• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測定母乳及牛乳中5種磷脂質(zhì)量濃度

    2021-08-14 11:08:20梁雪田芳蔡小堃毛穎異NickCellar趙艷榮朱惠蓮
    中國乳品工業(yè) 2021年7期
    關(guān)鍵詞:全脂牛乳磷脂

    梁雪,田芳,蔡小堃,毛穎異,Nick A.Cellar,趙艷榮,朱惠蓮

    (1.雅培營養(yǎng)中國研發(fā)中心,上海200233;2.中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營養(yǎng)學(xué)系,廣州510080;3.雅培營養(yǎng)品,美國 哥倫布OH 43219)

    0 引 言

    磷脂是一類存在于生物界的含磷脂質(zhì),母乳和牛乳中磷脂主要包括磷脂酰乙醇胺(PE),磷脂酰肌醇(PI),磷脂酰絲氨酸(PS),磷脂酰膽堿(PC)和鞘磷脂(SM)5大類[1]。目前,乳制品磷脂總含量的測定主要采用稱重法[2-3]、比色法[4]、紫外分光光度[5]和紅外光譜(FTIR)法[6]等,而磷脂不同組分的分離和測定的方法有薄層層析色譜法(TLC)[7]、核磁共振波譜法(NMR)[8]和高效液相色譜法(HPLC)[9-10]和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS)[11]。HPLC-ELSD法普遍用于檢測牛奶、乳制品[12-18]和母乳[19-20]的磷脂,而檢測母乳中磷脂的研究中,只有Giuffrida等人[20]對母乳基質(zhì)中的方法進(jìn)行驗(yàn)證,但沒有提供磷脂的檢測限(LOD)和定量限(LOQ)的數(shù)據(jù)信息,并且PI和PS的分析范圍可能需要改進(jìn),以滿足母乳中這兩種較低水平磷脂的定量測定需要。因此,建立磷脂含量的準(zhǔn)確、高效及簡便的測定方法是目前仍需解決的問題。

    本文建立并優(yōu)化HPLC-ELSD法測定母乳和牛乳中5種磷脂質(zhì)量濃度及構(gòu)成,該方法操作簡便快速、精密度好、回收率高,對乳制品種磷脂的定量檢測提供參考依據(jù)。

    1 實(shí) 驗(yàn)

    1.1 試劑耗材與儀器

    三氯甲烷,HPLC級,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;甲醇,Thermo Fisher;甲酸、氯化鈉,anpel;三乙胺,Sigma-Aldrich)。

    高效液相色譜儀(HPLC),Agilent1260;配置蒸汽發(fā)光檢測器(ELSD)Agilent1260,Agilent;色譜柱BETA SIL silica-100(200×3 mm,3μm),Thermo Fisher;Thermo REL5004V冰箱,Thermo Fisher;Gilson移液槍,Gilson;PTFE濾膜(13 mm×0.2μm),Agilent。

    1.2 標(biāo)準(zhǔn)品

    PI,P0639-25M G(PI鈉鹽),≥99%;PE,P7943-25MG(來自蛋黃),≥97%;PC,P3556-100MG(來自蛋黃),≥99%;SM,85615-50MG(來自蛋黃),≥98%;PS,P7769-25MG(來自牛腦),≥97%;均來自Sigma公司。

    1.3 樣品

    母乳樣品:廣州地區(qū)成熟乳(n=10,產(chǎn)后天數(shù)40~45 d),母乳樣品從廣州中醫(yī)藥大學(xué)祈福醫(yī)院收集(全段乳);

    牛乳樣品(液態(tài)乳):包括膜過濾牛乳、巴氏殺菌全脂牛乳、巴氏殺菌脫脂牛乳、超高溫瞬時滅菌(UHT)全脂牛乳、超高溫瞬時滅菌(UHT)低脂牛乳購于當(dāng)?shù)厥袌?,詳?xì)信息見表1。

    表1 牛乳生產(chǎn)基本信息

    1.4 方法

    1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

    (1)配制儲備液。取標(biāo)準(zhǔn)品PE,PI,PS,PC,SM(均取25.00 mg,精確到0.01 mg),加溶劑氯仿/甲醇(9∶1)混合液,用容量瓶定容(PE,PS,PC,SM 10 mL,PI50 mL),配置成儲備液。

    (2)配制系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液?;旌蠘?biāo)準(zhǔn)儲備液的配制:分別取0.5 mL PC儲備液,0.5 mL PS儲備液,0.5 mL PE儲備液,0.5 mL PS儲備液,1.5 mL PI儲備液于玻璃管中,用移液管移取,充分混勻。

    表2 系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

    (3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將磷脂混合標(biāo)準(zhǔn)系列測定液依次進(jìn)行HPLC色譜測定。記錄各組分的色譜峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)測定液的濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.4.2 乳樣中磷脂的測定

    參考Lopez等人[13]的方法,取250μL乳樣(母乳/牛乳,每組樣品都檢測相同的一個平行樣,檢測結(jié)果取平均值,以保證結(jié)果的穩(wěn)定性及準(zhǔn)確性),加入250μL的水和9.5 mL氯仿-甲醇混合液(2∶1,體積比),放入50 mL玻璃管中,渦旋充分混勻。樣本溶液放入超聲波振蕩器中40℃超聲15 min,取出樣本溶液并加入2 m L的飽和氯化鈉溶液,渦旋混合30 s以上,充分混勻。離心(2 000 r/min,5 min),出現(xiàn)分層(上層為水相,下層為有機(jī)相),用玻璃滴管將下層有機(jī)相轉(zhuǎn)移到玻璃頂空瓶中。玻璃管剩余溶液加氯仿-甲醇混合液(6∶1,體積比)7 m L再次提取,渦旋30 s以上,充分混勻。再次離心(2 000 r/min,5 min),吸取下層有機(jī)相溶液合并于頂空瓶中。在40℃水浴中氮吹將溶劑蒸發(fā)至干,樣品溶于250μL氯仿-甲醇混合液(9∶1,體積比),渦旋充分混勻,通過0.2μm×4 mm PTFE濾膜過濾,轉(zhuǎn)移到進(jìn)樣小瓶,進(jìn)行HPLC-ELSD分析。色譜柱為BETA SIL silica-100(200 mm×3 mm,3μm),柱溫為40℃,進(jìn)樣量為25μL,ELSD檢測器蒸發(fā)溫度為85℃,噴霧溫度為40℃,流速N2為1.4 L/min,流動相A為三氯甲烷-甲醇-甲酸(濃度1 mol/L,三乙胺調(diào)p H=3)(87.5∶12∶0.5,體積比),流動相B為三氯甲烷-甲醇-甲酸(濃度1 mol/L,三乙胺調(diào)p H=3)(28∶60∶12,體積比)。HPLC參考色譜梯度洗脫程序見表3。

    表3 HPLC參考色譜梯度洗脫程序

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。采用單因素ANOVA的多重比較來評估多個樣本間數(shù)據(jù)差異的顯著性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 方法驗(yàn)證

    本研究選用廣州地區(qū)收集的3例成熟母乳(40~45 d)樣品充分混勻,做為方法驗(yàn)證的基質(zhì)樣品,對所建立的磷脂分析方法的檢出限(LOD)、定量限(LOQ)、分析范圍、精密度及準(zhǔn)確性進(jìn)行了全面的驗(yàn)證。

    2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線分析范圍,檢出限與定量限

    使用標(biāo)準(zhǔn)系列混合工作液建立校準(zhǔn)曲線,根據(jù)母乳樣品中各磷脂的質(zhì)量濃度水平確定合適的分析范圍。5種磷脂在驗(yàn)證的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均大于0.999,分析范圍以mg/L母乳樣品表示。待測樣品的色譜峰信噪比為3時對應(yīng)的濃度為本方法磷脂的檢出限(LOD),以信噪比為10時對應(yīng)的濃度為本方法磷脂的定量限(LOQ),經(jīng)過計(jì)算得出,本方法的檢出限(LOD)范圍為0.69~2.97 mg/L,定量限(LOQ)范圍為2.29~9.90 mg/L,在此范圍內(nèi),分析方法具有良好的靈敏度,可以滿足母乳樣品中5種磷脂的定量檢測,見表4。

    表4 磷脂的分析范圍及相關(guān)系數(shù) g/L

    2.1.2 精密度與準(zhǔn)確性

    選用廣州地區(qū)成熟乳制備混樣(n=3,產(chǎn)后天數(shù)40~45 d)(乳樣品是當(dāng)天收集分裝,保存在-80°C冰箱。混合樣品是將樣品解凍充分混勻,分裝保存在-20°C冰箱),計(jì)算此混樣中各磷脂8天16次測定結(jié)果的平均值及標(biāo)準(zhǔn)偏差,5種磷脂檢測結(jié)果的RSD的范圍在2.73%~10.03%之間,說明此方法具有良好的精密度。以此樣品做為基質(zhì),選用3個不同的磷脂質(zhì)量濃度水平(分別為基質(zhì)本底質(zhì)量濃度的50%、100%和150%)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),研究每個濃度水平3天6次檢測結(jié)果的平均回收率,以驗(yàn)證此方法的準(zhǔn)確性。5種磷脂在3種濃度水平的加標(biāo)回收率均在80.17%~101.81%之間,總磷脂含量的回收率在90.06%~91.37%之間,說明此方法具有良好的準(zhǔn)確性,能夠滿足磷脂分析的要求,驗(yàn)證結(jié)果見表5。

    表5 磷脂測定方法精密度和加標(biāo)回收率的驗(yàn)證結(jié)果

    2.2 母乳和牛乳的測定與分析

    采用上述方法對廣州地區(qū)收集的10個成熟乳樣品(40~45 d),以及5種市面上常見的牛乳樣品(膜過濾牛乳、巴氏殺菌全脂牛乳、巴氏殺菌脫脂牛乳、UHT全脂牛乳、UHT低脂牛乳)的磷脂質(zhì)量濃度進(jìn)行測定,見表6。對母乳和牛乳磷脂質(zhì)量濃度進(jìn)行單因素ANOVA分析,再采用LSD進(jìn)行兩兩比較。

    母乳樣品的總磷脂質(zhì)量濃度顯著高于3種不同生產(chǎn)工藝的全脂牛乳(膜過濾牛乳、巴氏殺菌全脂牛乳、UHT全脂牛乳)(P<0.05),表現(xiàn)為母乳SM的質(zhì)量濃度約是3種全脂牛乳SM的2.1倍;3種全脂乳之間總磷脂質(zhì)量濃度無顯著差異(P>0.05);對于同一生產(chǎn)工藝的牛乳來說,全脂牛乳總磷脂的質(zhì)量濃度大于脫(低)脂牛乳(P<0.05),表現(xiàn)為全脂牛乳PE、PC和PI的質(zhì)量濃度約是脫脂牛乳的1.6倍;不同工藝生產(chǎn)的脫(低)脂乳無差異(P>0.05)。

    對于母乳和牛乳磷脂的構(gòu)成比,采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析,母乳磷脂與3種全脂牛乳之間、不同生產(chǎn)工藝的全脂乳之間、同一生產(chǎn)工藝的脫(低)脂牛乳和全脂牛乳脂檢均無差異(P>0.05),因此母乳和牛乳磷脂的構(gòu)成比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。經(jīng)過多重比較,母乳與牛乳中PE和SM的百分含量差異顯著,成熟乳中的PE的構(gòu)成比比牛乳低大約10%,而SM的構(gòu)成比比牛乳高大約10%。結(jié)果表明,母乳磷脂與牛乳磷脂組成相似,其中以PE、PC和SM為主(約占磷脂總量的80%)。而3種優(yōu)勢類型的磷脂在母乳中的比值為PE∶PC∶SM=1.2∶0.8∶1.0,牛乳中的比值為PE∶PC∶SM=2.6∶1.6∶1.0。結(jié)果如表7所示。

    表7 不同地區(qū)母乳磷脂的質(zhì)量濃度及構(gòu)成比

    圖1 母乳和牛乳中磷脂構(gòu)成比的比較

    3 討 論

    本研究顯示,PE、PI、PS、PC和SM的分析范圍分別為11.9~142.9,9.5~57.2,11.5~69.1,14.2~113.6 mg/L和13.6~109.0 mg/L,定量限分別為4.1,9.9,6.3,4.3 mg/L和2.3 mg/L。這表明建立的方法靈敏度較高,可以對母乳和全脂牛乳中的5類磷脂進(jìn)行定量分析,見表6。將樣品量增加到0.5 mL來檢測脫脂牛乳中的磷脂,以確保其檢測結(jié)果在方法分析范圍內(nèi)。該方法步驟相對較少,簡化了樣品制備過程,適用于大樣本量的常規(guī)分析。

    表6 母乳和牛乳中磷脂質(zhì)量濃度 mg/L

    分析方法、地理差異、樣品采集季節(jié)、哺乳期、胎齡、飲食等因素均可導(dǎo)致磷脂質(zhì)量濃度和組成的差異。用建立的HPLC-ELSD法測定母乳中總磷脂的平均質(zhì)量濃度為204.5±9.4 mg/L(n=10),本研究結(jié)果位于世界各地報(bào)道的結(jié)果范圍內(nèi),且與新加坡早期成熟乳的研究結(jié)果比較接近(具體數(shù)據(jù)見表7)。關(guān)于母乳的構(gòu)成,本研究結(jié)果顯示,成熟乳中磷脂的構(gòu)成以PE為主,其次是SM和PC,與日本早期成熟乳的研究結(jié)果相似,而在新加坡、德國和西班牙等地的研究中發(fā)現(xiàn),SM在早期成熟乳的構(gòu)成中起主要作用。

    本研究結(jié)果表明,不同的生產(chǎn)工藝,包括UHT、巴氏殺菌和膜過濾,對牛乳中磷脂的質(zhì)量濃度和構(gòu)成沒有顯著影響。膜過濾是一個相對溫和的處理過程,而巴氏殺菌和UHT則要經(jīng)過一定的熱處理。本研究結(jié)果表明,在牛乳熱處理過程中,磷脂是一類相對穩(wěn)定的活性物質(zhì),磷脂是乳脂球膜(M FGM)的重要組成部分,同時具有親油性和親水性,有一定的乳化作用。有研究報(bào)道存在于乳化液中的磷脂對整個乳化體系的熱穩(wěn)定性有提升作用[22],而分離出來的MFGM(富含磷脂)在空氣中儲存期間會經(jīng)歷嚴(yán)重的氧化反應(yīng)[23]。所以,磷脂的穩(wěn)定性會受到多方面因素的影響,與其存在的基質(zhì)和氧化條件密切相關(guān)。脫脂牛乳是通過去除全脂牛乳中的乳脂來生產(chǎn)的,Deeth等人[24]報(bào)道,脫脂奶中也含有膜成分,其含量和組成均與MFGM相似。本研究結(jié)果也表明,脫脂后的牛乳中仍有約60%的磷脂殘留在乳液中,且磷脂組成與全脂牛乳相似。這些都使牛乳及其加工制品(乳脂肪、乳粉等)成為嬰兒配方奶粉中磷脂的良好來源,為其提供與母乳相似的營養(yǎng)價值。

    4 結(jié) 論

    本研究建立的HPLC-ELSD方法具有良好的準(zhǔn)確性和精密度,方法的分析范圍、檢出限和定量限均能滿足母乳和牛乳中磷脂的檢測要求。建立的方法適用于母乳和牛乳中5種磷脂(PE、PI、PS、PC、SM)的測定。該方法的應(yīng)用表明,該方法是常規(guī)分析中快速、準(zhǔn)確地鑒定和定量5類磷脂的可靠的方法。全脂牛乳的總磷脂質(zhì)量濃度略低于早期成熟母乳(40~45 d),而牛乳的磷脂構(gòu)成與母乳相似。這表明牛乳是一種很好的磷脂來源,可以為嬰兒配方奶粉提供這些重要的活性營養(yǎng)素,其質(zhì)量濃度和構(gòu)成與母乳相似。

    猜你喜歡
    全脂牛乳磷脂
    牛乳中脂肪摻假檢測技術(shù)的研究進(jìn)展
    低脂/脫脂牛奶一定比全脂牛奶更健康嗎
    喝全脂牛奶 兒童少肥胖
    保健與生活(2020年7期)2020-04-28 08:02:46
    大黃酸磷脂復(fù)合物及其固體分散體的制備和體內(nèi)藥動學(xué)研究
    中成藥(2019年12期)2020-01-04 02:02:24
    消毒鮮牛乳還要煮嗎
    自我保健(2020年8期)2020-01-01 21:12:03
    低脂/脫脂牛奶一定比全脂牛奶更健康嗎
    柚皮素磷脂復(fù)合物的制備和表征
    中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:18
    辣椒堿磷脂復(fù)合凝膠的制備及其藥動學(xué)行為
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:31
    白楊素磷脂復(fù)合物的制備及其藥動學(xué)行為
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    全脂牛奶的奮斗史
    知識窗(2014年11期)2014-11-14 02:27:01
    亚洲成人一二三区av| 亚洲五月色婷婷综合| 日本-黄色视频高清免费观看| 嫩草影院入口| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 秋霞在线观看毛片| 色哟哟·www| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 欧美日本中文国产一区发布| 简卡轻食公司| 中文字幕最新亚洲高清| 久久久午夜欧美精品| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 夫妻午夜视频| 91国产中文字幕| 免费av不卡在线播放| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久99热6这里只有精品| 高清欧美精品videossex| 色哟哟·www| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产极品天堂在线| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 一级毛片aaaaaa免费看小| 乱人伦中国视频| 精品一区二区三区视频在线| 一级毛片我不卡| 精品一区在线观看国产| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 老女人水多毛片| 婷婷色综合www| 精品一区二区免费观看| 老司机影院毛片| 97在线人人人人妻| 午夜91福利影院| 日本色播在线视频| 男女无遮挡免费网站观看| 成人无遮挡网站| 午夜免费鲁丝| av福利片在线| 国产精品久久久久久久电影| 人妻系列 视频| 国产免费视频播放在线视频| 国产视频首页在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲情色 制服丝袜| 久久久久久久久久久久大奶| 国产乱人偷精品视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 我的女老师完整版在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 国产淫语在线视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 多毛熟女@视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产欧美亚洲国产| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 欧美3d第一页| 日本欧美国产在线视频| 成人国语在线视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 伊人亚洲综合成人网| 两个人的视频大全免费| 欧美最新免费一区二区三区| 九九在线视频观看精品| 久久人妻熟女aⅴ| 十八禁网站网址无遮挡| 高清在线视频一区二区三区| 欧美xxxx性猛交bbbb| videossex国产| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产男女内射视频| 日韩大片免费观看网站| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 成人黄色视频免费在线看| 欧美精品一区二区免费开放| 美女大奶头黄色视频| av网站免费在线观看视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 免费观看在线日韩| 热re99久久精品国产66热6| 啦啦啦啦在线视频资源| 天美传媒精品一区二区| 26uuu在线亚洲综合色| 国产成人精品福利久久| 最新中文字幕久久久久| 99视频精品全部免费 在线| 看免费成人av毛片| 99视频精品全部免费 在线| 国产免费一级a男人的天堂| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲av国产av综合av卡| 国产伦精品一区二区三区视频9| 777米奇影视久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久久国产一区二区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 美女内射精品一级片tv| 少妇熟女欧美另类| 日本91视频免费播放| 亚洲中文av在线| 交换朋友夫妻互换小说| 精品一区在线观看国产| 国产老妇伦熟女老妇高清| 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品国产三级国产专区5o| 18+在线观看网站| 亚洲成人av在线免费| 2022亚洲国产成人精品| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久久久久久久久久免费av| 下体分泌物呈黄色| 色哟哟·www| 精品少妇黑人巨大在线播放| 性色av一级| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品99久久久久久久久| 老司机亚洲免费影院| 人成视频在线观看免费观看| 精品酒店卫生间| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲欧洲日产国产| 色吧在线观看| av网站免费在线观看视频| 免费看不卡的av| 欧美丝袜亚洲另类| 日韩av免费高清视频| 日本wwww免费看| 男女啪啪激烈高潮av片| 狂野欧美激情性bbbbbb| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品女同一区二区软件| 大码成人一级视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 内地一区二区视频在线| 美女内射精品一级片tv| 只有这里有精品99| 黄色配什么色好看| 国产乱人偷精品视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲中文av在线| 大陆偷拍与自拍| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久ye,这里只有精品| 热re99久久国产66热| 欧美丝袜亚洲另类| 欧美激情国产日韩精品一区| freevideosex欧美| 只有这里有精品99| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 黑人猛操日本美女一级片| 久久97久久精品| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 18禁动态无遮挡网站| 伊人久久国产一区二区| 高清午夜精品一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| 国产综合精华液| 精品人妻熟女av久视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产黄片视频在线免费观看| 妹子高潮喷水视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久99精品国语久久久| 国产精品三级大全| 五月天丁香电影| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩一本色道免费dvd| 在线观看三级黄色| 一级毛片我不卡| 18禁观看日本| 女性生殖器流出的白浆| 成人国产麻豆网| 国产精品三级大全| 亚洲精品第二区| 国产一区有黄有色的免费视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 亚洲美女视频黄频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 特大巨黑吊av在线直播| www.av在线官网国产| 午夜日本视频在线| 有码 亚洲区| 午夜福利影视在线免费观看| 丝袜喷水一区| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲欧美一区二区三区国产| 99久久精品一区二区三区| 全区人妻精品视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 成人二区视频| 国产男女超爽视频在线观看| 国产 一区精品| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 美女福利国产在线| 国产69精品久久久久777片| 黄色一级大片看看| 看非洲黑人一级黄片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 一本久久精品| av卡一久久| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲国产最新在线播放| 老司机影院成人| 欧美丝袜亚洲另类| 乱码一卡2卡4卡精品| 少妇的逼水好多| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 爱豆传媒免费全集在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲精品自拍成人| 国产极品天堂在线| 国产一区二区三区av在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| www.色视频.com| 国产精品人妻久久久影院| 午夜激情久久久久久久| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久99热这里只频精品6学生| 丰满少妇做爰视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产伦精品一区二区三区视频9| 一本大道久久a久久精品| 国产高清三级在线| 日本黄色日本黄色录像| av在线观看视频网站免费| 欧美性感艳星| 内地一区二区视频在线| 免费观看在线日韩| 永久网站在线| 国产在线一区二区三区精| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲人成网站在线播| 午夜影院在线不卡| 国产高清三级在线| 国产毛片在线视频| av有码第一页| 国产精品一区二区在线观看99| 黑丝袜美女国产一区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 黄色怎么调成土黄色| 精品午夜福利在线看| 精品一区在线观看国产| 久久精品久久精品一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 免费大片18禁| 99九九在线精品视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 老司机亚洲免费影院| 亚洲精品456在线播放app| 国产高清三级在线| 免费大片黄手机在线观看| 天天操日日干夜夜撸| 人成视频在线观看免费观看| 国产极品天堂在线| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲国产成人一精品久久久| 秋霞在线观看毛片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美 日韩 精品 国产| 国产色婷婷99| 日韩成人伦理影院| 性高湖久久久久久久久免费观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 中文欧美无线码| 亚洲熟女精品中文字幕| xxx大片免费视频| 日本欧美国产在线视频| 欧美人与善性xxx| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲综合色惰| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲av男天堂| 曰老女人黄片| 午夜免费观看性视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产成人免费无遮挡视频| 伊人久久国产一区二区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 青春草亚洲视频在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产男女内射视频| 少妇熟女欧美另类| av有码第一页| 国产男女内射视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产淫语在线视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产av国产精品国产| 一个人免费看片子| 国产黄色免费在线视频| 91精品国产国语对白视频| av专区在线播放| 国产精品 国内视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久这里有精品视频免费| 亚洲精品自拍成人| 久久99热这里只频精品6学生| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久精品人人爽人人爽视色| 午夜免费鲁丝| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 成年美女黄网站色视频大全免费 | av在线观看视频网站免费| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品欧美亚洲77777| 一区二区三区乱码不卡18| 国产精品国产av在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 777米奇影视久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 一区二区三区乱码不卡18| 日韩一区二区三区影片| 精品亚洲成国产av| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产极品天堂在线| av一本久久久久| 国产亚洲精品久久久com| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 日韩中文字幕视频在线看片| 久久午夜福利片| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲国产日韩一区二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产黄色视频一区二区在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 91久久精品国产一区二区成人| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久99一区二区三区| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产片内射在线| 99九九在线精品视频| 亚洲不卡免费看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 99久久人妻综合| 大香蕉久久网| 久久99蜜桃精品久久| 2018国产大陆天天弄谢| 黄色毛片三级朝国网站| 如何舔出高潮| av视频免费观看在线观看| videosex国产| 91aial.com中文字幕在线观看| 精品久久久精品久久久| 日韩在线高清观看一区二区三区| 五月玫瑰六月丁香| 免费少妇av软件| 亚洲精品乱久久久久久| 丁香六月天网| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲不卡免费看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 91久久精品国产一区二区三区| 99久久精品一区二区三区| 少妇的逼好多水| 中文字幕久久专区| 国产亚洲最大av| 国产精品国产av在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲精品美女久久av网站| 国产黄片视频在线免费观看| 亚洲成色77777| 一区二区三区乱码不卡18| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久午夜福利片| 九九在线视频观看精品| 热99国产精品久久久久久7| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲,欧美,日韩| 丰满乱子伦码专区| 蜜桃在线观看..| av免费观看日本| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美日韩在线观看h| 亚洲人与动物交配视频| 91精品三级在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 十八禁网站网址无遮挡| 高清不卡的av网站| 免费大片黄手机在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 午夜影院在线不卡| 亚洲综合色网址| 国产高清三级在线| 亚洲精品乱久久久久久| 国产深夜福利视频在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产成人一区二区在线| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 日日撸夜夜添| 少妇 在线观看| 精品酒店卫生间| 亚洲欧洲日产国产| 精品亚洲成a人片在线观看| 在线播放无遮挡| 精品久久久久久电影网| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲人成网站在线观看播放| 69精品国产乱码久久久| 国产亚洲精品久久久com| 在线播放无遮挡| 啦啦啦在线观看免费高清www| 超碰97精品在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 黄色怎么调成土黄色| 欧美变态另类bdsm刘玥| 天美传媒精品一区二区| 大香蕉久久网| 久久国内精品自在自线图片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 插逼视频在线观看| 中国国产av一级| 亚洲av成人精品一区久久| 波野结衣二区三区在线| 免费观看a级毛片全部| 丝袜美足系列| 国产日韩欧美在线精品| 人人妻人人澡人人看| 下体分泌物呈黄色| 在线精品无人区一区二区三| 精品午夜福利在线看| 亚洲成人一二三区av| av.在线天堂| 久久久久久久精品精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成年美女黄网站色视频大全免费 | av在线播放精品| 免费黄频网站在线观看国产| 蜜臀久久99精品久久宅男| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 永久网站在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 91精品国产九色| 国产永久视频网站| 在线观看免费高清a一片| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 国产精品免费大片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日韩av不卡免费在线播放| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 97超碰精品成人国产| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 成年女人在线观看亚洲视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产免费视频播放在线视频| videosex国产| 搡老乐熟女国产| www.av在线官网国产| 美女内射精品一级片tv| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 天堂中文最新版在线下载| 久久精品国产亚洲网站| 男人操女人黄网站| 日本91视频免费播放| 亚洲国产欧美在线一区| av线在线观看网站| 3wmmmm亚洲av在线观看| 高清在线视频一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 一级毛片aaaaaa免费看小| 欧美日韩精品成人综合77777| av黄色大香蕉| 男女国产视频网站| 在线精品无人区一区二区三| 丝袜美足系列| 九草在线视频观看| 午夜91福利影院| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 性色av一级| av免费在线看不卡| 亚洲欧美色中文字幕在线| 色哟哟·www| 色5月婷婷丁香| 大片电影免费在线观看免费| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品.久久久| 欧美日韩av久久| 蜜臀久久99精品久久宅男| 三级国产精品片| 欧美日韩在线观看h| 久久久久久久国产电影| 精品一区二区免费观看| 蜜桃在线观看..| 9色porny在线观看| 五月开心婷婷网| 99九九在线精品视频| 十八禁网站网址无遮挡| 日日爽夜夜爽网站| 九九在线视频观看精品| 国产精品嫩草影院av在线观看| www.av在线官网国产| 一本一本综合久久| 一级,二级,三级黄色视频| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲精品一区蜜桃| 中国国产av一级| 九草在线视频观看| 性色avwww在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 下体分泌物呈黄色| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品一二三区在线看| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产乱人偷精品视频| 亚洲综合色网址| 另类亚洲欧美激情| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 免费观看av网站的网址| 狂野欧美激情性bbbbbb| 制服诱惑二区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产av影院在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产精品人妻久久久影院| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 午夜激情久久久久久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 黄片播放在线免费| 久久久久久久久久人人人人人人| 在线免费观看不下载黄p国产| 一区在线观看完整版| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲av福利一区| 国产精品国产av在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 制服丝袜香蕉在线| 麻豆乱淫一区二区| 视频区图区小说| 婷婷色av中文字幕| 视频区图区小说| 18+在线观看网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 九色亚洲精品在线播放| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产爽快片一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 国产av一区二区精品久久| 国产黄片视频在线免费观看| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品久久久久成人av| 中文字幕人妻丝袜制服| 日本欧美国产在线视频| videosex国产| 国产av码专区亚洲av| 美女内射精品一级片tv| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲高清免费不卡视频| 国产有黄有色有爽视频| 老司机影院成人| 国产黄频视频在线观看| videos熟女内射| 一级毛片电影观看| 91精品三级在线观看| 一二三四中文在线观看免费高清| 99精国产麻豆久久婷婷| 精品一区二区三区视频在线| 国产极品天堂在线| 18禁动态无遮挡网站| 中国三级夫妇交换| 考比视频在线观看| 午夜免费鲁丝| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产成人aa在线观看| 日本av免费视频播放| 一本大道久久a久久精品| 久久久久久久久久久免费av| 日日爽夜夜爽网站| 免费大片黄手机在线观看| 天美传媒精品一区二区| 99国产精品免费福利视频|