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    GMA致裸鼠細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化病理形態(tài)學(xué)分析

    2021-07-29 03:28:32苑鳳婷
    中獸醫(yī)學(xué)雜志 2021年5期
    關(guān)鍵詞:雌雄腫塊惡性

    苑鳳婷,孫 斌

    (黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院,黑龍江大慶 163319)

    GMA 全名叫做甲基丙烯酸縮水甘油酯,又稱甲基丙烯酸-2,3-環(huán)氧丙基酯,無色,呈透明狀,難融于水,易融于許多應(yīng)用范圍廣的有機溶劑中。優(yōu)良的性能使GMA 大量應(yīng)用于我們的衣食住行、生活起居中。這些化學(xué)物質(zhì)的使用不僅大大提高了材料的美觀程度,而且增加利用度和使用壽命。但是,相關(guān)問題也隨即產(chǎn)生,人類的健康水平在時代的發(fā)展上亮起了紅燈。各種惡性疾病的發(fā)生發(fā)展引起了人們的高度關(guān)注,科學(xué)研究證實,人類惡性疾病發(fā)生率增多與化學(xué)物質(zhì)的使用率加大有極大的關(guān)系。

    然而究竟是什么化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致機體的高病變性?能否進(jìn)行人為控制,進(jìn)行定向?qū)嶒? 有害物質(zhì)主要侵害機體的那些器官?機體對其的代謝能力是否能提高?將是此研究主要關(guān)注的問題。

    對此我們設(shè)計了此次實驗,GMA 致裸鼠細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化病理學(xué)診斷。具體實驗設(shè)計為化學(xué)物質(zhì)GMA對動物機體的影響[1]。

    本次實驗涉及到實驗標(biāo)本的制作與染色觀察,雌雄二組的實驗標(biāo)本要分別標(biāo)記觀察。得出實驗結(jié)果后要總結(jié)實驗過程,與對照組進(jìn)行比對,確保實驗準(zhǔn)確。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料

    1.1.1 實驗動物

    把裸鼠分為實驗組與對照組,實驗組分為雌雄2 組,共3 組,每組6 只,共18 只。選取SPF 級別21 ~30 d 的裸鼠,重15 ~19 g。

    1.1.2 試驗藥物及試劑

    GMA、中性福爾馬林固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟、蘇木精染液、伊紅酒精染液、鹽酸酒精染液、甘油蛋白粘片劑、中性樹膠、卡諾固定液。

    1.1.3 儀器耗材

    蠟杯、酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單片刀片、包埋盒、染色缸 、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、溫度計、水浴鍋。儀器設(shè)備見表1。

    表1 儀器設(shè)備

    1.2 實驗方法

    1.2.1 實驗動物的接種

    試驗材料埋在后背和腋部皮下。

    1.2.2 實驗動物變化

    接種后的實驗動物在SPF 環(huán)境下繼續(xù)飼養(yǎng),2 ~3 周后腫塊就可以形成[2]。眼觀形態(tài)為菜花樣,邊緣高突,切面呈灰白色,粗顆粒狀,表面有壞死[3]。

    1.2.3 實驗動物的剖檢

    固定:由于裸鼠的個體較小,采取簡單固定。

    器材:小剪刀,鑷子,手術(shù)刀

    用頸椎脫臼法處死小鼠后放在小磁盤中,采取被側(cè)臥位。以恥骨前緣到劍狀軟骨做縱向切線,再以劍狀軟骨到腰兩側(cè)區(qū)剪開皮膚以及富強.側(cè)向翻轉(zhuǎn)小鼠后,整個腹腔就都打開了。以劍狀軟骨至下頜剪開皮膚后,把皮向左右剝開,然后暴露胸腔,從胸腔兩側(cè)背部剪掉肋骨以及肌肉,整個胸腔器官暴漏出來。依此取出檢測所需標(biāo)本腦、心、肝、脾、肺、腎及腫塊組織。切取的組織塊要方便固定。

    1.3 檢測方法

    1.3.1 送檢材料

    福爾馬林液固定組織標(biāo)本。

    制備:組織塊長寬均為1.5 cm,厚為0.4 cm,用10%福爾馬林固定4 h。

    1.3.2 制作切片

    常規(guī)病理組織學(xué)制片,石蠟包埋,切片厚5 μm,H.E.染色,光鏡觀察。

    1.3.3 圖像采集

    光學(xué)顯微鏡觀測,用TD2000 真彩色病理圖像分析系統(tǒng)采集圖像。

    1.4 檢測要求

    對動物腫塊的組織來源及惡性程度進(jìn)行檢查;

    對動物各臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查;

    提供詳細(xì)的病理看片記錄。

    2 結(jié)果

    圖1 3組裸鼠腦部組織切片(H-E 染色×100,A為雌性,B為雄性,C為對照組)

    雌雄2 組無組間差異,腦部結(jié)構(gòu)清晰、完整,無明顯病變。大腦皮質(zhì)各層細(xì)胞排列整齊,分層較明顯;小腦白質(zhì)和灰質(zhì)分界清晰,普肯野細(xì)胞層結(jié)構(gòu)正常;無瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

    2.1.2 腎

    雌雄2 組無組間差異;腎小球結(jié)構(gòu)完整,腎小管管腔無擴張;腎間質(zhì)有出血現(xiàn)象,有少量炎性細(xì)胞浸潤。

    2.1.3 肝

    雌雄2 組無組間差異;肝臟結(jié)構(gòu)完整,肝細(xì)胞以中央靜脈為中心,向四周呈放射狀排列;肝細(xì)胞大小一致呈多邊型,核較大呈圓形或橢圓形,胞漿均勻染色。竇狀隙有少量淤血[4]。

    2.1.4 脾臟

    雌雄2 組無組間差異;脾臟結(jié)構(gòu)完整,其間有巨細(xì)胞(細(xì)胞體積大、胞漿豐富,核多 ,排列呈馬蹄形)和巨噬細(xì)胞浸潤,與瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移無關(guān),可能與貧血、炎癥有關(guān)。

    2.1.5 肺

    雌雄2 組無組間差異;肺泡壁結(jié)構(gòu)基本完整,肺泡內(nèi)無異物滲出;除了有局部有淤血、水腫外,無其它病變。

    2.2 腫塊組織的病理學(xué)檢測

    邊緣組織出血、水腫,有炎癥細(xì)胞浸潤,瘤細(xì)胞與上皮組織交織、分界不清;腫塊惡性程度比較嚴(yán)重。

    3 討論

    制作完切片進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)雌雄2 組無組間差異,與對照組也無明顯差異。通過鏡下觀察,裸鼠各臟器組織除脾臟外,形態(tài)結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞排列整齊,沒有出現(xiàn)明顯的炎性細(xì)胞浸潤等異?,F(xiàn)象,沒有瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[5]。說明瘤細(xì)胞沒有侵害到相關(guān)臟器。

    鏡下觀察脾臟結(jié)構(gòu)完整,出現(xiàn)大量的巨噬細(xì)胞的浸潤,病變明顯。實驗結(jié)果分析,這可能與其它臟器組織和腫塊組織出血、貧血有關(guān),而與瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移無關(guān)[6]。

    腫塊組織低倍鏡下,與對照組差異明顯。細(xì)胞呈片狀、局灶性增生,局部有出血。高倍鏡下,細(xì)胞大小、深淺不一呈卵圓形、圓錐形或梭性,胞漿豐富、染色質(zhì)顆粒較粗、核仁明顯,可見明顯的核分裂相,退變的細(xì)胞呈水泡樣變性。間質(zhì)為紅染膠原纖維束、粗大均質(zhì)。雌雄2 組無組間差異,按照惡性程度評分標(biāo)準(zhǔn),雌性為3.5 分,雄性為4 分。腫塊惡性程度比較嚴(yán)重。腫塊組織的瘤細(xì)胞分化不一致、呈片狀局灶性增生,核仁明顯、可見明顯的核分裂相。綜合分析,腫塊組織屬惡性上皮瘤。

    4 結(jié)論

    GMA 能夠?qū)е聶C體產(chǎn)生病變,且病變明顯,實驗成立。

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