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    抗-HIV ELISA檢測窗口期獻血者的1例追蹤隨訪分析

    2021-07-29 07:41:08溫麗玲梁佩賢余玉婷卓創(chuàng)近招淑文
    檢驗醫(yī)學(xué)與臨床 2021年14期
    關(guān)鍵詞:窗口期印跡獻血者

    溫麗玲,梁佩賢,余玉婷,卓創(chuàng)近,招淑文

    廣東省佛山市中心血站,廣東佛山 528000

    獲得性免疫缺陷綜合征是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染所導(dǎo)致的以免疫系統(tǒng)功能缺陷為特征的致命性疾病。輸血是HIV傳播的重要途徑之一,采供血機構(gòu)開展HIV抗原抗體等檢測后,輸血安全性有了較大的提高,但由于酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測窗口期漏檢、病毒變異、試劑的靈敏度低、免疫靜默感染和人工失誤等原因[1],仍然存在輸血傳播HIV的殘余風(fēng)險。本血站在進行常規(guī)血液篩查時發(fā)現(xiàn),某獻血者的ELISA檢測各項指標(biāo)均為陰性,6人份混樣核酸檢測(NAT)結(jié)果為HIV-RNA反應(yīng)性,在征得獻血者的知情同意后,先后進行了4次追蹤檢測,免疫印跡法由早期的陰性、不確定到后期確認(rèn)為HIV-1抗體陽性,最終確證該獻血者為1例低濃度HIV窗口期獻血者,現(xiàn)將該獻血者的追蹤檢測情況報道如下。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 無償獻血者,男,50歲,工人,離異。2018年4月22日在本站捐獻機采血小板2個治療量。采用真空管留取獻血者靜脈血3管,分別用于核酸檢測、ELISA檢測和單采血小板捐獻前的血型、血常規(guī)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測,用于核酸檢測的標(biāo)本管4 h內(nèi)離心,保存于2~8 ℃冰箱。

    1.2儀器與試劑 ELISA檢測采用全自動酶免加樣儀(Microlab STAR 8CH,瑞士Hamilton公司);全自動酶免后處理器(FAME 24/20,瑞士Hammer公司);核酸定性檢測采用Cobas′s 201核酸血液篩查系統(tǒng)(瑞士羅氏公司);核酸定量檢測采用CAP/CTM 96全自動病毒載量檢測系統(tǒng)(瑞士羅氏公司);免疫印跡法使用Tecan PROFIBLOTT48 非溫控全自動蛋白印跡儀;抗-HIV ELISA檢測試劑盒(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司);HIV-Ag/Ab ELISA檢測試劑盒(美國伯樂公司);MPX v2.0-HIV(1+2型)PCR熒光法核酸檢測試劑盒(瑞士羅氏公司);核酸定量檢測試劑Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 test,version 2.0(瑞士羅氏公司);HIV抗體確認(rèn)采用HIV 1+2型抗體檢測試劑盒(免疫印跡法,新加坡安倍生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司)。

    1.3方法

    1.3.1檢測策略 血液標(biāo)本進行一遍國產(chǎn)試劑、一遍進口試劑的ELISA檢測,對于檢測結(jié)果為雙試劑陰性和單試劑反應(yīng)性的標(biāo)本,進行瑞士羅氏MPX v2.0 HIV(1+2型)PCR熒光法核酸檢測,按照羅氏核酸檢測系統(tǒng)要求,為6人份混檢模式。對有反應(yīng)性的6混樣標(biāo)本進行拆分,拆分后判斷標(biāo)本有無反應(yīng)性;對于檢測雙試劑反應(yīng)性的標(biāo)本送佛山市疾病預(yù)防控制中心進行確認(rèn)試驗。

    1.3.2獻血者HIV陽性確認(rèn) 對ELISA雙試劑反應(yīng)性、ELISA雙試劑無反應(yīng)性或者ELISA單試劑反應(yīng)性而核酸定性有反應(yīng)性的標(biāo)本送佛山市疾病預(yù)防控制中心進行HIV抗體確認(rèn)試驗。

    1.3.3獻血者追蹤檢測 在征得獻血者知情同意后,于初次獻血后每間隔一周隨訪追蹤和采集標(biāo)本,并對每次采集的標(biāo)本進行HIV抗原/抗體ELISA檢測和核酸的定性、定量檢測及HIV確證試驗。

    1.3.4T淋巴細(xì)胞計數(shù)檢測 在HIV抗體確認(rèn)檢測不確定時,對隨訪標(biāo)本進行T淋巴細(xì)胞計數(shù)檢測。

    2 結(jié) 果

    獻血者追蹤檢測 對獻血者采取間隔一周隨訪,追蹤隨訪結(jié)果。獻血者從獻血初次檢測ELISA雙試劑陰性、NAT陽性、病毒載量為48 copy/mL,1周后隨訪,進口4代試劑HIV-Ag/Ab轉(zhuǎn)為陽性、病毒載量迅速上升至1.15×106copy/mL;2周后隨訪,國產(chǎn)4代試劑HIV Ag/Ab轉(zhuǎn)為陽性、病毒載量上升至>1.00×107copy/mL;3周后隨訪,病毒載量開始下降,免疫印跡法確證試驗出現(xiàn)了不確定條帶;4周后隨訪,免疫印跡法確證試驗判為陽性。見表1。

    表1 獻血者追蹤檢測結(jié)果

    3 討 論

    本病例是本站自開展獻血者血液NAT工作以來,首次出現(xiàn)NAT陽性、HIV-Ag/Ab陰性的HIV感染窗口期獻血者,并連續(xù)對該獻血者進行的一次追蹤隨訪,最終免疫印跡法確證試驗為陽性。對獻血者進行了連續(xù)跟蹤隨訪,確認(rèn)其為HIV窗口期感染者,此過程符合HIV感染者體內(nèi)病毒和抗體的變化規(guī)律;其感染標(biāo)志物的檢出次序,NAT>進口4代ELISA>國產(chǎn)4代ELISA>免疫印跡法,也與研究報道一致[2]。有研究顯示,HIV抗體和抗原檢出時間最短為第19天,使用NAT能縮短至第3天[3]。NAT可將病毒抗體或抗原陰性的慢性攜帶者及病毒株發(fā)生變異的感染者檢測出來,除了大幅度縮短血液篩查的窗口期外,也彌補了血清學(xué)方法的不足,有效降低了經(jīng)輸血傳播HIV的殘余風(fēng)險,提升了輸血的安全性[4-7]。

    血站在檢測HIV抗原抗體的基礎(chǔ)上全面開展HIV-RNA檢測,4代ELISA試劑可以同時檢測HIV的抗原和抗體[8],采供血機構(gòu)HIV感染標(biāo)志物的檢測應(yīng)采用NAT和4代ELISA試劑同步檢測的模式,一方面可縮短ELISA檢測“窗口期”對血液安全的影響,另一方面還可避免因病毒滴度降低、病毒感染株核酸序列變異及標(biāo)本采集、保存、運輸不當(dāng)?shù)仍斐傻腘AT假陰性結(jié)果。表1顯示,在檢測本例標(biāo)本時,進口4代HIV-Ag/Ab試劑的靈敏度更優(yōu)于國產(chǎn)試劑,有報道認(rèn)為HIV-Ag/Ab 4代試劑中國產(chǎn)試劑與進口試劑比較,在批間精密度和最低檢出量上尚存在差距[9]。因此,采供血機構(gòu)在選用4代ELISA試劑時,要盡可能使用一次進口試劑,一次國產(chǎn)試劑,即選用“NAT+4代ELISA進口試劑+4代ELISA國產(chǎn)試劑”檢測模式可有效降低輸血傳播HIV殘余風(fēng)險。

    表1顯示,獻血后21 d追蹤隨訪,CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少,CD4+T淋巴細(xì)胞是HIV損害的主要靶細(xì)胞,HIV可引起CD4+T淋巴細(xì)胞進行性丟失與功能受限;CD8+T淋巴細(xì)胞出現(xiàn)反應(yīng)性升高,并發(fā)揮著重要的抑制病毒復(fù)制的作用[10];CD4+/CD8+比值下降,當(dāng)比值<0.20時,HIV感染者機會性感染率會明顯增加[11],提示該獻血者應(yīng)該要盡快接受正規(guī)治療,進而防止疾病的2代傳播。

    目前NAT技術(shù)已經(jīng)大大縮短了HIV檢測的窗口期,但仍然沒有完全消除窗口期的檢測方法。因此,血站在獻血前宣傳時,應(yīng)鼓勵有高危行為的獻血者延遲獻血,實施獻血后主動自我排除,即保密性棄血[12],同時,也只有確保核酸檢測標(biāo)本的質(zhì)量才能最大限度保證低濃度標(biāo)本的檢出。

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