水楊酸對(duì)NaHCO3脅迫下桂西北喀斯特地區(qū)青岡櫟種子萌發(fā)的影響

鄧 平，趙 英，王 霞，陳秋佑，吳 敏*

(1.玉林師范學(xué)院，桂東南珍稀經(jīng)濟(jì)物種保護(hù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，廣西 玉林 537000；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)林學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

水楊酸(salicylic acid，SA)是高等植物體內(nèi)普遍存在的一種內(nèi)源性激素，可作為植物抗逆反應(yīng)的信號(hào)分子，并激活其防御保護(hù)系統(tǒng)，在植物的抗逆過程中起關(guān)鍵作用[5-6]。研究表明，施用一定濃度的外源SA能誘導(dǎo)種子產(chǎn)生許多抗鹽性狀，緩解鹽脅迫對(duì)種子的傷害，提高種子對(duì)鹽脅迫的適應(yīng)性[7-8]。例如，Nimir等[9]研究發(fā)現(xiàn)在100和200 mmol/L NaCl脅迫下，用360.0 μmol/L SA浸泡高粱(Sorghumbicolor)種子，可以顯著提高種子萌發(fā)率、蛋白質(zhì)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性，降低丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量。Asadi等[10]對(duì)NaCl脅迫鷹嘴豆(Cicerarietinum)種子萌發(fā)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用1.5和3.0 mmol/L SA浸種均可以增加種子抗氧化酶活性，降低脯氨酸和MDA含量，提高其耐鹽性。Bagheri[11]和Yadav等[12]研究也發(fā)現(xiàn)在NaCl脅迫下，用低濃度的SA浸種玉米(Zeamays)通過提高其過氧化物酶(peroxidase，POD)和過氧化氫酶(catalase，CAT)活性及總蛋白質(zhì)含量，減輕鹽脅迫下細(xì)胞的膜脂過氧化程度，降低細(xì)胞膜滲透率。此外，國內(nèi)學(xué)者對(duì)花椰菜(Brassicaoleraceavar.botrytis)、菜豆(Phaseo-lusvulgaris)、甘草(Glycyrrhizauralensis)和羽衣甘藍(lán)(B.oleraceavar.acephala)等研究也發(fā)現(xiàn)，添加適當(dāng)濃度SA能夠相對(duì)提高鹽脅迫條件下種子萌發(fā)的數(shù)量、速度和質(zhì)量，提高滲透調(diào)節(jié)能力和抗氧化能力[13-16]。綜上所述，國內(nèi)外關(guān)于SA對(duì)鹽脅迫下種子萌發(fā)影響的報(bào)道主要集中在農(nóng)作物和園藝產(chǎn)品的研究，而針對(duì)SA作用于重碳酸鹽脅迫下生態(tài)樹種種子萌發(fā)的研究鮮見報(bào)道。

青岡櫟(Cyclobalanopsisglauca)為殼斗科青岡屬，是喀斯特亞熱帶常綠落葉闊葉混交林建群種之一，對(duì)巖溶環(huán)境具有較強(qiáng)的適應(yīng)性，是該地區(qū)植被恢復(fù)的優(yōu)良造林樹種[17]。前期野外調(diào)查發(fā)現(xiàn)，青岡櫟雖結(jié)實(shí)量大，但其生境土層淺薄、重碳酸鹽含量高，種子萌發(fā)率低，影響其植物體重建，限制種群自然更新。目前，針對(duì)青岡櫟的研究主要集中在種群生殖生態(tài)、人工林培育、種苗抗旱性等方面[18-22]，但從生理生態(tài)學(xué)角度系統(tǒng)研究SA對(duì)重碳酸鹽脅迫下青岡櫟種子萌發(fā)影響的研究鮮見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)通過配制不同濃度的NaHCO3溶液，研究喀斯特地區(qū)土壤中重碳酸鹽對(duì)青岡櫟種子萌發(fā)特性以及有機(jī)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量、抗氧化保護(hù)酶活性變化的影響；用低濃度SA溶液浸種，以期闡明SA對(duì)重碳酸鹽脅迫下青岡櫟種子萌發(fā)是否有促進(jìn)作用；揭示影響種子萌發(fā)的條件，為喀斯特地區(qū)青岡櫟的推廣造林、植被恢復(fù)與重建提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)地位于青岡櫟種群分布核心區(qū)桂林市雁山區(qū)大埠鄉(xiāng)甘棠村后山(110°18′～110°22′E，25°01′～25°03′N)，海拔150～210 m，陽坡或半陽坡，坡度9°～11°。其中，青岡櫟平均樹高(13.43±3.98)m，平均胸徑(21.54±4.73)cm。于2016年11月12—22日，選擇樹勢(shì)健壯、樹冠發(fā)育良好、無病蟲害的母樹，采集其成熟種子，放于牛皮袋標(biāo)記保存帶回實(shí)驗(yàn)室。在實(shí)驗(yàn)室清洗并篩選出下沉健康飽滿的種子，自然陰干，置于4 ℃冰箱儲(chǔ)存。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

于2016年12月12日起，取大小相近、飽滿的種子分別用游標(biāo)卡尺(精度0.01 cm)、電子天平(精度0.01 g)和TTC染色法，測(cè)定種子平均百粒質(zhì)量、單粒種子的縱徑和橫徑、新鮮種子活力，上述指標(biāo)均重復(fù)3次取平均值。最終選取供試種子百粒質(zhì)量(428.03±18.79)g、縱徑(2.19±0.28)cm和橫徑(1.98±0.32)cm、活力為90%以上。種子在水中浸泡48 h后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%高錳酸鉀溶液消毒30 min，再用蒸餾水沖洗3次，濾紙吸干表面?zhèn)溆谩?/p>

分別用0、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的SA對(duì)青岡櫟種子萌發(fā)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)(每個(gè)梯度100粒種子)，發(fā)現(xiàn)0.50 mmol/L SA浸種12 h的青岡櫟種子，其萌發(fā)周期短、速度快，萌發(fā)率最高(圖1)，因此，0.50 mmol/L 為促進(jìn)青岡櫟萌發(fā)的SA合理濃度。重碳酸鹽脅迫通過配制不同濃度NaHCO3溶液獲得，共設(shè)7個(gè)濃度梯度，分別為0、24、48、72、96、120、144 mmol/L；SA處理共設(shè)2個(gè)梯度，濃度分別為0和0.50 mmol/L；其中7個(gè)NaHCO3脅迫梯度處理開始前用清水(0 mmol/L SA)浸種12 h，另外7個(gè)NaHCO3脅迫梯度處理開始前用0.50 mmol/L SA浸種12 h，共計(jì)14個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20粒種子，故每個(gè)處理共計(jì)100粒種子。培養(yǎng)皿(20 cm × 20 cm)和培養(yǎng)基質(zhì)(珍珠巖)在105 ℃烘箱消毒2 h；青岡櫟種子播于3層醫(yī)用脫脂紗布下鋪有消毒珍珠巖(厚度2 cm)的培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿放種子20粒(預(yù)先用清水或0.50 mmol/L SA浸泡)；最后向培養(yǎng)皿中加入40 mL不同濃度的NaHCO3，每3 d更換1次培養(yǎng)基，置于恒溫25 ℃智能人工氣候箱內(nèi)(BIC-400型，上海博迅醫(yī)療生物儀器公司)，相對(duì)濕度60%，周期性光照處理：光12 h/暗12 h，光照強(qiáng)度200 μmol / (m2·s)，實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行28 d。

圖1 SA處理下青岡櫟栓皮櫟種子萌發(fā)動(dòng)態(tài)

1.3 指標(biāo)測(cè)定方法

1.3.1 發(fā)芽指標(biāo)測(cè)定

以種子露白為發(fā)芽標(biāo)志，從實(shí)驗(yàn)開始的第2天起，每天18:00記錄發(fā)芽種子數(shù)量，測(cè)量胚根長度。在實(shí)驗(yàn)?zāi)┢?，?dāng)連續(xù)3 d青岡櫟種子萌發(fā)數(shù)量不足供試種子總數(shù)的1%時(shí)，視為發(fā)芽實(shí)驗(yàn)結(jié)束[23]。按下列公式計(jì)算種子發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)[24-25]：

發(fā)芽率=種子發(fā)芽數(shù)/供試種子數(shù)×100%；

發(fā)芽指數(shù)=逐日發(fā)芽數(shù)/對(duì)應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)；

活力指數(shù)=發(fā)芽指數(shù)×幼苗鮮質(zhì)量;

耐鹽指數(shù)=處理組活力指數(shù)/對(duì)照組活力指數(shù)×100%；

相對(duì)鹽害率=(對(duì)照組發(fā)芽率-處理組發(fā)芽率)/對(duì)照組發(fā)芽率×100%。

1.3.2 生理指標(biāo)測(cè)定

待種子發(fā)芽實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)(第28天)，從各處理中選擇胚根長度>5 cm，且未萌發(fā)出胚芽的種子以液氮速凍，超低溫保存，統(tǒng)一進(jìn)行種子保護(hù)酶、有機(jī)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)和丙二醛(MDA)含量的測(cè)定。超氧化物歧化酶(SOD)活性測(cè)定用氮藍(lán)四唑(NBT)法，設(shè)A560下抑制NBT光化還原50%所需酶量為1個(gè)酶活力單位(記為U)；過氧化物酶(POD)活性測(cè)定用愈創(chuàng)木酚熱色法，以1 min內(nèi)A470變化0.01為1個(gè)過氧化物酶活性單位(U)；過氧化氫酶(CAT)活性測(cè)定用紫外線吸收法，以1 min內(nèi)A240減少0.1的酶量為1個(gè)酶活性單位(U)?？扇苄蕴呛?、可溶性蛋白和脯氨酸含量分別用蒽酮法、考馬斯亮藍(lán)G-250和磺基水楊酸-酸性茚三酮顯色法測(cè)定。丙二醛(MDA)含量用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定。以上生理指標(biāo)的測(cè)定均參考李合生[26]的方法，每個(gè)指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3次，取其平均值。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用SPSS 18.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)和最小顯著性差異法(LSD)檢驗(yàn)比較相同SA處理下，不同濃度NaHCO3處理間青岡櫟種子萌發(fā)的差異顯著性；用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較相同濃度NaHCO3處理下，不同濃度SA處理間種子萌發(fā)的差異顯著性。使用Origin 9.0軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子萌發(fā)參數(shù)的影響

經(jīng)測(cè)定發(fā)現(xiàn)(圖2A)，無SA處理時(shí)，隨NaHCO3脅迫濃度的增加，青岡櫟種子發(fā)芽率顯著下降(P< 0.05)；經(jīng)SA處理后，隨NaHCO3脅迫濃度的增加，發(fā)芽率呈先降后升再下降的趨勢(shì)，但當(dāng)NaHCO3濃度分別為0和72 mmol/L時(shí)，發(fā)芽率均高于對(duì)照組，且在NaHCO3濃度為72 mmol/L時(shí)，發(fā)芽率最高(80.00±6.13)%。在相同NaHCO3脅迫濃度處理下，SA處理后青岡櫟種子發(fā)芽率均高于無SA處理組，其中當(dāng)NaHCO3濃度為24、48、72和96 mmol/L時(shí)，分別比無SA處理組顯著增加了16.67%、25.21%、45.45%和14.29%(P< 0.05)。

從圖2B、2C可以看出，無SA處理時(shí)，在不同NaHCO3濃度脅迫下青岡櫟種子發(fā)芽指數(shù)與活力指數(shù)均顯著低于對(duì)照組(P< 0.05)；經(jīng)SA處理后，隨著NaHCO3濃度的增加，種子的發(fā)芽指數(shù)與活力指數(shù)均呈先降后升再下降的趨勢(shì)，當(dāng)NaHCO3為濃度72 mmol/L時(shí)，發(fā)芽指數(shù)與活力指數(shù)達(dá)到峰值分別為10.87±0.99和48.15±3.44，且當(dāng)NaHCO3濃度為0～72 mmol/L時(shí)二者的值均高于對(duì)照組。在NaHCO3濃度為24～144 mmol/L時(shí)，經(jīng)SA處理青岡櫟種子的發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)總是顯著高于無SA處理組(P< 0.05)。

不同小寫字母表示在相同濃度SA處理下，不同濃度NaHCO3處理間差異顯著(P < 0.05)；*和**表示在相同濃度NaHCO3處理下，不同SA濃度間差異顯著;*.P<0.05；**.P<0.01。下同。The different lowercase letters indicate significant differences in the same SA concentration among different salt treatments at 0.05 level. * and ** indicate significant differences in the same treatment under different SA concentrations at 0.05 and 0.01 level. The same below.

2.2 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子萌發(fā)耐鹽指數(shù)和相對(duì)鹽害率的影響

由SA對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子萌發(fā)耐鹽指標(biāo)(表1)來看，無SA處理時(shí)，各NaHCO3濃度下的青岡櫟種子耐鹽指數(shù)均顯著低于對(duì)照組(P< 0.05)；經(jīng)SA處理后，當(dāng)NaHCO3濃度為48和72 mmol/L時(shí)，耐鹽指數(shù)均高于對(duì)照組，分別比對(duì)照增加了16.74%和29.34%。在相同濃度NaHCO3脅迫處理下，經(jīng)SA處理后種子的耐鹽指數(shù)均顯著高于無SA處理組(P< 0.05)。

無SA處理時(shí)，隨NaHCO3脅迫濃度增加，青岡櫟種子的相對(duì)鹽害率迅速顯著增加(P< 0.05，見表1)。經(jīng)SA處理后，當(dāng)NaHCO3脅迫濃度為0～120 mmol/L處理組時(shí)，相對(duì)鹽害率均顯著低于無SA處理組(P< 0.05)，且在NaHCO3濃度為0和72 mmol/L時(shí)，種子未受到毒害，其中在72 mmol/L NaHCO3脅迫下，種子的相對(duì)鹽害率最低。但當(dāng)NaHCO3脅迫濃度為144 mmol/L時(shí)，即使種子經(jīng)0.50 mmol/L SA處理也未能顯著降低相對(duì)鹽害率(P> 0.05)。

表1 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫處理下青岡櫟種子耐鹽指數(shù)、相對(duì)鹽害率的影響(n=5)

2.3 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子丙二醛含量的影響

由SA對(duì)NaHCO3處理下青岡櫟種子丙二醛含量的影響(圖3)可以看出，無SA處理時(shí)，隨NaHCO3脅迫濃度增加，青岡櫟種子丙二醛(MDA)含量極顯著增加(P< 0.01)；經(jīng)SA處理后，隨NaHCO3濃度增加，其MDA含量呈波動(dòng)性變化，在NaHCO3脅迫濃度為0～72 mmol/L時(shí)，其含量均低于對(duì)照組，其中當(dāng)NaHCO3脅迫濃度為24 mmol/L，其MDA含量最低，比對(duì)照組減少了12.75%。在相同NaHCO3脅迫濃度下，經(jīng)SA處理的青岡櫟種子MDA含量均顯著低于無SA處理組(P< 0.05)。

圖3 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫處理下青岡櫟種子丙二醛含量的影響(n=3)

2.4 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子抗氧化酶活性的影響

由SA對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子抗氧化酶活性的影響(圖4A)可知，無SA處理時(shí)，隨NaHCO3脅迫濃度增加，青岡櫟種子的SOD活性呈波動(dòng)性變化，但均顯著低于對(duì)照組(P< 0.05)；經(jīng)SA處理后，隨NaHCO3脅迫濃度增加，其SOD活性先增加后減少，當(dāng)NaHCO3脅迫濃度為24～72 mmol/L時(shí)，其SOD活性均高于對(duì)照組，且在72 mmol/L NaHCO3時(shí)，SOD活性達(dá)到峰值(10 122±473)U/g。當(dāng)NaHCO3濃度為24～144 mmol/L時(shí)，經(jīng)SA處理的種子SOD活性均極顯著高于無SA處理組(P< 0.01)。

圖4 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫處理下青岡櫟種子抗氧化酶活性的影響(n=3)

由圖4B可知，在0和0.50 mmol/L的SA處理下，隨NaHCO3脅迫濃度的增加，青岡櫟種子的POD活性均是先增加后減少，但其活性均高于對(duì)照組；且經(jīng)SA處理后，NaHCO3濃度為72 mmol/L時(shí)，POD活性到達(dá)峰值(1 199±72)U/(g·min)。在相同濃度NaHCO3脅迫處理下，SA處理組種子POD活性均極顯著高于無SA處理組(P< 0.01)。

由圖4C可以看出，在0和0.50 mmol/L的SA處理下，隨NaHCO3脅迫濃度的增加，青岡櫟種子的CAT活性均是先增后減；僅在無SA處理，NaHCO3脅迫濃度為144 mmol/L時(shí)，其活性低于對(duì)照組；而經(jīng)SA處理后，NaHCO3濃度為96 mmol/L時(shí)，CAT活性達(dá)到峰值(460±26)U/(g·min)。在相同濃度NaHCO3脅迫處理下，SA處理組種子CAT活性也均顯著高于無SA處理組(P< 0.05)。

2.5 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響

由SA處理對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響(圖5A)可知，無SA處理時(shí)，隨NaHCO3脅迫濃度增加，青岡櫟種子可溶性糖含量整體呈增加趨勢(shì)，且當(dāng)NaHCO3濃度為96～144 mmol/L時(shí)，其可溶性糖含量顯著高于對(duì)照組(P< 0.05)；經(jīng)SA處理后，隨NaHCO3脅迫濃度增加，可溶性糖含量先增加后減少，且均高于對(duì)照組，當(dāng)NaHCO3濃度為72 mmol/L時(shí)，可溶性糖含量達(dá)到峰值(7.43±0.34)mg/g。在相同濃度NaHCO3脅迫處理下，經(jīng)SA處理后種子可溶性糖含量均顯著高于無SA處理組(P< 0.05)。

由圖5B和5C可知，無SA處理時(shí)，隨NaHCO3脅迫濃度增加，青岡櫟種子可溶性蛋白和脯氨酸含量均先增加后減少，且高于對(duì)照組；經(jīng)SA處理后，隨NaHCO3脅迫濃度增加，可溶性蛋白含量呈波動(dòng)性變化，而脯氨酸含量則先增后減，但二者含量均高于對(duì)照組，在NaHCO3脅迫濃度為72 mmol/L時(shí)，可溶性蛋白和脯氨酸含量均達(dá)到峰值，分別為(0.43±0.04)mg/g和(250±34)μg/g。在相同濃度NaHCO3處理下，經(jīng)SA處理后種子可溶性蛋白和脯氨酸含量均顯著高于無SA處理組(P< 0.05)。

圖5 SA處理對(duì)NaHCO3脅迫處理下青岡櫟種子滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響(n=3)

3 討 論

種子萌發(fā)是植物生命周期的第一階段，是決定喀斯特森林植被能否成功定居建植的關(guān)鍵因素；若此階段受到重碳酸鹽脅迫，種子萌發(fā)特性常表現(xiàn)為發(fā)芽率下降，萌發(fā)進(jìn)程延遲，甚至導(dǎo)致種子代謝紊亂，失去生活力而致死[27]。然而，外源水楊酸(SA)能夠調(diào)節(jié)植物體內(nèi)多種新陳代謝過程和生理反應(yīng)，在鹽脅迫等逆境下影響植物種子的萌發(fā)及生長[28]。本研究結(jié)果顯示，無SA處理時(shí)，NaHCO3脅迫抑制了青岡櫟種子的萌發(fā)；而經(jīng)SA處理后，對(duì)NaHCO3脅迫下青岡櫟種子萌發(fā)能力和生理指標(biāo)產(chǎn)生了不同程度的影響，一定程度上提高了青岡櫟種子對(duì)重碳酸鹽的耐受力，降低了重碳酸鹽對(duì)青岡櫟種子萌發(fā)的傷害。

3.1 無SA處理時(shí)，NaHCO3對(duì)青岡櫟種子萌發(fā)的影響

3.2 SA處理下，NaHCO3對(duì)青岡櫟種子萌發(fā)的影響

SA通過復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)參與調(diào)節(jié)與鹽脅迫相關(guān)的代謝反應(yīng)，能誘導(dǎo)種子產(chǎn)生許多耐鹽性狀，緩解鹽脅迫對(duì)種子的傷害[34-35]。本研究結(jié)果表明，經(jīng)SA處理后，在24～144 mmol/L NaHCO3脅迫處理下，青岡櫟種子的萌發(fā)參數(shù)(發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù))、耐鹽指數(shù)、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量(可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸含量)以及抗氧化酶活性(SOD、POD、CAT)均較無SA處理組有不同程度的提高；MDA含量和相對(duì)鹽害率則有不同程度的降低。這與Nimir等[9]的研究結(jié)論一致。說明SA處理可以緩解NaHCO3脅迫對(duì)種子萌發(fā)的抑制作用，提高種子耐鹽性，但在不同脅迫濃度NaHCO3處理下SA緩解效果不同，且不能有效根除高濃度NaHCO3脅迫對(duì)青岡櫟種子的傷害。

本研究還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)SA處理后，當(dāng)NaHCO3濃度超過72 mmol/L時(shí)，青岡櫟種子的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量(特別是可溶性糖和游離脯氨酸)以及保護(hù)酶活性均呈顯著下降趨勢(shì)。特別是在96～144 mmol/L時(shí)，隨NaHCO3脅迫濃度的增加，SOD活性開始低于對(duì)照組，導(dǎo)致MDA含量迅速增加，各萌發(fā)參數(shù)和耐鹽指數(shù)均低于對(duì)照，相對(duì)鹽害率則快速增加；當(dāng)NaHCO3濃度達(dá)到144 mmol/L時(shí)，則不能有效抑制相對(duì)鹽害率的增加。說明在一定NaHCO3脅迫濃度范圍內(nèi)，SA處理是提高青岡櫟種子萌發(fā)率的一種有效的方法，但在高濃度NaHCO3脅迫處理下，SA作用減弱。

綜合分析表明，盡管青岡櫟種子經(jīng)0.5 mmol/L的SA處理后，可降低NaHCO3脅迫對(duì)青岡櫟種子萌發(fā)造成的傷害，但SA緩解作用在不同NaHCO3濃度下處理效果不同。在NaHCO3濃度為24～72 mmol/L時(shí)，特別是當(dāng)NaHCO3為72 mmol/L時(shí)，青岡櫟種子可以通過增強(qiáng)抗氧化防御能力、增加滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)避免其脅迫傷害，促進(jìn)種子萌發(fā)，表現(xiàn)出最強(qiáng)的耐重碳酸鹽性。另外，當(dāng)NaHCO3濃度超過72 mmol/L時(shí)，SA的作用效果開始減弱，抗氧化酶活性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量開始下降，導(dǎo)致MDA含量迅速增加，相對(duì)鹽害率則開始迅速增加?？傊诳λ固貛r溶地區(qū)進(jìn)行青岡櫟實(shí)生苗繁殖過程中，可以在播種前用0.5 mmol/L外源SA浸種，以提高種子萌發(fā)率，且當(dāng)NaHCO3濃度為72 mmol/L時(shí)，處理效果最佳。但是否SA處理效果會(huì)受處理時(shí)間和方式等多因素的影響還需進(jìn)一步研究，故在喀斯特巖溶地區(qū)青岡櫟造林育苗生產(chǎn)中還應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行處理。

參考文獻(xiàn)（reference）：

[1]郭柯，劉長成，董鳴．我國西南喀斯特植物生態(tài)適應(yīng)性與石漠化治理[J]．植物生態(tài)學(xué)報(bào)，2011，35(10)：991-999．GUO K，LIU C C，DONG M．Ecological adaptation of plants and control of rocky-desertification on Karst region of southwest China[J]．Chin J Plant Ecol, 2011, 35(10): 991-999．DOI: 10.3724/SP.J.1258.2011.00991.

[2]王德爐，喻理飛.喀斯特環(huán)境生態(tài)脆弱性數(shù)量評(píng)價(jià)[J].南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2005，29(6)：23-26.WANG D L, YU L F. The quantitative assessment of ecological frangibility in Karst areas[J]. J Nanjing For Univ (Nat Sci Ed), 2005, 49(6): 23-26. DOI:10.3969/j.issn.1000-2006.2005.06.006.

[3]吳沿友，邢德科，劉瑩．植物利用碳酸氫根離子的特征分析[J]．地球與環(huán)境，2011，39(2): 273-277．WU Y Y，XING D K，LIU Y． The characteristics of bicarbonate used by plants[J]．Earth Environ, 2011, 39(2): 273-277．DOI: 10.14050/j.cnki.1672-9250.2011.02.022.

[4]MUNNS R，TESTER M. Mechanisms of salinity tolerance[J]. Annu Rev Plant Biol, 2008, 59: 651-681．DOI: 10.1146/annurev.arplant.59.032607.092911.

[5]FARIDUDDIN Q，KHAN T A，YUSUF M，et al．Ameliorative role of salicylic acid and spermidine in the presence of excess salt inLycopersiconesculentum[J]．Photosynthetica, 2018, 56(3): 750-762．DOI: 10.1007/s11099-017-0727-y.

[6]ALI E A，MAHMOUD A M．Effect of foliar spray by different salicylic acid and zinc concentrations on seed yield and yield components of mungbean in sandy soil[J]．Asian J Crop Sci, 2012, 5(1): 33-40．DOI: 10.3923/ajcs.2013.33.40.

[7]HAYAT Q，HAYAT S，IRFAN M，et al．Effect of exogenous salicylic acid under changing environment： a review[J]．Environ Exp Bot, 2010, 68(1): 14-25．DOI: 10.1016/j.envexpbot.2009.08.005.

[8]HAO L，ZHAO Y，JIN D D，et al．Salicylic acid-alteringArabidopsismutantsresponse to salt stress[J]．Plant Soil, 2012, 354(1/2): 81-95．DOI: 10.1007/s11104-011-1046-x.

[9]NIMIR N E A，LU S Y，ZHOU G S，et al． Comparative effects of gibberellic acid，kinetin and salicylic acid on emergence, seedling growth and the antioxidant defence system of sweet sorghum (Sorghumbicolor) under salinity and temperature stresses[J]．Crop Pasture Sci, 2015, 66(2): 145．DOI:10.1071/cp14141.

[10]ASADI M，HEIDARI M A，KAZEMI M，et al．Salicylic acid induced changes in some physiological parameters in chickpea (CicerarietinumL.) under salt stress[J]．Int J Agr Tech, 2013, 9(2): 311-316．

[11]BAGHERI M Z．The effect of maize priming on germination chara-cteristics，catalase and peroxidase enzyme activity，and total protein content under salt stress[J]．Int J Biosci, 2014, 4(2): 113-119．DOI:10.12692/ijb/4.2.113-119.

[12]YADAV V，SINGH H，SINGH A，et al．Salicylic acid induced changes on some physiological parameters symptomatic for oxidative stress in maize (ZeamaysL.) grown under cinnamic acid stress[J]．Russ Agric Sci, 2018，44 (1): 9-17．DOI: 10.3103/S1068367418010202.

[13]王玉萍，董雯，張?chǎng)?，等．水楊酸?duì)鹽脅迫下花椰菜種子萌發(fā)及幼苗生理特性的影響[J]．草業(yè)學(xué)報(bào)，2012，21(1)：213-219．WANG Y P，DONG W，ZHANG X，et al．Effects of salicylic acid on seed germination and physiological characters of cauliflower seedlings under salt stress[J]．Acta Prata culturae Sin, 2012, 21(1): 213-219.

[14]張鳳銀，陳禪友，胡志輝，等．外源水楊酸對(duì)鹽脅迫下菜豆種子萌發(fā)和幼苗生理特性的影響[J]．東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，44(10)：39-43．ZHANG F Y，CHEN C Y，HU Z H，et al．Effect of exogenous salicylic acid on seed germination and seedling physiological characteristics of kidney bean (PhaseolusvulgarisL.)under salt stress[J]．J Northeast Agric Univ, 2013, 44(10): 39-43．DOI: 10.19720/j.cnki.1005-9369.2013.10.008.

[15]李潤枝，靳晴，李召虎，等．水楊酸提高甘草種子萌發(fā)和幼苗生長對(duì)鹽脅迫耐性的效應(yīng)[J]．作物學(xué)報(bào)，2020，46(11)：1810-1816. LI R Z，JIN Q，LI Z H，et al．Salicylic acid improved salinity tolerance ofGlycyrrhizauralensisFisch during seed germination and seedling growth stages[J]. Acta Agron Sin, 2020, 46(11): 1810-1816．DOI: 10.3724/SP.J.1006.2020.04080.

[16]曹棟棟，陳珊宇，秦葉波，等．水楊酸調(diào)控鹽脅迫下羽衣甘藍(lán)種子萌發(fā)的機(jī)理[J]．植物學(xué)報(bào)，2020，55 (1)：49-61. CAO D D，CHEN S Y，QIN Y B，et al．Regulatory mechanism of salicylic acid on seed germination under salt stress in kale [J]． Bull Bot, 2020, 55 (1): 49-61．DOI: 10.11983/CBB19047.

[17]蘇宗明，李先琨．廣西巖溶植被類型及其分類系統(tǒng)[J]．廣西植物，2003，23(4)：289-293．SU Z M，LI X K．The types of natural vegetation in Karst region of Guangxi and its classified system[J]．Guihaia, 2003, 23(4): 289-293．DOI: 10.3969/j.issn.1000-3142.2003.04.001.

[18]HUANG Y Q，ZHAO P，ZHANG Z F，et al．Transpiration ofCyclobalanopsisglauca(syn．Quercusglauca) stand measured by sap-flow method in a Karst rocky terrain during dry season[J]．Ecol Res, 2009，24(4)：791-801．DOI: 10.1007/s11284-008-0553-6.

[19]程彩芳，陸愛云，李正才，等．不同林齡木荷-青岡櫟混交林幼林碳儲(chǔ)量[J]．生態(tài)學(xué)雜志，2015，34(10)：2705-2710．CHENG C F，LU A Y，LI Z C，et al．Carbon storage in mixedSchimasuperbaGardn．et Champ．-Cyclobalanpsisglauca(Thunb.) Oerst．young plantations at different stand ages[J]．Chin J Ecol, 2015，34(10): 2705-2710. DOI: 10.13292/j.1000-4890.2015.0249.

[20]程彩芳，李正才，周君剛，等．樹種組成對(duì)北亞熱帶11年生常綠闊葉人工林碳儲(chǔ)量的影響[J]．西北植物學(xué)報(bào)，2015，35(5)：1037-1043．CHENG C F，LI Z C，ZHOU J G，et al．Effects of tree species composition on carbon storage of 11 years old evergreen broad-leaved plantations in north subtropical areas of China[J]．Acta Bot Boreali-Occidentalia Sin, 2015, 35(5): 1037-1043．DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2015.05.1037.

[21]吳敏，鄧平，趙英，等．喀斯特干旱環(huán)境對(duì)青岡櫟葉片生長及葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)參數(shù)的影響[J]．應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2019，30(12)：4071-4081．WU M，DENG P，ZHAO Y，et al．Effects of drought on leaf growth and chlorophyll fluorescence kinetics parameters inCyclobalanopsisglaucaseedlings of Karst areas[J]．Chin J Appl Ecol，2019，30(12): 4071-4081. DOI: 10.13287 /j.1001-9332.201912.001.

[22]鄧平，吳敏，趙英，等．干旱脅迫下外源鈣對(duì)桂西北喀斯特地區(qū)青岡櫟種子萌發(fā)的影響[J]．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2020，48(2)：69-79．DENG P，WU M，ZHAO Y，et al．Effects of exogenous calcium on seed germination ofCyclobalanopsisglaucain Karst area of Northwestern Guangxi under draught stress[J]．J Northwest A&F Univ (Nat Sci Ed), 2020, 48(2): 69-79．DOI: 10.13207/J.cnkj.jnwafu.2020.02.009.

[23]吳敏，張文輝，馬闖，等．干旱脅迫對(duì)栓皮櫟種子萌發(fā)能力的影響[J]．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2017，45(5)：91-100．WU M，ZHANG W H，MA C，et al．Effect of drought stress on seed germination ability ofQuercusvariabilisBL.[J]．J Northwest A&F Univ (Nat Sci Ed), 2017, 45(5): 91-100．DOI: 10.13207/j.cnki.jnwafu.2017.05.013.

[24]BOSCAGLI A，SETTE B．Seed germination enhancement inSaturejamontanaL. ssp. Montana [J]. Seed Sci Technol, 2001, 29(2): 347-355．

[25]DEBEZ A，BEN HAMED K，GRIGNON C，et al．Salinity effects on germination，growth，and seed production of the halophyteCakilemaritima[J]．Plant Soil, 2004, 262(1/2): 179-189．DOI: 10.1023/B:PLSO.0000037034.47247.67.

[26]李合生.植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)[M]．北京：高等教育出版社,2000．LI H S. Plant physiology and biochemistry experimental principles and techniques[M]．Beijing: Higher Education Press,2000．

[27]TALEI D，VALDIANI A，YUSOP M K，et al．Estimation of salt to-lerance inAndrographispaniculataaccessions using multiple regression model[J]．Euphytica, 2013, 189(1): 147-160．DOI: 10.1007/s10681-012-0782-1.

[28]BELKHADI A，HEDIJI H，ABBES Z，et al．Effects of exogenous salicylic acid pre-treatment on cadmium toxicity and leaf lipid content inLinumusitatissimumL.[J]．Ecotoxicol Environ Saf, 2010，73(5): 1004-1011．DOI: 10.1016/j.ecoenv.2010.03.009.

[29]李志萍，張文輝，崔豫川．NaCl和Na2CO3脅迫對(duì)栓皮櫟種子萌發(fā)及幼苗生長的影響[J]．生態(tài)學(xué)報(bào)，2015，35(3)：742-751．LI Z P，ZHANG W H，CUI Y C．Effects of NaCl and Na2CO3stresses on seed germination and seedling growth ofQuercusvariabilis[J]．Acta Ecol Sin, 2015, 35(3): 742-751．DOI: 10.5846/stxb201304190747.

[30]王國華，郭文婷，緱倩倩．鈉鹽脅迫對(duì)河西走廊荒漠綠洲過渡帶典型一年生草本植物種子萌發(fā)的影響[J]．應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2020，31(6)：1941-1947．WANG G H，GUO W T，GOU Q Q．Effects of sodium salt stress on seed germination of typical annuals in a desert-oasis ecotone of Hexi Corridor，China[J]．Chin J Appl Ecol，2020，31(6): 1941-1947．DOI: 10.13287/j.1001-9332.202006.006.

[31]鄭燕，張鴻翎，劉嘉偉，等．NaCl脅迫對(duì)黑果枸杞種子萌發(fā)特性的影響[J]．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2019，40(3)：24-32．ZHENG Y，ZHANG H L，LIU J W，et al．Effects of NaCL salt tolerance on seeds germination for wildLyciumruthenicumMurr[J]．J Inn Mong Agric Univ (Nat Sci Ed), 2019，40(3): 24-32．DOI: 10.16853/j.cnki.1009-3575.2019.03.005.

[32]王俊娟，王德龍，樊偉莉，等．陸地棉萌發(fā)至三葉期不同生育階段耐鹽特性[J]．生態(tài)學(xué)報(bào)，2011，31(13)：3720-3727．WANG J J，WANG D L，F(xiàn)AN W L，et al．The characters of salt-tolerance at different growth stages in cotton[J]．Acta Ecol Sin, 2011, 31(13): 3720-3727．

[33]李玉梅，馮穎，姜云天，等．混合鹽脅迫對(duì)東北薄荷種子萌發(fā)及幼苗生長的影響[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2019，47(10)：52-62. LI Y M，F(xiàn)ENG Y，JIANG Y T，et al．Effects of mixed salt stress on seed germination and seeding growth ofMentiasachalinensis(Briq.) Kudo[J]．J Northwest AF Univ (Nat Sci Ed)，2019，47(10)： 52-62．DOI: 10.13207/j.cnki.jnwafu.2019.10.007.

[34]JAYAKANNAN M，BOSE J，BABOURINA O，et al．Salicylic acid improves salinity tolerance inArabidopsisby restoring membrane potential and preventing salt-induced K+loss via a GORK channel[J]．J Exp Bot, 2013, 64(8)：2255-2268．DOI:10.1093/jxb/ert085.

[35]MA X，ZHENG J，ZHANG X，et al．Salicylic acid alleviates the adverse effects of salt stress onDianthussuperbus(Caryophylla-ceae) by activating photosynthesis, protecting morphological structure, and enhancing the antioxidant system[J]. Front Plant Sci, 2017, 8: 600．DOI: 10.3389/fpls.2017.00600.

[37]NAZAR R，IQBAL N，SYEED S，et al．Salicylic acid alleviates decreases in photosynthesis under salt stress by enhancing nitrogen and sulfur assimilation and antioxidant metabolism differentially in two mungbean cultivars[J]．J Plant Physiol, 2011, 168(8): 807-815．DOI: 10.1016/j.jplph.2010.11.001.

[38]BANINASAB B，BAGHBANHA M R．Influence of salicylic acid pre-treatment on emergence and early seedling growth of cucumber (Cucumissativus) under salt stress [J]．Int J Plant Prod，2013，7(2)：187-206．DOI: 10.1016/j.eja.2012.12.004.

[39]彭宇，張春蘭，沈其榮，等．鹽脅迫下兩種外源酚酸對(duì)黃瓜種子萌發(fā)及幼苗體內(nèi)某些酶活性的效應(yīng)[J]．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，26(1)：33-36．PENG Y，ZHANG C L，SHEN Q R，et al．Effects of two phenolic acids on seed germination and activities of some emzymes in cucumber seedlings under salt stress[J]．J Nanjing Agric Univ，2003，26(1)：33-36．DOI: 10.3321/j.issn:1000-2030.2003.01.008.