中藥配方顆粒制備四黃散敷貼工藝研究

蔡 良 歐陽冬青 凌莊坤 易新淋 劉筱霞

江西百神藥業(yè)股份有限公司/江西省中藥配方顆粒重點實驗室，江西 宜春 336000

中藥貼敷劑是一種以治病防病為目標(biāo)的特色技術(shù)方法，其原理是利用中藥的特殊藥性，在相應(yīng)穴位上進(jìn)行藥物貼敷，從而達(dá)到內(nèi)病外治，祛邪散寒，調(diào)節(jié)臟腑陰陽平衡作用。中藥貼敷劑也叫“冬病夏治穴位貼”或“三伏貼”，在臨床上由于病證不同，時令季節(jié)不同，應(yīng)用時會存在多種組方和經(jīng)絡(luò)腧穴上的變化，反映了中醫(yī)藥因時治宜的治療特點。目前已廣泛應(yīng)用于支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、變應(yīng)性鼻炎、慢性支氣管炎、冠心病、骨關(guān)節(jié)炎、頸椎病，小兒呼吸道感染、肺炎等疾病的治療[1]。

中藥敷貼劑主要采用中藥飲片為原料，經(jīng)粉碎或搗爛(提取)，再加賦形劑成型而成。隨著中藥現(xiàn)代化的發(fā)展，目前已有采用中藥配方顆粒做為原料制成中藥敷貼劑的報道[2]。中藥配方顆粒是一種采用水提，以物理方法固液分離、濃縮、干燥、制粒制備而成的顆粒劑。其在臨床上用于替代中藥飲片，具有隨證加減、質(zhì)量穩(wěn)定、不用煎煮、服用攜帶方便等優(yōu)勢[3]。

在臨床應(yīng)用過程中，中藥貼敷劑會出現(xiàn)一些不良反應(yīng)，輕微不良反應(yīng)有局部皮膚潮紅、瘙癢、輕度刺痛，嚴(yán)重時會出現(xiàn)局部皮膚紅腫、過敏、大小水皰、潰爛等情況。產(chǎn)生這些不良反應(yīng)的原因與患者的過敏體質(zhì)、 貼敷時間過長、藥物濃度偏高等原因有關(guān),也可能是由于輔料引起[2，4-5]。

本實驗四黃散來源王肯堂《證治準(zhǔn)繩》中以大黃、黃連、黃柏、黃芩組方[6]，選用處方為大黃：黃柏：黃連：黃芩=10∶10∶10∶10(飲片比)，按照配方顆粒當(dāng)量換算成配方顆粒為大黃：黃柏：黃連：黃芩=330∶83∶178∶160(重量比)，主治小兒身上一切熱毒瘡疾、燥癢抓破、有汁不干。

本實驗以配方顆粒為原料，針對臨床反饋中藥粉末制備敷貼過程出現(xiàn)局部皮膚紅腫，水泡等情況，篩選出姜汁，凡士林及二氧化硅三個藥用級輔料，降低輔料導(dǎo)致的不良反應(yīng)概率，同時以賦形性、耐熱性等感官指標(biāo)為評分標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)化配方比例，并進(jìn)行三批工藝驗證。

1 材料與方法

1.1 儀器 HZY-B5000電子天平(褔州華志科學(xué)儀器有限公司)；水浴鍋(上海振捷實驗室設(shè)備有限公司)；Aglient 1260高效液相色譜儀配DAD檢測器(美國安捷倫科技公司)；梅特勒XSE205DU電子天平(Max 81g/220g d=0.01 mg/0.1 mg 梅特勒-托利多(常州)測量有限公司)；KQ-400KDE高功率數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；CSH-500SD-C藥品穩(wěn)定性試驗箱(重慶創(chuàng)測科技有限公司)。

1.2 實驗藥品及試劑 大黃(批號20181201)、黃柏(批號20180601)、黃連(批號20200301)、黃芩(批號20180601)配方顆粒均為江西百神藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；生姜(市購)、二氧化硅(安徽山河藥用輔料股份有限公司；批號200317)、凡士林(湖南九典宏陽制藥有限公司；批號TF702000101)、預(yù)膠化淀粉(南昌建峰實業(yè)有限公司；批號：200304B)、高嶺土(上海阿拉丁科技股份有限公司；批號：D2003039)、液體石蠟(上海麥克林生化科技有限公司；批號：C10397198)除液體石蠟為分析純，高嶺土為醫(yī)藥級外其它均為藥用級；pu膜空貼(海氏海諾；規(guī)格7 cm×7 cm防油圈內(nèi)徑3 cm)；鹽酸小檗堿對照品(中國食品藥品檢定研究院；批號：110713-201814)。

1.3 賦形劑篩選 對四黃散敷貼賦形劑進(jìn)行篩選，選用姜汁(料理機(jī)打碎后過200目篩即得)，凡士林，預(yù)膠化淀粉，二氧化硅，高嶺土，液體石蠟做為賦形劑[5，7-9]。通過調(diào)整顆粒與賦形劑的比例制成膏狀物，經(jīng)制錠，pu膜空貼包裝得到樣品。以1.4.1感官評價指標(biāo)項下外觀評價為評價指標(biāo)，初步篩選出合適的賦形劑種類，每個配方重復(fù)制備3組。

1.4 正交實驗設(shè)計 通過賦形劑篩選，確定四黃散敷貼賦形劑種類及比例后，進(jìn)行正交實驗優(yōu)化各物料配比(見表1)，按照感官評價指標(biāo)進(jìn)行評分(滿分50分)，篩選出最佳的基質(zhì)配方。

1.4.1 感官評價指標(biāo)[10-12]

外觀(共10分)：取四黃散敷貼，揭開保護(hù)膜，膏面光潔 、色澤一致，無脫膏、失黏現(xiàn)象，背襯面平整、潔凈、無漏膏現(xiàn)象俱佳得6～10分，膏面不光潔、色澤不一致或一項不佳得1～5分，兩項以上不佳得0分。

皮膚追隨性(共10分)：將成型膏劑貼于手腕背部，用力甩10下不脫落，滿分為10分，脫落之前已甩的次數(shù)為得分。

以下檢查參照《中國藥典》2015年版四部通則0122通則進(jìn)行。

耐熱性(共10分)：背襯無滲油現(xiàn)象，膏面光澤，用手指觸試仍有彈性俱佳者得10分，背襯略有滲油者為8分，背襯滲油明顯或一項不佳者1～6分，兩項以上不佳得0分。

賦形性(共10分)：膏面無流淌現(xiàn)象者為10分，略有流淌現(xiàn)象者為4～8分，流淌現(xiàn)象明顯者為0分。

剝離性(共10分)： 無殘留者為10分，較易剝離、略有殘留者者4～8分，難以剝離、殘留嚴(yán)重者為0分。

1.4.2 多因素考察試驗 采用正交試驗設(shè)計法優(yōu)選四黃散敷貼配方。以感官得分為評價標(biāo)準(zhǔn)，正交水平試驗表格見表1。

表1 四黃散敷貼正交試驗因素

1.5 鹽酸小檗堿含量考察 四黃散含有大黃、黃連、黃柏、黃芩四味配方顆粒，有效成分為鹽酸小檗堿、大黃總蒽醌與游離蒽醌、黃芩苷等。實驗選取鹽酸小檗堿為含量指標(biāo)，考察三批工藝驗證的四黃散敷貼鹽酸小檗堿含量及含量損失情況。

1.5.1 鹽酸小檗堿含量測定 按照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0512)測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(50∶50)(每100 mL中加十二烷基硫酸鈉0.4 g，再以磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0)為流動相；檢測波長為345 nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰峰計算應(yīng)不低于5000。

供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品，混勻，取適量，研細(xì)，精密稱取0.10 g黃連及黃柏配方顆粒，0.25 g敷貼，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(100∶1)的混合溶液50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，以鹽酸小檗堿對照品為參照，以其相應(yīng)的峰為參照物峰，計算表小檗堿，黃連堿，巴馬汀各峰的相對保留時間，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的加減5%范圍之內(nèi)。相對保留時間及校正因子見表2。

表2 相對保留時間及校正因子

以鹽酸小檗堿峰面積為對照，分別乘以校正因子，計算表小檗堿、黃連堿和巴馬汀的含量。

計算公式：含量(mg/g)=CR×Ax/AR×50×25/m

式中：CR為鹽酸小檗堿對照品溶液的濃度(mg/mL)；AR為鹽酸小檗堿對照品的峰面積；Ax為樣品中鹽酸小檗堿峰面積；m為供試品稱樣量(g)。

1.5.2 制備過程鹽酸小檗堿含量損失考察 四黃散敷貼含有鹽酸小檗堿的配方顆粒為黃連配與黃柏。制備敷貼過程中在80°水浴下操作，有效成分會出現(xiàn)部分降解或轉(zhuǎn)化，對制備過程含量損失進(jìn)行考察，計算公式如下：

配方顆粒中含量=a×(黃柏配方顆粒含量×b+黃連配方顆粒含量×c)

含量損失率=(1-四黃散敷貼含量/配方顆粒含量)×100%

式中a為配方顆粒占敷貼總量的比例；b、c為黃柏、黃連配方顆粒占配方顆粒的比例，b=83/751c=178/751。

2 結(jié)果

2.1 賦形劑初篩 按照配方顆粒添加量不少于50%，賦形劑種類盡可能少為原則進(jìn)行試驗，確定以下6個配方可以制備成膏狀物，將制備得到的膏狀物制錠后，撕開pu膜觀察外觀形態(tài)，結(jié)果見表3。

表3 不同賦形劑制備敷貼外觀形態(tài)

結(jié)果表明配方3、6制備樣品感官均較好。其中配方3效果最佳，配方3中選用了姜汁、凡士林、高嶺土做賦形劑，但國內(nèi)生產(chǎn)藥用級高嶺土的廠家少，純度較高的高嶺土主要從德國、澳大利亞等國家進(jìn)口，且價格較貴達(dá)到130元/kg左右，制備成本較高。因此確定配方6為合適配方，初步篩選確定賦形劑種類為姜汁、凡士林、二氧化硅。

2.2 正交實驗 為探索最佳的四黃散敷貼配方，對姜汁、凡士林、二氧化硅及中藥配方顆粒四因素進(jìn)行正交試驗優(yōu)化，實驗結(jié)果見表4，方差分析表見5。

表4 L9(34)正交實驗結(jié)果

表5 L9(34)方差分析

通過直觀分析得出，各因素對綜合評分影響大小為D>A>C>B，通過方差分析可知A、D因素為顯著影響因子，最佳配方為A3B1C3D2，即四黃散敷貼最佳配方為中藥配方顆粒60%、姜汁25%、凡士林10%、二氧化硅5%。

2.3 三批驗證 對篩選后的配方進(jìn)行三批次工藝驗證，稱取60%配方顆粒與5%二氧化硅混合，加入25%姜汁80度水浴鍋內(nèi)攪拌化開后，加入10%凡士林溶解攪拌均勻后，放冷，壓錠，包裝。參照1.4.1進(jìn)行感官評價指標(biāo)進(jìn)行綜合評分，參照1.5.1與1.5.2進(jìn)行含量測定與計算含量損失率。具體數(shù)據(jù)見表6。

表6 三批四黃散質(zhì)量情況

結(jié)果表明按照優(yōu)選后工藝制備的四黃散貼膏體均勻，耐熱性、賦形性、剝離性等指標(biāo)均較好，三批敷貼鹽酸小檗堿含量相近，工藝制備過程含量損失率小于5.0%。

3 討論

本實驗對中藥配方顆粒制備四黃散敷貼工藝進(jìn)行研究，篩選得到的三種賦形劑價格便宜，易得且能符合藥用要求，其中生姜、凡士林為常用賦形劑，二氧化硅也鮮有不良反應(yīng)報道，應(yīng)用臨床可以降低由于輔料原因?qū)е碌牟涣挤磻?yīng)概率。

經(jīng)過正交實驗優(yōu)化后確定四黃散敷貼制備工藝按照顆粒60%、生姜汁25%、凡士林10%、二氧化硅5%，經(jīng)稱量，壓錠，包裝即得。該制備方法載藥量可達(dá)60%，外觀符合要求，且處理過程含量成分損失較小。本實驗為配方顆粒外用敷貼制劑提供數(shù)據(jù)支撐，為了滿足臨床調(diào)配需要，臨床可根據(jù)實際需要微調(diào)基質(zhì)比例，或敷貼規(guī)格以達(dá)到治療需求。