HBV-DNA單獨反應(yīng)性獻血者標本檢測結(jié)果分析

李新建，武麗娟

（安陽市中心血站 1.質(zhì)管辦；2.檢驗科，河南 安陽 455000）

血液不能人工制造，且不能使用其他物品代替，因此外科手術(shù)、重大創(chuàng)傷、大出血等患者的治療過程中需廣大健康、適齡的人群獻血，以確保治療的正常進行[1]。乙型肝炎病毒（HBV）、丙肝病毒（HCV）、艾滋病毒（HIV）是血液傳播疾病的中主要病毒，若無償獻血者存在HBV、HCV、HIV感染，則會對輸血的安全性產(chǎn)生巨大威脅，既往研究中有學(xué)者指出我國HBV的感染率為10.3%，HCV感染率為1～3.1%，全球HIV感染人群中5～10%因血液感染，因此為保障輸血安全有必要對獻血者的HBV、HCV、HIV進行篩查，降低病毒經(jīng)血液傳播的風險[2-4]。目前酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）2種試劑盒檢查是篩查HBV、HCV、HIV的常用方式，但對于窗口期、隱匿期狀態(tài)下獻血者的血清標本卻無法有效鑒別[5]。核苷酸檢測（NAT）是一種具有高靈敏度及特異性的HBV、HCV、HIV篩查方式，對縮短窗口期，提高隱匿期病毒檢出率具有重要意義[6]?？紤]到我國血站NAT多為HBV-DNA單獨反應(yīng)性，而HBV-DNA單獨反應(yīng)性又與HBV、HCV、HIV關(guān)系密切，本次研究對本站無償獻血者的HBV-DNA單獨反應(yīng)性進行檢測，旨在提高臨床輸血的安全性，報告如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 選取本站2017年1月-2019年12月309191人份無償獻血者的血液標本，所有獻血者獻血時采集血液標本5ml，分為3支試管，1支試管為EDTA-K2抗凝真空采血管，對血液標本行血清學(xué)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）檢測，另外2支試管為EDTA-K2抗凝帶分離膠真空采血管，對血液標本行核苷酸檢測。所有血液標本采集后3h內(nèi)離心，于2～8℃環(huán)境下保存送檢，所有血液標本于48h內(nèi)完成檢測。

1.2 試劑盒及檢測儀器來源 血清檢測中乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）、梅毒螺旋體抗體（抗TP）試劑盒均由上海科華和北京萬泰提供，艾滋病毒抗體（抗-HIV）、ALT試劑盒分別由北京萬泰和法國伯樂、貝克曼庫爾特實驗系統(tǒng)有限公司提供，核苷酸HBV、HCV、HIV檢測試劑盒均由羅氏診斷公司提供。檢測儀器分別為日本久保田提供的KUBOTA 8420型離心機、瑞士帝肯提供的TECAN型全自動樣本處理系統(tǒng)、德國西門子提供的BEPⅢ型全自動酶免分析系統(tǒng)、日本奧林巴斯提供的AU-400型全自動生化分析儀、瑞士羅氏提供的Roche cobas s 201型核酸檢測系統(tǒng)、濟南鑫貝西提供的BSC-1500ⅡA2-X型生物安全柜。

1.3 血清學(xué)檢測 血清檢測過程中分別使用2種不同生產(chǎn)廠家提供的試劑盒進行檢測，檢測方法為ELISA，ALT檢測使用儀器為全自動生化分析儀。檢測結(jié)束后2種試劑盒均無反應(yīng)性視為合格，若某一家試劑盒檢測有反應(yīng)性則對該試劑盒行雙孔復(fù)試，結(jié)果顯示雙孔均無反應(yīng)性視為合格；ALT檢測ALT≤40U/L視為合格。

1.4 NAT檢 測HBV、HCB、HIV核 苷 酸 檢 測 為ELISA、ALT檢測合格標本，檢測時使用羅氏cobas’s 201核苷酸檢測系統(tǒng)行6份標本混樣檢測及拆分檢測，首先使用羅氏cobas MPX test 1、2代試劑盒進行檢測，若1代試劑盒無法識別反應(yīng)性病毒種類則送至國家衛(wèi)生計生委臨床檢驗中心進行鑒定，其中2代試劑盒可明確鑒定HBV、HCB、HIV病毒。檢測結(jié)果判定時6份檢測標本無反應(yīng)性視為合格，若有反應(yīng)性則行拆分檢測。

1.5 觀察指標

1.5.1 分析2017年-2019年無償獻血者NAT檢測結(jié)果。

1.5.2 分析混樣有反應(yīng)性及拆分有反應(yīng)性標本CT值分布。

1.5.3 分析175例HBV-DNA單獨反應(yīng)性獻血者基礎(chǔ)資料信息。

1.5.4 將175例HBV-DNA單獨反應(yīng)性獻血者有差異信息納入Logistic模型，行量化賦值，以是否存在HBV-DNA單獨反應(yīng)性為因變量（Y，是=1），以性別、獻血次數(shù)、職業(yè)為自變量（X），明確發(fā)生HBV-DNA單獨反應(yīng)性的危險因素。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 選用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以（）表示，組間比較行t檢驗；計數(shù)資料以（%）表示，組間比較行χ2檢驗；多因素分析采取非條件Logistic逐步回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2017年-2019年無償獻血者NAT檢測結(jié)果分析2017年-2019年無償獻血者血液標本混樣有反應(yīng)性檢出率、拆分有反應(yīng)性檢出率呈現(xiàn)出緩慢的增長趨勢，309016人份血液標本中混樣有反應(yīng)檢性出率0.07%、拆分有反應(yīng)性檢出率0.06%，其中拆分有反應(yīng)性檢出均為HBV-DNA，未見HCVRNA及HIV-RNA。見表1。

2.2 混樣有反應(yīng)性及拆分有反應(yīng)性標本CT值分布分析2017年-2019年無償獻血者血液標本混樣有反應(yīng)性、拆分有反應(yīng)性CT值多集中于＜35、35≤CT＜37、37≤CT＜39,占比分別為9.71%、37.38%、39.32%及17.15%、21.14%、48.57%。見表2。

表2 混樣有反應(yīng)性及拆分有反應(yīng)性標本CT值分布分析[n，（%）]

2.3 175例HBV-DNA單獨反應(yīng)性獻血者基礎(chǔ)資料信息分析175例HBV-DNA單獨反應(yīng)性獻血者男性明顯多于女性、首次獻血者明顯多于獻血次數(shù)≥2次者、農(nóng)民明顯多于工人、公務(wù)員及其它，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 175例HBV-DNA單獨反應(yīng)性獻血者基礎(chǔ)資料信息分析[n，（%）]

2.4 發(fā)生HBV-DNA單獨反應(yīng)性的多因素Logistic回歸分析 將上述有差異信息納入Logistic模型，行量化賦值，見表4，證實男性、首次獻血、農(nóng)民為發(fā)生HBV-DNA單獨反應(yīng)性的危險因素，均有P＜0.05。見表5。

表4 量化賦值表

表5 發(fā)生HBV-DNA單獨反應(yīng)性的多因素Logistic回歸分析

3 討論

臨床輸血導(dǎo)致的病毒感染多為病毒感染的窗口期與乙肝隱匿性感染引起，NAT篩查能夠有效降低輸血感染風險,在既往研究中已有相關(guān)學(xué)者證實[7,8]。同時國家衛(wèi)計委與財政部也聯(lián)合頒布了《關(guān)于做好血站核酸檢測工作的通知》，為推進本站的NAT檢測工作，響應(yīng)NAT檢測覆蓋全國的文件精神,本站收集2017年1月-2019年12月309191人份無償獻血者的血液標本,對ELISA、ALT檢測合格的血液標本行NAT檢測,并對HBV-DNA單獨反應(yīng)性的檢測結(jié)果進行分析，為降低HBV、HCV、HIV感染風險，提高臨床輸血安全性提供幫助。

本次研究結(jié)果顯示，2017年-2019年無償獻血者血液標本混樣有反應(yīng)性檢出率、拆分有反應(yīng)性檢出率呈現(xiàn)出緩慢的增長趨勢，309016人份血液標本中混樣有反應(yīng)檢性出率0.07%、拆分有反應(yīng)性檢出率0.06%，其中拆分有反應(yīng)性檢出均為HBV-DNA,未見HCV-RNA及HIV-RNA,提示ELISA及ALT檢測合格后仍存在HBV漏檢的現(xiàn)象,而NAT檢測則能降低輸血的導(dǎo)致的病毒感染風險[9]。至于本次研究中未檢出HCV-RNA及HIV-RNA，分析原因可能與本次研究納入樣本量較少有關(guān)，因此后期仍需收集血液標本數(shù)據(jù)并加以分析,同時也有可能是運輸過程中受到外界因素的影響HCV、HIV出現(xiàn)降解，影響了NAT檢查結(jié)果[10]。另外在混樣有反應(yīng)性、拆分有反應(yīng)性血液標本的CT值觀察中發(fā)現(xiàn)，22017年-2019年無償獻血者血液標本混樣有反應(yīng)性、拆分有反應(yīng)性CT值多集中于＜35、35≤CT＜37、37≤CT＜39,占比分別為9.71%、37.38%、39.32%及17.15%、21.14%、48.57%，表明混樣有反應(yīng)性、拆分有反應(yīng)性血清標本的CT值分布存在一定差異，因此后續(xù)的血清標本NAT檢測中或可結(jié)合CT值分布增強檢測的靈敏度及特異度。

175例HBV-DNA單獨反應(yīng)性獻血者男性明顯多于女性、首次獻血者明顯多于獻血次數(shù)≥2次者、農(nóng)民明顯多于工人、公務(wù)員及其它，提示上述因素可能是發(fā)生HBV-DNA單獨反應(yīng)性的危險因素。筆者分析具體原因如下：⑴男性的社交活動與生活習(xí)慣與女性存在較大的差異，導(dǎo)致男性會有更多的病毒源接觸途徑與機會，增加病毒感染的風險，同時農(nóng)民所處的工作環(huán)境較差，再加上日常衛(wèi)生習(xí)慣的影響，更容易出現(xiàn)病毒感染。⑵獻血過程中獻血者會接受一定程度的病感染預(yù)防知識宣教，有利于多次獻血者熟悉獻血相關(guān)知識及疾病的預(yù)防知識，從而降低≥2次獻血者病毒感染的概率[11]。

為驗證發(fā)生HBV-DNA單獨反應(yīng)性的危險因素，筆者借助Logistic模型進行分析，證實男性、首次獻血、農(nóng)民為發(fā)生HBV-DNA單獨反應(yīng)性的危險因素，因此在無償獻血者的HBV、篩查中可對上述因素給予關(guān)注，以提高篩查的準確率，降低臨床輸血的感染風險。與夏傳友[12]等研究結(jié)果存在一定的相似之處。

綜上，NAT檢測是篩查HBV、HCV、HIV的有效方式，而混樣有反應(yīng)性、拆分有反應(yīng)性CT值分布存在一定的差異，或可為NAT篩查提供幫助，同時HBV感染受到性別、獻血次數(shù)、職業(yè)的影響，在NAT篩查中應(yīng)當予以關(guān)注。