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    兩種魚粉水平對9個斑節(jié)對蝦家系生長性能及飼料利用的影響

    2021-08-10 09:06:20陳振葆周發(fā)林楊其彬黃建華楊麗詩江世貴
    海洋漁業(yè) 2021年4期
    關鍵詞:斑節(jié)生長率魚粉

    陳振葆,周發(fā)林,姜 松,楊其彬,黃建華,楊麗詩,江世貴

    (1.中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所,農(nóng)村農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室,廣州 510300;2.上海海洋大學水產(chǎn)與生命學院,上海 201306;3.中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗基地,廣東深圳 518121)

    斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)俗稱草蝦、九節(jié)蝦,具有個體大、適應性強、肉味鮮美等特點,是世界三大養(yǎng)殖對蝦種類之一,也是我國重要的養(yǎng)殖對蝦品種。近年來,魚粉價格的不斷上漲致使飼料成本不斷上升,魚粉的相對短缺制約了對蝦養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,因此,尋求新型高效魚粉替代物成為對蝦養(yǎng)殖業(yè)亟待解決的問題之一。為了解決魚粉依賴問題,一些學者開展了植物蛋白替代魚粉的研究,以求降低對蝦飼料中魚粉的添加水平,并取得了較好的效果[1-5]。和魚粉相比,植物蛋白的氨基酸組成不平衡,缺乏蛋氨酸、賴氨酸等某些必需氨基酸,當飼料中植物蛋白替代魚粉水平過高時,會造成水產(chǎn)養(yǎng)殖對象攝食量下 降[1,6-7]、生 長 緩 慢[6,8-9]、飼 料 利 用 率 降低[1,6,9-10]等一系列問題。已有的研究表明,斑節(jié)對蝦不同家系對飼料利用和飼料蛋白需求存在顯著差異[11-12],黃忠等[11]對6個斑節(jié)對蝦家系進行家系選育,發(fā)現(xiàn)不同斑節(jié)對蝦家系的生長、成活率及對飼料的利用存在差異;姜松[12]比較研究了不同飼料蛋白水平對斑節(jié)對蝦家系的影響,選育出了若干個適應低蛋白水平飼料的斑節(jié)對蝦家系。因此,通過家系選育方法,選育出適應植物蛋白替代部分魚粉即低魚粉水平飼料的斑節(jié)對蝦良種,為有效解決魚粉成本問題的另外一種途徑。

    PARIPATANANONT等[1]對斑節(jié)對蝦的研究表明,大豆?jié)饪s蛋白可以替代斑節(jié)對蝦飼料中50%的魚粉,而不會對對蝦攝食量、生長、存活、及飼料利用產(chǎn)生不利的影響。在凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)的研究中,當飼料中發(fā)酵豆粕替代小于33.33%魚粉時,對對蝦的增重率、特定生長率、飼料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率無顯著影響[13]。張加潤等[5]對斑節(jié)對蝦的研究表明,大豆?jié)饪s蛋白和花生麩組合而成的混合植物蛋白可以替代飼料中20%的魚粉。本研究利用9個斑節(jié)對蝦家系為實驗材料,比較分析正常魚粉水平的飼料(飼料魚粉水平為30%)和以豆粕和大豆分離蛋白為混合植物蛋白源替代33.33%魚粉的飼料(飼料魚粉水平為20%)對其生長性能及飼料利用的影響,旨在為進一步開展適應植物蛋白替代部分魚粉蛋白飼料的斑節(jié)對蝦良種選育提供基礎數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 試驗蝦家系構(gòu)建

    以“南海1號”、非洲品系以及泰國來源的種質(zhì)群體斑節(jié)對蝦為親本,采用定向交配設計及人工授精技術(shù),將雄蝦成熟精莢移入蛻殼在24 h內(nèi)的雌蝦納精囊內(nèi),建立全同胞家系。構(gòu)建好的家系在室內(nèi)水泥池中進行標粗。

    1.2 實驗飼料

    實驗飼料為2種等氮等脂飼料,分別為正常魚粉水平飼料(飼料魚粉水平為30%)和混合植物蛋白替代魚粉飼料[飼料魚粉水平為20%,以豆粕和大豆分離蛋白(10∶3)為混合植物蛋白源替代正常魚粉水平飼料配方中33.33%的魚粉]。所有原料經(jīng)粉碎后過60目篩,準確稱重后按照逐級放大的原則混勻,然后加入油源和適量的水混合均勻,用F-26雙螺桿擠條機(華東理工大學科技實業(yè)總廠,中國)加工成直徑1.20 mm和直徑1.50 mm的顆粒飼料,在90℃烘箱(烘箱內(nèi)放適量的清水)中烘烤2 h,在裝有空調(diào)的房間內(nèi)陰干后置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。實驗飼料配方見?。

    表1 飼料配方組成及營養(yǎng)成分Tab.1 Composition and nutrient content of experimental diets (%)

    1.3 實驗對象管理

    實驗在中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所深圳基地室內(nèi)養(yǎng)殖車間進行,試驗蝦苗來自產(chǎn)卵日期相近(±2 d)的9個斑節(jié)對蝦家系,每個家系隨機挑選出大小均勻、體色正常、體質(zhì)健康的試驗對蝦,隨機分入玻璃纖維桶(500 L),每個魚粉水平飼料組設置3個平行,每個平行放30尾,兩個魚粉水平所需試驗對蝦共計180尾,試驗蝦體長小于5 cm時,投喂直徑1.2 mm的顆粒飼料,體長大于5 cm時,投喂直徑1.5 mm的顆粒飼料,采用定時表觀飽食法進行投喂(8∶00、17∶00和22∶00),每次投喂后分別在1 h和1.5 h觀察餌料臺內(nèi)的飼料剩余情況,在1 h內(nèi)吃完的試驗組則增加投餌量,1.5 h內(nèi)還有剩余餌料的試驗組則減少投餌量,每天投喂量為對蝦體質(zhì)量的6%~8%。養(yǎng)殖用水為沙濾海水,經(jīng)水處理后使用。實驗期間,水溫27~32℃,鹽度28~32,自然采光,24 h不斷充氧曝氣,養(yǎng)殖實驗共計60 d。

    1.4 生長性能指標測定

    實驗結(jié)束后,將試驗蝦饑餓24 h,用毛巾吸干試驗蝦體表水分,計算每個玻璃纖維桶試驗蝦的數(shù)量并稱取總質(zhì)量,用于計算每個家系試驗蝦的存活率、特定生長率及飼料系數(shù),其計算公式如下:

    式(1)~式(3)中,Wo為實驗開始時體質(zhì)量(g);Wt為實驗結(jié)束時質(zhì)量(g);t為養(yǎng)殖實驗天數(shù)(d);Nf為終末尾數(shù);Ni為初始尾數(shù);F為消耗的飼料干物質(zhì)的質(zhì)量(g)。

    1.5 糞便收集與飼料干物質(zhì)表觀消化率測定

    1.5.1 糞便收集

    投喂前虹吸干凈試驗桶中的殘餌及糞便,投喂1 h后開始收集糞便,用虹吸法收集糞便至密網(wǎng)上,用鑷子挑選新鮮、外表帶有包膜的完整糞便,蒸餾水漂洗后用干凈濾紙吸干水分,收集至塑料培養(yǎng)皿(濕重30 g),于-20℃冰柜保存?zhèn)溆?。測定前糞便于60℃烘干,并使用破碎儀粉碎成粉狀待測。

    1.5.2 糞便和飼料中Y2 O3含量測定

    Y2O3由于具有化學和生物學惰性,因此作為外源指示劑被廣泛應用于營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的測定,一般在飼料中的添加量為0.01%,根據(jù)指示劑及營養(yǎng)成分在飼料和糞便中的含量便可測得營養(yǎng)成分的表觀消化率[14]。糞便和飼料中Y2O3含量采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES法)測定。測定前,糞便和飼料用粉碎儀粉碎,用電子天平(0.000 1 g)分別準確稱取0.1 g糞便和飼料樣品置于干凈的凱氏燒瓶(100 mL),用移液槍吸取15 mL濃硝酸(65%~68%)加入瓶中,使樣品浸潤,同時做一個空白對照。將凱氏燒瓶置于通風櫥內(nèi)帶石棉網(wǎng)的電爐上慢慢加熱硝化,當溶液燒到僅剩2 mL左右并呈澄清透明時將燒瓶從電爐上取下冷卻。冷卻后加入1 mL高氯酸(70%~72%)繼續(xù)加熱,當燒瓶內(nèi)充滿白色煙霧且溶液僅剩1 mL左右時,繼續(xù)加熱5 min然后取下冷卻。冷卻后,用適量雙蒸水洗滌凱氏燒瓶至少4次,用容量瓶(50 mL)定容至50 mL,使用干凈漏斗和濾紙將所得溶液過濾,取10 mL過濾液裝于塑料離心管(10 mL),所得樣品送至中山大學測試中心大樓檢測糞便和飼料中Y2O3含量,用于計算飼料干物質(zhì)的表觀消化率。

    其計算公式如下:

    飼料干物質(zhì)表觀消化率(apparent feed dry matter digestibility,%)=(1-A/A′)×100(4)式(4)中,A為飼料中Y2O3含量,A′為糞便中Y2O3含量

    1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    實驗結(jié)果用平均值±標準誤差(mean±SD)表示,數(shù)據(jù)統(tǒng)計使用SPSS 23.0分析軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(one-way ANOVA),并結(jié)合Duncan法進行多重比較,檢驗組間差異顯著性(P<0.05),采用獨立樣本t檢驗,檢驗同一家系不同魚粉水平飼料組間的差異顯著性(P<0.05),采用多因素方差分析,檢驗飼料魚粉水平與家系間是否存在交互作用(P<0.05)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 兩種魚粉水平飼料對9個斑節(jié)對蝦家系生長性能的影響

    2.1.1 30%飼料魚粉水平對9個斑節(jié)對蝦家系生長性能的影響

    經(jīng)過60 d的養(yǎng)殖實驗,30%魚粉水平下不同家系生長性能存在差異(表2)。1號、2號、7號家系生長較快,它們都顯著高于3號、5號、9號家系(P<0.05);3號、4號、5號、9號家系生長速度較慢,它們的特定生長率都低于所有家系的平均特定生長率(3.07±0.09)%(表2)。根據(jù)特定生長率結(jié)果,可以將1號、2號、7號家系確定為快速生長的家系,3號、4號、5號、9號家系的特定生長率低于所有家系的平均特定生長率,可以將它們確定為生長速度較慢的家系,6號、8號家系為中速生長家系。存活率方面,5號(73.33±10.00)%、9號(66.66±3.33)%、4號(58.89±1.11)%、3號(55.56±2.94)%家系的存活率較高,它們的存活率都高于所有家系的平均存活率(46.05±3.75)%(表2)。其中,5號、9號、4號家系都顯著高于1號、2號、6號、8號家系(P<0.05);1號、2號、6號、7號、8號家系成活率較低,它們的存活率都低于所有家系的平均存活率,根據(jù)存活率結(jié)果,可將5號、9號、4號、3號家系確定為存活率高的家系。在飼料系數(shù)方面,4號家系最高(3.06±0.12),其顯著高于除3號家系以外的其余家系(P<0.05)。其余家系間差異不顯著(P>0.05)。

    2.1.2 20%飼料魚粉水平對9個斑節(jié)對蝦家系生長性能的影響

    經(jīng)過60 d的養(yǎng)殖實驗,20%魚粉水平下不同家系生長性能見表3。2號(3.99±0.05)%和7號(3.68±0.11)%家系生長速度最快,它們的特定生長率顯著高于其余各家系(P<0.05),3號、4號、5號、8號、9號家系的生長速度較慢,它們的特定生長率都低于所有家系的平均特定生長率(3.06±0.10)%(表3)。根據(jù)特定生長率結(jié)果,在飼料魚粉含量為20%時,可以將2號、7號家系確定為生長快速家系,3號、4號、5號、8號、9號家系確定為生長較慢家系,1號和6號家系為中速生長家系。在存活率方面,1號、3號、4號、5號、9號家系的存活率都高于所有家系的平均存活率(49.01±3.72)%(表3),其中,5號和9號家系顯著高于其余各家系(P<0.05),1號、3號、4號家系顯著高于2號、7號及8號家系(P<0.05),其余家系間差異不顯著(P>0.05)。根據(jù)存活率結(jié)果,可將5號、9號家系確定為存活率高的家系,1號、3號、4號家系為存活率較高家系。在飼料系數(shù)方面,3號家系最高(2.39±0.05),其顯著高于1號、2號、7號家系(P<0.05),其余家系間差異不顯著(P>0.05)。

    2.1.3 同一斑節(jié)對蝦家系在兩種魚粉水平飼料下生長性能的比較

    根據(jù)表2、表3的結(jié)果,可以比較同一家系在兩種魚粉水平下的生長性能,如圖1可見,同一家系的特定生長率、存活率和飼料系數(shù)在30%魚粉水平飼料組和20%魚粉水平飼料組之間差異不顯著(P>0.05)。

    圖1 同一斑節(jié)對蝦家系在兩種魚粉水平飼料下生長性能的比較Fig.1 Comparison of growth performance of the same P.monodon family under two dietary fish meal levels

    表2 30%魚粉水平飼料對9個斑節(jié)對蝦家系生長性能的影響Tab.2 Effects of diets of 30%fish meal levels on growth performance of 9 P.monodon families

    表3 20%魚粉水平飼料對9個斑節(jié)對蝦家系生長性能的影響Tab.3 Effects of diets of 20%fish meal levels on growth performance of 9 P.monodon families

    2.2 兩種魚粉水平飼料對9個斑節(jié)對蝦家系飼料干物質(zhì)表觀消化率的影響

    如表4所示,在投喂30%魚粉水平的飼料時,3號家系的飼料干物質(zhì)表觀消化率顯著低于1號、7號家系(P<0.05),其余各組間差異不顯著(P>0.05)。在投喂20%魚粉水平的飼料時,2號家系的飼料干物質(zhì)表觀消化率(78.51±0.53)%最高,其顯著高于3號、6號、9號家系(P<0.05),其余各組間差異不顯著(P>0.05)。雖然同一魚粉水平飼料下,不同家系之間表現(xiàn)存在差異,但是同一家系的飼料干物質(zhì)表觀消化率在30%魚粉水平飼料組和20%魚粉水平飼料組之間差異不顯著(P>0.05)(圖2)。

    圖2 同一斑節(jié)對蝦家系在兩種魚粉水平飼料下飼料干物質(zhì)表觀消化率比較Fig.2 Comparison of apparent feed dry matter digestibility of the same P.monodon family under two dietary fish meal levels

    2.3 統(tǒng)計指標的主體間效應檢驗

    如表5所示,特定生長率、存活率、飼料系數(shù)、飼料干物質(zhì)表觀消化率等統(tǒng)計指標經(jīng)雙因素方差分析顯示,飼料魚粉水平和家系不存在顯著性交互作用(P>0.05),其與家系呈現(xiàn)顯著相關(P<0.05),其中特定生長率、存活率、飼料系數(shù)與家系呈現(xiàn)極顯著相關(P<0.01)。

    表5 統(tǒng)計指標主體間效應檢驗Tab.5 Test of intersubjective effect of statistical index

    2.4 兩種魚粉水平飼料對斑節(jié)對蝦生長性能及飼料利用的影響

    把所有斑節(jié)對蝦家系視為一個來源豐富的群體,就能得到斑節(jié)對蝦在兩種魚粉水平飼料下生長性能及對飼料利用的情況,由表2~表4可以看出,斑節(jié)對蝦在兩種魚粉水平飼料下的特定生長率、飼料效率及飼料干物質(zhì)表觀消化率不存在顯著性差異(P>0.05)。

    表4 兩種魚粉水平飼料對9個斑節(jié)對蝦家系飼料干物質(zhì)表觀消化率的影響Tab.4 Effects of two dietary fish meal levels on apparent dry matter digestibility of 9 P.monodon families(%)

    3 討論

    飼料中魚粉水平從30%下降至20%不會影響 對 蝦 的 生 長 性 能 及 飼 料 利 用[5,15-16]。ALVAREZ等[15]使用豆粕替代的魚粉,使得魚粉水平從29%降至22%后,不影響凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)的生長及飼料系數(shù)。同樣的,LIM等[16]使用豆粕替代的魚粉,使得魚粉水平從32%降至21.3%后,不影響凡納濱對蝦的生長、飼料系數(shù)及蛋白質(zhì)效率。在本研究中,同一家系在兩種魚粉水平下的特定生長率、飼料系數(shù)無顯著性差異(圖1)。并且,在特定生長率方面,在20%魚粉水平下,9個家系中有6個家系的特定生長率在數(shù)值上高于30%魚粉水平飼料組。在飼料系數(shù)方面,有研究表明,在低魚粉替代的情況下,飼料系數(shù)降低[1];在本實驗中,魚粉水平從30%下降至20%時,除了8號、9號家系數(shù)值升高,其余家系的飼料系數(shù)降低,8號、9號家系升高的可能原因是家系本身不能適應飼料中增加的大豆蛋白,因為大豆蛋白中含有抗營養(yǎng)因子[17],而大豆蛋白中的某些抗營養(yǎng)因子會降低斑節(jié)對蝦對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的利用,導致斑節(jié)對蝦不得不加大攝食量來彌補機體對營養(yǎng)物質(zhì)的需求,因此造成了飼料系數(shù)指標升高,但具體原因有待進一步的研究。在飼料利用方面,實驗結(jié)果表明,同一家系在兩種魚粉水平飼料投喂的情況下,干物質(zhì)表觀消化率數(shù)值相近,沒有呈現(xiàn)出顯著差異性(圖2)。綜上,說明在本實驗條件下,使用豆粕和大豆分離蛋白組成的混合植物蛋白替代斑節(jié)對蝦飼料中33.33%的魚粉并不影響斑節(jié)對蝦的生長及對飼料的利用能力,斑節(jié)對蝦飼料中使用豆粕和大豆分離蛋白組成的混合植物蛋白替代33.33%的魚粉具有可行性。

    飼料中魚粉的替代水平與試驗蝦大小密切相關,試驗蝦規(guī)格越小,對飼料中魚粉的依賴程度越高。在對初始體質(zhì)量為1.13 g凡納濱對蝦的研究中,發(fā)現(xiàn)發(fā)酵豆粕可以替代1/3的魚粉(基礎飼料中魚粉含量30%),而在初始體質(zhì)量為0.10 g的凡納濱對蝦實驗中,發(fā)現(xiàn)發(fā)酵豆粕替代魚粉(基礎飼料中魚粉含量33%)的比例不宜超過20%[18]。魚粉替代水平不僅跟試驗動物大小有關,還跟飼料魚粉替代水平有關。當飼料中魚粉替代水平為100%時,星斑川鰈(Platichthys stellatus)的增重率和特定生長率顯著降低[19],在對凡納濱對蝦[2]的研究中也發(fā)現(xiàn),魚粉替代水平過高而增重率和特定生長率降低的情況。本實驗中,實驗斑節(jié)對蝦規(guī)格較大,體質(zhì)量在0.76 g左右,魚粉水平從30%降低到20%沒有影響斑節(jié)對蝦的特定生長率、存活率、飼料系數(shù)及飼料干物質(zhì)表觀消化率,說明使用魚粉水平為20%的飼料投喂體質(zhì)量為0.76 g的斑節(jié)對蝦時,不會對其生長造成不良影響。

    在本實驗中,同一魚粉水平飼料在投喂不同斑節(jié)對蝦加錫時生長性能存在顯著性差異,這與前人對斑節(jié)對蝦的研究結(jié)果一致[11,20-21],孔天時等[22]對中國對蝦家系的研究也得到了相似的成果,不同中國對蝦家系在養(yǎng)成期的生長存在顯著性差異,造成這種現(xiàn)象的原因是家系之間的遺傳物質(zhì)不同[12]。對特定生長率、存活率、飼料系數(shù)及飼料干物質(zhì)表觀消化率的多因素方差分析表明(表5),飼料魚粉水平與斑節(jié)對蝦家系不存在顯著性交互作用,斑節(jié)對蝦家系的特定生長率、存活率、飼料系數(shù)、飼料干物質(zhì)表現(xiàn)消化率與飼料魚粉水平無顯著性相關,而與家系本身顯著性相關,說明特定生長率、存活率、飼料系數(shù)及飼料干物質(zhì)表觀消化率受對蝦本身的遺傳物質(zhì)主導,從側(cè)面說明了隨著飼料中魚粉水平的降低,不同斑節(jié)對蝦的表現(xiàn)型差異就會顯現(xiàn)出來,本實驗結(jié)果說明,斑節(jié)對蝦不同家系之間具有基因水平的差異性,因此,不同的家系是良好的育種選育材料,通過家系選育的方法選育出適應低魚粉水平飼料斑節(jié)對蝦新品種具有可行性。本實驗是通過使用10%的豆粕和3%的大豆分離蛋白替代飼料配方中33.33%的魚粉來降低魚粉水平,因此,接下來可以考慮進一步降低飼料中的魚粉水平,增加飼料中大豆蛋白含量,加大飼料中抗營養(yǎng)因子含量的水平變化,加大對斑節(jié)對蝦的選育強度。

    本次實驗對蝦成活率差異大,投喂魚粉水平為30%的飼料時,成活率在20.00%~73.33%;投喂魚粉水平為20%的飼料時,成活率在25.56%~73.34%,同一飼料投喂下,個別家系存活率偏低,與其他家系間存在顯著性差異,甚至與個別家系間存在極顯著性差異。造成這種現(xiàn)象的原因是由于家系親本來源地域不同,種質(zhì)存在差異[23],研究發(fā)現(xiàn),相比較于其他地域來源的親本,非洲海域來源的親本產(chǎn)生的家系后代成活率偏低[24]。孫苗苗等[25]在關于斑節(jié)對蝦家系抗逆性的研究中發(fā)現(xiàn),家系氨氮抗性的強弱跟母本地域來源有關。姚雪梅[26]在凡納濱對蝦雜交系子一代存活率的研究中也發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果。在本次實驗中,家系親本來源有本課題組保種的“南海1號”以及引進的非洲品系和泰國品系,對存活率多因素方差分析也表明,飼料魚粉水平與斑節(jié)對蝦家系不存在顯著性交互作用,說明斑節(jié)對蝦的存活率屬于遺傳效應,跟家系本身的遺傳物質(zhì)相關,但是家系親本地域來源跟子代死亡率的關系有待進一步研究。

    根據(jù)本實驗結(jié)果,在低魚粉水平飼料投喂的情況下,1號、3號、4號、5號、9號家系的成活率為(58.89±4.84)%、(55.56±10.94)%、(60.00±3.85)%、(73.34±8.82)%、(64.44±5.88)%,它們的存活率高于所有家系的平均成活率(49.01%),與30%魚粉水平飼料組相比不存在顯著性差異(P>0.05),其中5號和9號家系存活率顯著高于其余各家系,因此可以考慮將5號、9號家系作為低魚粉水平飼料(飼料魚粉水平為20%)條件下存活率高的親本留種;在特定生長率方面,2號和7號家系顯著高于其他家系,可作為低魚粉水平飼料條件下生長快速的親本留種;在飼料系數(shù)和干物質(zhì)表觀消化率方面,家系之間差異較小,可暫時不予考慮。綜上,可將2號、5號、7號、9號進行保種。對這些家系進行分子標記,將體內(nèi)某些適應低魚粉水平飼料的基因保留下來,并通過定向交配設計及人工授精技術(shù),將具有優(yōu)良性狀的基因遺傳給子代并積累下來,然后通過雜交、自交等育種手段把優(yōu)良性狀聚合,培育出可以穩(wěn)定遺傳、經(jīng)濟性狀優(yōu)良的品系。

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