜福利视频| 黄频高清免费视频| 免费不卡黄色视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜免费成人在线视频| 老司机影院毛片| svipshipincom国产片| 日本黄色视频三级网站网址 | 国产日韩欧美亚洲二区| 91成年电影在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 黄色毛片三级朝国网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 性高湖久久久久久久久免费观看| 69精品国产乱码久久久| 窝窝影院91人妻| 国产野战对白在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品一区二区在线观看99| 日本av免费视频播放| 久久久久精品国产欧美久久久| 手机成人av网站| 热99久久久久精品小说推荐| 久久性视频一级片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 三上悠亚av全集在线观看| 国产三级黄色录像| 精品久久久久久电影网| 一本久久精品| 免费少妇av软件| 久久精品91无色码中文字幕| 丰满迷人的少妇在线观看| 18禁观看日本| 露出奶头的视频| 老司机福利观看| 午夜两性在线视频| 国产成人精品在线电影| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 狠狠狠狠99中文字幕| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 黄频高清免费视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 婷婷成人精品国产| 桃花免费在线播放| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 大型av网站在线播放| 真人做人爱边吃奶动态| 美女午夜性视频免费| 人人妻人人澡人人看| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品第一国产精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产黄频视频在线观看| 丰满少妇做爰视频| kizo精华| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 少妇 在线观看| 成在线人永久免费视频| 久久久精品94久久精品| 91字幕亚洲| 久久亚洲真实| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 午夜福利欧美成人| 日本一区二区免费在线视频| 9热在线视频观看99| av有码第一页| 正在播放国产对白刺激| 亚洲精品在线观看二区| 电影成人av| 大片免费播放器 马上看| 国产精品久久久人人做人人爽| 女人精品久久久久毛片| 国产成人欧美| 夜夜爽天天搞| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 色视频在线一区二区三区| 波多野结衣av一区二区av| 最新的欧美精品一区二区| 热re99久久国产66热| 日韩精品免费视频一区二区三区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 美女福利国产在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 成人手机av| 亚洲专区字幕在线| 精品乱码久久久久久99久播| 中文字幕色久视频| 婷婷成人精品国产| 久久久久国内视频| 国产亚洲精品一区二区www | 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 丝袜人妻中文字幕| 老司机亚洲免费影院| 性高湖久久久久久久久免费观看| 黄片播放在线免费| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久香蕉激情| av免费在线观看网站| 久久中文字幕人妻熟女| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 丝袜喷水一区| 久久久国产成人免费| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 天堂动漫精品| 午夜久久久在线观看| 精品亚洲成国产av| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美成人午夜精品| 18禁美女被吸乳视频| 丝袜美足系列| 国产一区二区激情短视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 美女午夜性视频免费| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 日韩一区二区三区影片| 亚洲av电影在线进入| 9色porny在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 麻豆国产av国片精品| 国产精品久久久久久精品电影小说| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产成人精品在线电影| 丰满迷人的少妇在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 男人操女人黄网站| 国产精品久久久久成人av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 黄色丝袜av网址大全| 在线观看人妻少妇| 亚洲天堂av无毛| 国产精品国产高清国产av | 免费黄频网站在线观看国产| 波多野结衣一区麻豆| 又紧又爽又黄一区二区| 国产福利在线免费观看视频| 国产成人免费无遮挡视频| 蜜桃在线观看..| 成年女人毛片免费观看观看9 | 欧美中文综合在线视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美日韩视频精品一区| 97人妻天天添夜夜摸| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| avwww免费| 一本色道久久久久久精品综合| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 高清毛片免费观看视频网站 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美日韩精品网址| 国产免费福利视频在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品免费一区二区三区在线 | 国产成人精品在线电影| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲av电影在线进入| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| 狂野欧美激情性xxxx| av天堂在线播放| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 成人国产一区最新在线观看| 久久性视频一级片| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产精品一区二区在线观看99| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲精品一二三| 午夜成年电影在线免费观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 91字幕亚洲| 99精品久久久久人妻精品| 超碰97精品在线观看| 超色免费av| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产成+人综合+亚洲专区| 日韩视频一区二区在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲久久久国产精品| 久久人妻av系列| 国产精品久久久人人做人人爽| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲第一av免费看| 亚洲成国产人片在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 国产成人av教育| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| tocl精华| 日本黄色视频三级网站网址 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 五月天丁香电影| 欧美在线一区亚洲| 国产精品98久久久久久宅男小说| 欧美精品一区二区大全| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品免费一区二区三区在线 | 国产黄色免费在线视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲av国产av综合av卡| 久久国产精品影院| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久久久久免费高清国产稀缺| 日本av免费视频播放| 激情视频va一区二区三区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美亚洲日本最大视频资源| 一区在线观看完整版| 狠狠精品人妻久久久久久综合| bbb黄色大片| 97在线人人人人妻|