四川省石渠縣牦牛棘球蚴病血清流行病學初步調查

張朝輝，華瑞其，徐 林，陳和強，楊光友

（1.甘孜藏族自治州動物疫病預防控制中心，四川康定 626000；2.四川農業(yè)大學動物醫(yī)學院，四川成都 611130）

棘球蚴?。╡chinococcosis）俗稱包蟲病，是由帶科（Taeniidae）棘球屬（Echinococcus）絳蟲幼蟲——棘球蚴寄生于肝、肺等器官所引起的重要人獸共患寄生蟲病，屬于世界衛(wèi)生組織（WHO）通報的被忽視的熱帶病和我國優(yōu)先防治的二類動物疫病[1]。棘球蚴病主要流行于我國新疆、甘肅、寧夏、內蒙古、青海、西藏以及四川等7 個?。ㄗ灾螀^(qū)），對當地居民的生命健康和畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展造成了極大威脅與阻礙[2]。石渠縣位于四川省甘孜藏族自治州西北部，地處青藏高原東南緣川、藏、青3 省區(qū)結合處，全縣平均海拔4 000 m，幅員面積25 191 km2，下轄23 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，總人口9.79 萬。全國棘球蚴病抽樣調查[3]顯示，石渠縣是我國棘球蚴病流行程度最嚴重的地區(qū)之一。據調查[4]，2017 年該縣人棘球蚴病患病率為5.96%（5 036/84 742），占四川省棘球蚴病推測患者總數的18.05%（5 036/27 890）。

石渠縣同時也是四川省海拔最高的牧業(yè)大縣，畜牧養(yǎng)殖業(yè)是當地重要的支柱產業(yè)和居民收入來源。牦牛為石渠縣重要的養(yǎng)殖動物，2017 年底存欄量約為47.63 萬頭。細粒棘球絳蟲在當地廣泛流行，是引起牦牛感染棘球蚴的主要致病原。其成蟲寄生于犬科動物小腸，蟲卵或孕卵節(jié)片隨糞便排出而污染環(huán)境，牦牛因誤食蟲卵而感染[5]。棘球蚴感染牦牛后主要在肝臟或肺臟內形成包囊，影響牦牛生長發(fā)育和生產性能，并進一步在當地傳播，對藏族地區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展和藏族同胞生命健康構成威脅[6]。為了解石渠縣牦牛棘球蚴病流行狀況，2017年按照便利采樣原則，在石渠縣采集牦牛血清，采用ELISA 試劑盒檢測棘球蚴抗體，以初步探究石渠縣牦牛棘球蚴病的血清流行病學特征，并為當地牦牛棘球蚴病防控提供參考數據。

1 材料和方法

1.1 樣品采集

本次調查以石渠縣所轄的12 個鄉(xiāng)5 個鎮(zhèn)作為調查點，共采集牦牛血清2 047 份。其中：平均海拔4 000 m 及以下的9 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，共計抽樣1 025 份；4 000 m 以上的8 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，抽樣1 022 份。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)作為獨立采樣單位，按照便利采樣原則，對養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的1 歲以上牦牛進行血清樣品采集。每頭牦牛采集血清后，獨立編號并記錄性別、年齡及所屬鄉(xiāng)鎮(zhèn)。

1.2 主要儀器及試劑

恒溫箱，型號DHP-9272，上海齊欣科學儀器有限公司；微量移液器，型號Finnpipette F2，Thermo Fisher Scientific，USA；酶 標 儀，型 號Multiskan SkyHigh，Thermo Fisher Scientific，USA；振蕩器，型號ZW-A，金壇市富華儀器有限公司；牛羊包蟲病抗體EILSA 檢測試劑盒，批號20170524，深圳康百得生物科技有限公司。

1.3 檢測方法

血清學檢測在四川農業(yè)大學動物寄生蟲病研究中心進行。利用牛羊包蟲病抗體ELISA 檢測試劑盒進行抗體檢測，檢測程序及結果判定標準嚴格參照試劑盒說明書。在酶標板中，樣品孔每孔加入50 μL 待檢樣品，空白對照、陰性對照及陽性對照均2 孔，每孔分別對應加入PBS 緩沖液、陰性血清及陽性血清各50 μL。除空白對照孔外，其余每孔加酶標結合物100 μL，蓋好封板膜，37 ℃避光反應30 min；每孔加100 μL 顯色液，蓋好封板膜，37 ℃避光反應10 min；每孔加終止液50 μL，以空白對照調零，用酶標儀于450 nm 波長（630 nm 作為參比波長）讀取OD 值。參考值：Cut-off 值=陰性對照OD×2.1（陰性對照孔OD ＜0.1 時，按0.1計）。有效性判定：陰性對照孔OD ≤0.20（若＞0.20，則試驗無效），陽性對照孔OD ≥0.3（若＜0.3，則試驗無效）。結果判定：樣品OD≥Cut-off值，判為棘球蚴抗體陽性，反之為陰性。

1.4 統(tǒng)計方法

采用Microsoft Excel 2013 軟件建立數據庫，對數據經檢查、核實、剔除后，通過SPSS 22.0 軟件進行數據統(tǒng)計分析。計數資料采用χ2檢驗，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 總體檢測情況

本次調查在石渠縣共計檢測血清2 047 份，檢出陽性363 份，血清陽性率為17.73%（363/2 047）。具體結果見表1。

表1 石渠縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)牦牛棘球蚴病血清抗體檢測結果

2.2 地理分布

本次共調查了石渠縣17 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，其中色須鎮(zhèn)和格孟鄉(xiāng)未檢出陽性，而瓦須鄉(xiāng)和溫波鎮(zhèn)血清陽性率較高，分別為51.89%（55/106）和63.89%（69/108），不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)間血清抗體陽性率差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=412.39，P＜0.05）。不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的血清陽性率地理分布結果（圖1）顯示：處于西北方向鄉(xiāng)鎮(zhèn)的陽性率（7.37%，82/1 112），與東南方向鄉(xiāng)鎮(zhèn)（30.05%，281/935）差異有統(tǒng)計學意義（χ2=179.08，P＜0.05）；處于海拔4 000 m 及以下鄉(xiāng)鎮(zhèn)的血清陽性率（29.85%，306/1 025），與4 000 m 以上鄉(xiāng)鎮(zhèn)（5.58%，57/1 022）差異有統(tǒng)計學意義（χ2=206.76，P＜0.05）。

圖1 石渠縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)牦牛棘球蚴血清流行率地理分布

2.3 群間分布

2.3.1 性別分布 本次調查共檢測母畜814 頭、公畜1 233 頭，其中母畜和公畜棘球蚴血清抗體陽性率分別為15.72%（128/814）和19.05%（235/1 233），差異無統(tǒng)計學意義（χ2=3.74，P＞0.05），結果見表2。

表2 不同性別牦牛棘球蚴血清抗體檢測統(tǒng)計結果

2.3.2 年齡分布 本次調查的牦牛均為1 歲及以上年齡，平均4.73 歲，其中最大的16 歲。不同年齡牦牛均有陽性血清被檢出，年齡差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=20.33，P＜0.05）；將牦牛年齡段分為1～2 歲幼年期與3 歲及以上成年期進行統(tǒng)計發(fā)現，幼年期牦牛血清陽性率（9.29%，13/140）與成年期（18.35%，350/1 907）差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.35，P＜0.05）。具體結果見表3～4。

表3 不同年齡牦牛棘球蚴血清抗體檢測結果

表4 不同年齡段牦牛棘球蚴血清抗體檢測統(tǒng)計結果

3 討論

既往棘球蚴病防控經驗表明，在棘球蚴病高度流行地區(qū)具有流行病學閾值效應和延遲效應特征，即當地犬棘球蚴感染率低于一定閾值并持續(xù)一段時間后，當地中間宿主棘球蚴感染率才可能隨之降低[7]。如1997—1998 年，石渠縣和甘孜縣犬棘球絳蟲平均感染率均為30.19%，而同期兩縣牦牛棘球蚴平均感染率分別為54.5%和49.7%[8]；到2012 年，石渠縣和甘孜縣犬棘球絳蟲感染率分別下降至4.06%和0.63%，而兩縣牦牛棘球蚴感染率，石渠縣仍維持在51.40%，甘孜縣則下降至13.40%[9]。造成這種現象的原因可能是，甘孜縣犬棘球絳蟲感染率已低于閾值，而石渠縣犬感染率未下降至閾值或牦牛感染率仍受延遲效應影響。通過近年來棘球蚴病防治項目的實施，2015 年石渠縣家犬及野犬棘球絳蟲感染率已分別下降至0.95%和2.09%[10]，說明通過長年實施棘球蚴病防治措施能顯著抑制犬棘球絳蟲感染，但并不能徹底避免犬感染棘球絳蟲及控制棘球蚴病的傳播。本研究于2017 年對石渠縣牦牛進行棘球蚴血清流行病學初步調查，由于石渠縣牦牛養(yǎng)殖戶分布分散，樣本采集難以按照流行病學理論中的采樣策略進行系統(tǒng)采樣，樣本采集量也較少。但本次采樣的范圍較廣，基本覆蓋了整個石渠縣，因此檢測結果能夠初步反映出當地牦牛棘球蚴病流行狀況。本次流行病學調查發(fā)現，石渠縣牦牛棘球蚴血清抗體陽性率為17.73%，低于2012 年的51.40%[9]，說明有一定的防控效果；但高于2016 年四川省牦牛平均棘球蚴感染率（5.41%）[11]，提示石渠縣牦牛棘球蚴感染率可能已不再受延遲效應影響，說明當地牦牛棘球蚴感染仍較為嚴重。石渠縣年均氣溫低，氣候濕潤，草場植被低矮，其自然生態(tài)環(huán)境十分利于蟲卵的長期存活；此外，石渠縣居民以藏族為主并且犬在當地大量存在，藏民往往將犬和牦牛同時放養(yǎng)，這無疑會增加牦牛攝入犬糞中蟲卵的概率；加之當地缺乏規(guī)范化屠宰場，牦牛屠宰多在家庭或露天屠宰場進行，隨后藏民會將有病變的牦牛內臟任意丟棄或直接喂食犬，從而又進一步促進了細粒棘球絳蟲完整生活史的建立，從而造成當地牦牛棘球蚴感染率較高[12]。

棘球蚴病的流行往往具有地域分布特點。四川省是我國棘球蚴病流行最嚴重的地區(qū)之一，而位于青藏高原的石渠縣又是四川省棘球蚴病流行情況最嚴重的地區(qū)[12-14]。本次調查發(fā)現，石渠縣17 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的牦牛棘球蚴血清抗體陽性率存在差異，呈現東南方向低海拔（4 000 m 及以下）鄉(xiāng)鎮(zhèn)牦牛具有更高感染率的空間聚集性分布特征，提示牦牛棘球蚴病在當地具有地域分布差異。除格孟鄉(xiāng)和色須鎮(zhèn)（海拔均高于4 000 m）未檢測到陽性血清外，其余15 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)均檢測到了陽性血清，而以瓦須鄉(xiāng)和溫波鎮(zhèn)（海拔均低于4 000 m）血清陽性率較高，分別為51.89%和63.89%。石渠縣平均海拔4 000 m，其中海拔處于4 000 m 以上鄉(xiāng)鎮(zhèn)的牦牛血清陽性率（5.58%）顯著低于4 000 m 及以下鄉(xiāng)鎮(zhèn)（29.85%）。這可能是隨著海拔升高，自然環(huán)境因素發(fā)生改變以及犬等終末宿主活動減少有關。在海拔高于4 000 m的鄉(xiāng)鎮(zhèn)中，呷依鄉(xiāng)牦牛棘球蚴病血清陽性率仍較高，這可能與其地理位置最接近青海?。蝌什「叨攘餍械貐^(qū)）有關；尼呷鎮(zhèn)犬分布相對集中且數量較多，這可能是該鎮(zhèn)牦牛血清陽性率較高的原因之一。

在棘球蚴病的流行環(huán)節(jié)中，牦牛是重要的中間宿主，在棘球蚴病的傳播過程中起著重要作用。我國是養(yǎng)殖牦牛數量較多的國家，占全球牦?？倲盗康?0%，年存欄約1 400 萬頭，其中四川省存欄約310 萬頭[15]。本次共調查石渠縣公牦牛1 233 頭和母牦牛814 頭，其血清陽性率分別為19.05%和15.72%，但統(tǒng)計分析發(fā)現性別不是牦牛感染的影響因素。1～16 歲齡牦牛中均檢出棘球蚴陽性血清，且年齡差異具有統(tǒng)計學意義，幼年牦牛血清陽性率（9.29%）顯著低于成年牦牛（18.35%）。這可能是因為幼年牦牛接觸蟲卵的概率較少或感染后形成的包囊仍處于早期生長階段。

對石渠縣人感染棘球蚴的影響因素進行多因素logistic 回歸分析發(fā)現，家中喂養(yǎng)牛羊和犬均是引起當地居民患棘球蚴病的危險因素[16]。而對石渠縣棘球蚴病流行影響因素分析發(fā)現，戶均羊數每增加1 只，人群患病率增加0.183 倍；而戶均牛數每增加1 頭，人群患病率則會增加0.274 倍[17]。此外，有調查[18]發(fā)現，青藏高原地區(qū)部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)僅飼養(yǎng)了犬和牦牛，但仍然出現人棘球蚴感染病例，提示在今后防控工作中應把牦牛棘球蚴病防控作為研究重點。接種疫苗是預防中間宿主感染棘球蚴的重要手段，目前最為有效的疫苗為EG95 疫苗。臨床和田間試驗均表明，為棘球蚴病主要中間宿主（綿羊、山羊及牛）接種EG95 疫苗，均能使其獲得良好的免疫保護效果[19]。隨后，有學者對EG95 疫苗免疫牦牛的效果及安全性進行了評價，發(fā)現該疫苗接種不同地區(qū)的牦牛后均可使其產生較高的抗體水平并具有良好的安全性[20]。綜上可見，除了對棘球蚴病流行區(qū)持續(xù)開展犬驅蟲與管理以及綿羊強制免疫EG95 疫苗外，進行牦牛內臟無害化處理和對牦牛接種EG95 疫苗應考慮納入未來棘球蚴病防控手段。

4 結論

經初步調查，石渠縣牦牛群中仍有一定程度的棘球蚴感染，且呈現一定的區(qū)域和年齡分布特征，東南方向的低海拔區(qū)域以及高齡牦牛感染相對較嚴重。因此，石渠縣應持續(xù)加強牦牛棘球蚴病防控和監(jiān)測，將東南部的低海拔區(qū)域牦牛和高齡牦牛列為重點防控對象。