不同種源八月瓜種子發(fā)芽率及總黃酮含量測(cè)定研究

李曉斌，陸文，林旭俊，李善志，陳旭，郭霞

海南省林業(yè)科學(xué)研究院（海南省紅樹林研究院），海南海口 571100

八月瓜（Holboellialatifolia Wall）是木通科木通屬的多年生藤本植物[1，2]，具有較高的藥用和食用價(jià)值，果實(shí)口感香甜，且含有豐富的維生素C、蛋白質(zhì)氨基酸、可溶性糖等營養(yǎng)成分和人體必需的微量元素，同時(shí)在改善人體消化系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等方面具有較高價(jià)值[1，3]。近期八月瓜被作為扶貧產(chǎn)業(yè)在四川、湖南、貴州等地進(jìn)行推廣種植，并取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益[3-4]。

八月瓜中存在著豐富的黃酮成分，具有較高的生理學(xué)保健功能[5-6]。黃酮是一種很強(qiáng)的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，這種阻止氧化的能力是維生素E 的10 倍以上，抗氧化作用可以阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發(fā)生[7-8]；黃酮還可以改善血液循環(huán)，降低膽固醇，這些作用大大降低了心腦血管疾病的發(fā)病率或改善心腦血管疾病的癥狀，具有廣闊的市場前景[9]?；诎嗽鹿狭己玫臓I養(yǎng)成分，通過收集不同種源的八月瓜，對(duì)其進(jìn)行種子繁育及果皮、果肉中總黃酮含量的測(cè)定，為八月瓜產(chǎn)品的開展提供依據(jù)。

1 研究區(qū)概況

海南省林業(yè)科學(xué)研究院（海南省紅樹林研究院）定安龍州基地（19°31′N～19°44′N，110°7′E～110°31′E），位于海南省定安縣龍州鄉(xiāng)，南渡江中下游南畔。土壤類型為沙質(zhì)壤土和棕色粘土，土壤透水性較好，但肥力欠佳。屬熱帶海洋性季風(fēng)氣候，陽光充足，雨量充沛，2018 全年無霜期，1 月份均溫21℃，極高溫27℃，極低溫10℃；7 月份均溫31℃，極高溫37℃，極低溫24℃；12 月平均溫度24℃，極高溫30℃，極低溫10℃；年均氣溫、日照和降水量分別為24℃、1880h、1953mm。冬春季干旱，夏秋季節(jié)多臺(tái)風(fēng)暴雨。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料

八月瓜種子來源于云南、貴州、廣東、湖南、江西5 個(gè)地區(qū)，人工繁育；總黃酮測(cè)定的八月瓜果實(shí)為海南省林業(yè)院自主培育不同種源苗木所結(jié)果實(shí)；蘆丁對(duì)照品（含量≥98%）。

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 種子不同處理方法

選用籽粒飽滿、沒有殘缺或畸形、無病蟲害的種子，用1%高錳酸鉀溶液消毒10min，清水沖洗后，分別用冷水、溫水、10%赤霉素浸泡。浸泡時(shí)間均為2h，直接播種作為空白對(duì)照。每處理使用種子30 粒，重復(fù)3 次。

播種基質(zhì)為河沙，基質(zhì)使用前噴灑土壤消毒劑，并覆蓋上塑料薄膜，進(jìn)行基質(zhì)消毒。7d 后將處理好的基質(zhì)混合均勻，用于發(fā)芽試驗(yàn)及苗床育苗。

溫度在22℃～27℃，光照條件為自然光。

播種后，當(dāng)胚芽出土?xí)r，觀測(cè)記錄每個(gè)處理的發(fā)芽率，對(duì)各處理的發(fā)芽率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)：

發(fā)芽率=發(fā)芽數(shù)/播種數(shù)×100%。

2.2.2 不同播種基質(zhì)選擇

試驗(yàn)為單因子試驗(yàn)，采用全河沙、全黃土、黃土：河沙：椰糠=3：1：2 作為育苗基質(zhì)，基質(zhì)使用前噴灑土壤消毒劑，并覆蓋上塑料薄膜，進(jìn)行消毒。

播種前將種子用1%高錳酸鉀溶液消毒10min，清水沖洗后，用10%赤霉素浸泡2h 后播種于不同基質(zhì)。每個(gè)處理30 粒種子，重復(fù)3 次。

播種后，當(dāng)胚芽出土?xí)r，觀測(cè)記錄每個(gè)處理的發(fā)芽率，對(duì)各處理的發(fā)芽率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)：

發(fā)芽率=發(fā)芽數(shù)/播種數(shù)×100%。

2.2.3 總黃酮測(cè)定方法

八月瓜總黃酮測(cè)定采用紫外-可見光光度法測(cè)定，根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)波長為200nm～760nm 這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。

（1）樣品制備。稱取不同種源八月瓜樣品0.3g，每個(gè)種源重復(fù)3 次，加入70%乙醇30mL，密塞，稱定重量，靜置3h，超聲提取30min，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾。取濾液1mL，加去離子水6mL，加1mL5%NaNO2，搖勻靜置6min，然后加入1mL10%Al （NO3）3，搖勻靜置6min，再準(zhǔn)確加入10mL4%NaOH，最后加去離子水定容到25mL，搖勻，靜置15min。于510nm 處進(jìn)行比色，讀取吸光度。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。取6 支試管，取蘆丁對(duì)照品溶液0mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL，分別置于25mL 的容量瓶中，分別加去離子水6mL、5.5mL、5mL、4.5mL、4mL、3.5mL，依次各加入1mL5%NaNO2，搖勻靜置6min，然后再依次各加入1mL10%Al（NO3）3，搖勻靜置6min，再準(zhǔn)確依次各加入10mL4%NaOH，最后加去離子水定容到25mL，搖勻，放置15min 后待測(cè)。于510nm 處比色，測(cè)定吸光度。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同處理方法對(duì)八月瓜種子發(fā)芽率的影響

種子千粒重直接反應(yīng)了種子的大小和飽滿程度，種子育苗前首先對(duì)種子進(jìn)行千粒重測(cè)定評(píng)判其質(zhì)量好壞。研究收集云南、貴州、廣東、湖南、江西5個(gè)地方的種子進(jìn)行測(cè)定，為種子育苗奠定基礎(chǔ)，具體數(shù)據(jù)如下表1：

表1 八月瓜種子測(cè)試結(jié)果Tab.1 Test results of Holboellialatifolia Wall seeds

根據(jù)表1 可以看出不同種源間的種子千粒重均存在差異性。種子千粒重表現(xiàn)最好的是貴州種源（189.13±5.22），其次為云南種源、湖南種源、江西種源、廣東種源。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，種子育苗選用貴州種源的種子。根據(jù)種子不同處理方式，對(duì)比發(fā)芽率，選取最合適的種子處理方式，如表2：

表2 不同處理的八月瓜種子發(fā)芽率統(tǒng)計(jì)Tab.2 Germination statistics of Holboellialatifolia Wall seeds under different treatments

種子發(fā)芽率直接反應(yīng)了種子品質(zhì)的好壞。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同浸泡處理的種子發(fā)芽率表現(xiàn)出明顯差異，種子發(fā)芽最早的是10%赤霉素浸泡（28d），其次為溫水浸泡（37d）、冷水浸泡（48d）；對(duì)比整個(gè)發(fā)芽過程，發(fā)現(xiàn)10%赤霉素浸泡的種子發(fā)芽率最高（92.6%），最低的直播種子發(fā)芽率為50.1%。

3.2 不同播種基質(zhì)對(duì)八月瓜種子發(fā)芽率的影響

表3 不同播種基質(zhì)的八月瓜種子發(fā)芽率統(tǒng)計(jì)Tab.3 Germination statistics of Holboellialatifolia Wall seeds with different sowing substrates

試驗(yàn)結(jié)果表明，不同播種基質(zhì)處理的種子發(fā)芽率表現(xiàn)出明顯差異，種子發(fā)芽最早的是河沙，且發(fā)芽率最高也是河沙（92.6%）。

3.3 不同種源八月瓜總黃酮含量測(cè)定

不同種源八月瓜總黃酮含量測(cè)定基于統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)曲線下進(jìn)行測(cè)定。不同種源八月瓜總黃酮含量測(cè)定結(jié)果見表4：

表4 八月瓜果肉和果皮中總黃酮含量Tab.4 Contents of Ttotal Flavonoids in flesh and peel of Holboellialatifolia Wall

研究表明，野生八月瓜果肉占比在10%～20%之間，在海南通過人工干預(yù)，果肉占比可以達(dá)到40%以上；果肉中總黃酮含量最高的是云南種源（1.173%），其次為廣東種源（0.789%）和貴州種源（0.738%）；果皮中總黃酮含量最高的是湖南種源（1.412%），其次為貴州種源（0.818%）和廣東、江西種源（均為0.782%）；總含量的排序?yàn)椋汉戏N源＞云南種源＞廣東種源＞貴州種源＞江西種源。

對(duì)不同種源八月瓜果實(shí)總黃酮含量的影響進(jìn)行方差分析（p＜0.05），如表5，根據(jù)結(jié)果可以看出，江西種源與云南種源差異不顯著，其他4 個(gè)種源間差異均顯著。

4 結(jié)論與討論

隨著生活水平的日益提高，人們對(duì)純天然綠色食品的需求越來越大，加上野生果樹具有很大的蘊(yùn)藏量，食果的加工、深加工及綜合開發(fā)利用將有廣闊的市場前景。八月瓜的營養(yǎng)豐富，果實(shí)乳白，清甜多汁，口感遠(yuǎn)勝蜂蜜，其果實(shí)含有多種可溶性果糖、淀粉、碳水化合物以及人體所需的微量元素和多種維生素，是一種富含營養(yǎng)的上品野生瓜果。

八月瓜一般9 月～10 月成熟，將種子及時(shí)秋播或用濕沙混合貯藏，到翌年3 月～4 月播種。該研究通過開展種子發(fā)芽率試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)種子播種前采用10%赤霉素浸泡種子2h，隨后采用撒播的方式進(jìn)行播種，育苗基質(zhì)采用全河沙基質(zhì)，發(fā)芽率可以達(dá)到90%以上，這為八月瓜種子育苗的后續(xù)研究及推廣提供了技術(shù)支持。

八月瓜含有豐富的黃酮成分，具有養(yǎng)顏美容、強(qiáng)身健體的保健效果。該試驗(yàn)通過對(duì)不同種源的八月瓜果實(shí)的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)果肉中總黃酮含量最高的是云南種源（1.173%），其次為廣東種源（0.789%）和貴州種源（0.738%）；果皮中總黃酮含量最高的是湖南種源（1.412%），其次為貴州種源（0.818%）和廣東、江西種源（均為0.782%）；總含量的排序?yàn)椋汉戏N源＞云南種源＞廣東種源＞貴州種源＞江西種源。這些數(shù)據(jù)為八月瓜鮮果、果茶等產(chǎn)品開發(fā)銷售提供了依據(jù)。