高效液相色譜法測定甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥含量

楊錦蓉，齊建敏，張麗榮，任麗穎，賈成國

(河北威遠生物化工有限公司，石家莊 050011)

甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽為我公司近兩年來的創(chuàng)制產品，它是以阿維菌素B2a為原料合成得到的阿維菌素類似物。通過室內生測與田間藥效試驗發(fā)現(xiàn)其對小菜蛾、葉螨(紅蜘蛛)、黏蟲、水稻二化螟等害蟲具有非常好的防治效果，且其活性顯著高于阿維菌素B2a，具有較大的農藥開發(fā)價值[1-4]。

隨著甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽在農業(yè)生產中應用越來越多，對其進行檢測以測定該農藥原藥含量和控制其產品質量顯得尤為必要。然而，目前有關甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的檢測方法未見報道，只能查到其有關類似物甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽檢測方法[5-8]。基于此，本文開展了采用高效液相色譜法測定甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥有效成分含量的研究，以期為該農藥產品生產與應用的質量控制和分析方法提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 型高效液相色譜儀配自動進樣器、DAD檢測器和色譜工作站(美國安捷倫公司)；BSA124S-CW電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司]；KQ-250B超聲波儀(昆山市超聲儀器有限公司)；甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽標準品[質量分數≥98.0%，國家農藥質量監(jiān)督檢驗中心(沈陽)]，甲醇(色譜純，西隴科學股份有限公司)，乙腈(色譜純，西隴科學股份有限公司)，氨水(分析純，天津市風船化學試劑科技有限公司)，純凈水(杭州娃哈哈公司)。

1.2 溶液制備

標樣溶液的制備：稱取甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽標樣約0.05 g (精確至0.000 2 g)于100 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用。

試樣溶液的制備：稱取甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽樣品0.05 g (精確至0.000 2 g)于100 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋至刻度、搖勻，0.45 μm濾膜過濾后進行分析測定。

1.3 色譜測定條件

DAD檢測器；C18色譜柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液=43+43+14(體積比)；流速為1.0 mL/min；檢測波長為245 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為5 μL。在該色譜條件下，甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的保留時間為11.2 min。

1.4 測定

在上述色譜操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數針標樣溶液，直到相鄰2針甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽標樣的峰面積相對變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.5 結果的計算

樣品中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的質量分數含量x(%)按下式計算：

式中：A1為標樣溶液中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽峰面積的平均值；A2為試樣溶液中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽峰面積的平均值；m1為標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；P為標樣中甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽質量分數，%。

2 結果與分析

2.1 流動相的選擇

選用不同比例的甲醇+0.33%氨水溶液、乙腈+0.33%氨水溶液、甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液為流動相，對甲氨基阿維菌素B2a進行液相色譜測定。當用甲醇+0.33%氨水溶液時，主峰峰型較差；選用乙腈+0.33%氨水溶液(75+25，體積比)時，原藥中有一雜質峰與主峰無法完全分離，使得測定結果誤差較大；選用甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液時，通過調節(jié)3者的比例，發(fā)現(xiàn)當甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液(體積比為43∶43∶14)時，雜質能與主峰基本分離，峰形較好且出峰時間11.2 min。

2.2 波長的選擇

取質量濃度為0.5 mg/mL的甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽標準樣品，在190～400 nm的波長范圍內掃描(圖1)，發(fā)現(xiàn)在244 nm附近處有最大吸收，故確定244 nm為檢測波長。

圖1 甲氨基阿維菌素B2a光譜圖

2.3 專屬性試驗

分別取甲醇作為空白溶液及甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥樣品溶液在上述液相色譜條件下進行測定，得到的圖譜如圖2、3所示，且原藥主峰峰純度為99.992%，證明雜質峰不干擾有效成分含量的測定，本方法專屬性好。

圖2 空白樣品譜圖

圖3 甲氨基阿維菌素B2a原藥樣品譜圖

2.4 線性關系

準確配制甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽不同質量濃度的標準溶液(0.11、0.23、0.45、0.68、0.9、1.1 mg/mL)按上述色譜條件進行測定。以樣品濃度為橫坐標，以相應的峰面積為縱坐標作圖(圖4)。由圖4可見，在質量濃度為0.048 2～1.446 4 mg/mL時，甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的質量濃度與峰面積之間表現(xiàn)出良好的線性關系，其線性回歸方程為y=8 400.852 34x-173.019 25，相關系數r為0.999 5(n=6)。

圖4 方法的線性關系圖

2.5 方法的精密度

分別稱取同一個樣品約0.05 g (精確至0.000 2 g)于5個100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度、搖勻，進行液相色譜測定，結果見表1?？梢姡瑯悠分屑装被⒕S菌素B2a苯甲酸鹽的質量分數含量為90.34%，RSD為0.19%。

表1 方法精密度測定結果

2.6 方法的準確度

在已知樣品中，加入不同體積的標樣溶液，使達到正常測定濃度的80%、100%、120%，按照含量測定，計算加標回收率，結果見表2?？梢?，甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽的回收率為99.0%～99.6%，平均回收率為99.3%。

表2 方法的準確度測定結果

3 結 論

本文建立了一種高效液相色譜法測定甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥含量的分析方法。該方法具有專屬性好、精密度和準確度高等特點，符合產品定量測定要求，適合于甲氨基阿維菌素B2a苯甲酸鹽原藥的含量檢測。