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    柱前衍生-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)鵝肉中青霉素G殘留量

    2021-07-26 02:06:06謝星劉楚君陳晉元賀兆源盧陽王冉謝愷舟
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年11期
    關(guān)鍵詞:串聯(lián)質(zhì)譜法鵝肉殘留

    謝星 劉楚君 陳晉元 賀兆源 盧陽 王冉 謝愷舟

    摘要:建立了鵝肉中青霉素G殘留的柱前衍生-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。鵝肉通過加速溶劑萃?。ˋSE 350),0.2 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH值8.0)提取,所得提取液過HLB(60 mg/3 mL)固相萃取柱凈化,凈化液經(jīng)N2吹干后,乙醇復(fù)溶,三甲基硅烷基重氮甲烷(TMSD)衍生,所得衍生產(chǎn)物供氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)分析,色譜柱為TG-1MS(30.0 m×0.25 mm,0.25 μm),采用EI模式,全掃描(SCAN)和選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)方式定性,選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(Auto SRM)方式結(jié)合外標(biāo)法定量。結(jié)果表明,鵝肉中青霉素G在4.50~100.00 μg/kg添加范圍時(shí),回收率為80.67%~91.02%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.57%~2.58%,日內(nèi)RSD為2.72%~4.47%,日間RSD為3.51%~5.14%。鵝肉中青霉素G檢測(cè)限為1.50 μg/kg,定量限為4.50 μg/kg,該方法靈敏度高,定性、定量準(zhǔn)確,適用于鵝肉中青霉素G殘留的確證檢測(cè)。

    關(guān)鍵詞:鵝肉;青霉素G;殘留;柱前衍生;氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

    中圖分類號(hào):TS251.7?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號(hào):1002-1302(2021)11-0132-06

    收稿日期:2020-09-06

    基金項(xiàng)目:國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(編號(hào):CARS-41-G23);江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(編號(hào):PAPD)。

    作者簡(jiǎn)介:謝 星(1989—),女,江蘇揚(yáng)州人,博士,助理研究員,主要從事動(dòng)物產(chǎn)品安全研究。Email:yzxx1989@163.com。

    通信作者:謝愷舟,博士,教授,主要從事動(dòng)物產(chǎn)品品質(zhì)、安全與獸藥殘留檢測(cè)方法研究。E-mail:yzxkz168@163.com。

    青霉素G主要作用于革蘭氏陽性菌,是臨床上常用的一類抗生素。對(duì)家禽而言,青霉素G可以預(yù)防敏感菌所致的全身(局部)感染 [1],應(yīng)用過程中常存在使用不合理和不規(guī)范現(xiàn)象,導(dǎo)致禽肉中青霉素G殘留量超標(biāo),最終危害人體健康。因此,各國對(duì)動(dòng)物性組織中青霉素G殘留限量制定了嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn),其中,歐盟、日本、加拿大和中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定雞組織中青霉素G的最高殘留限量(maximum residue limit,MRL)均為50 μg/kg [2-5]。本研究參考上述MRL標(biāo)準(zhǔn)建立鵝肉中青霉素G殘留的確證檢測(cè)方法。

    目前,國內(nèi)外關(guān)于檢測(cè)動(dòng)物性食品中青霉素G的方法雖然已有微生物法 [6]、免疫分析法 [7]、薄層色譜法 [8]、高效液相色譜-紫外檢測(cè)法(HPLC-UV) [9]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS) [10]等,但使用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)檢測(cè)動(dòng)物性組織中青霉素G殘留的方法還未有報(bào)道。與其他方法相比,柱前衍生-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)、前處理簡(jiǎn)單和快速。因此,本研究旨在建立GC-MS/MS檢測(cè)鵝肉中青霉素G殘留的確證分析方法,為動(dòng)物源性食品中青霉素G殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供技術(shù)支持。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(配有Trace 1300型氣相色譜儀、TSQ 8000型三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀、Triplus RSH自動(dòng)進(jìn)樣器)(美國Thermo Fisher公司)、加速溶劑萃取儀(ASE 350型,美國Thermo Fisher公司);電子分析天平(AE260S型,瑞士Mettler Toledo公司);漩渦混合器(G560E型,美國Scientific Industries有限公司);全自動(dòng)多管渦旋振蕩器(TBOYS型,美國Troemner有限責(zé)任公司);烘箱(FD115型,德國Binder公司);氮吹儀(N-EVAP-112型,美國Organomation公司);超純水制備儀[Smart2-Pure型,賽默飛世爾科技(中國)有限公司];實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)[FE20型,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]等。

    青霉素G鉀標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%,CAS號(hào)為113-98-4,美國SIGMA-ALDRICH有限公司);三甲基硅烷基重氮甲烷[TMSD,CAS號(hào)為18107-18-1,阿拉丁試劑(上海)有限公司];乙腈、甲醇(色譜純,美國Merck有限公司);乙醇(色譜純,美國Fisher公司);十二水合磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、正己烷(分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);超純水 [電阻率為18.2 MΩ·cm(25 ℃),符合國家實(shí)驗(yàn)室用水標(biāo)準(zhǔn)(GB 6682—1992)]。

    1.2 主要溶液的配制

    準(zhǔn)確稱取青霉素G標(biāo)準(zhǔn)品10.20 mg(純度為98%)置于10 mL的棕色容量瓶中,用乙醇溶解并定容至刻度,搖勻,配成質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,并將標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液用乙醇分別準(zhǔn)確逐級(jí)稀釋成100.0、10.0、1.0、0.1 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液,置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    0.2 mol/L磷酸鹽緩沖溶液:準(zhǔn)確稱取67.7 g十二水合磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)和1.5 g磷酸二氫鉀(KH2PO4),采用超純水溶解并定容至1 000 mL,配成0.2 mol/L pH值8.0的磷酸鹽緩沖溶液。

    10%氫氧化鈉溶液:準(zhǔn)確稱取氫氧化鈉固體1.0 g,用超純水溶解并定容至10 mL,配成10 mg/g氫氧化鈉溶液。

    1%甲醇乙腈溶液:量取5 mL甲醇于500 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,搖勻,配成1%甲醇乙腈溶液。

    80%乙腈:量取20 mL水于100 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,搖勻,配成80%乙腈溶液。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 試驗(yàn)鵝飼養(yǎng)與樣品采集

    隨機(jī)選取70日齡揚(yáng)州鵝(揚(yáng)州天歌鵝業(yè)發(fā)展有限公司)公鵝10羽、母鵝10羽,單籠飼養(yǎng),試驗(yàn)期間均飼喂不添加任何藥物的全價(jià)飼料(揚(yáng)州市揚(yáng)大飼料廠提供),自由飲水。飼養(yǎng)14日后屠宰,采集試驗(yàn)鵝胸大肌肌肉作為空白樣品,分裝并密封,置于-34 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 樣品提取

    準(zhǔn)確稱?。?.0±0.02) g均質(zhì)好的空白樣品和4.0 g硅藻土置于研缽中,將其研磨成小顆粒,填入22 mL萃取池,萃取池置于ASE 350進(jìn)行提取,設(shè)置參數(shù),壓力:10.34 MPa;加熱溫度:30 ℃;靜態(tài)提取時(shí)間:5 min;沖洗溶劑總量:40%;每個(gè)樣品之間自動(dòng)沖洗1次;氮?dú)獯祾邥r(shí)間:60 s;首先用正己烷去除樣品中的脂肪,提取1次,棄掉提取液;其次用0.2 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH值8.0)提取樣品中的目標(biāo)物,提取2次,收集提取液,待用。

    1.3.3 樣品凈化與濃縮

    將“1.3.2”節(jié)中收集的提取液經(jīng)過HLB固相萃取柱(60 mg/3 mL)凈化,自動(dòng)固相萃取步驟見表1。收集的洗脫液置于氮吹儀中35 ℃吹干,待用。

    1.3.4 樣品復(fù)溶與衍生化

    將“1.3.3”節(jié)中氮吹至干的凈化收集液加入100 μL乙醇溶解,渦旋混勻1 min,然后加入400 μL TMSD,密封,于30 ℃烘箱中避光反應(yīng)30 min后取出,乙醇定容至1.0 mL,然后轉(zhuǎn)移至2.0 mL具塞離心管中,渦旋混勻1 min,常溫下12 000 r/min離心10 min,經(jīng)過0.22 μm有機(jī)相針頭式濾器過濾,濾液供GC-MS/MS檢測(cè)。

    1.3.5 氣相色譜與質(zhì)譜條件

    毛細(xì)管色譜柱:TG-1MS(30.0 m×0.25 mm,0.25 μm,美國Thermo Fisher公司);載氣:高純氦氣(>99.999%,413.7 kPa),流速:1.0 mL/min。進(jìn)樣口溫度:280 ℃;分流模式:不分流進(jìn)樣;分流流量:50.0 mL/min;不分流時(shí)間:1.0 min;載氣模式:恒流模式;載氣流速:1.0 mL/min;2 min后開閥,載氣節(jié)省時(shí)間2 min,載氣節(jié)省流量20.0 mL/min;進(jìn)樣體積:1.0 μL。程序升溫步驟見表2。

    電離模式:電子轟擊離子源(EI);電子束能量(電離能):70 eV;碰撞氣:高純氬氣(>99.999%,275.8 KPa);離子源溫度:280 ℃;傳輸線溫度:280 ℃;溶劑延遲:5.0 min;采集數(shù)據(jù)模式:全掃描(SCAN)和選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)方式定性,選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(Auto SRM)方式定量。

    1.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    按“1.3.2”節(jié)處理方法制備空白鵝肉基質(zhì)提取液,分別移取適量的空白基質(zhì)提取逐級(jí)稀釋青霉素G的標(biāo)準(zhǔn)工作液,使青霉素G的添加濃度為定量限(LOQ)、15.0、25.0、50.0、100.0、150.0、200.0 μg/kg。將各濃度樣品按“1.3.3”節(jié)、“1.3.4”節(jié)樣品前處理方式進(jìn)行GC-MS/MS檢測(cè)分析,每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定6次,取平均值。以青霉素G標(biāo)準(zhǔn)工作液在空白基質(zhì)中添加濃度為橫坐標(biāo)(x),以青霉素G衍生產(chǎn)物的定量離子對(duì)m/z 174.1>114.1*的峰面積為縱坐標(biāo)(y),繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并作為待測(cè)樣品的定量曲線。

    1.3.7 樣品加標(biāo)回收率和精密度測(cè)定

    準(zhǔn)確稱取2.0 g均質(zhì)好的空白鵝肌肉樣品,按“1.3.2”節(jié)的方法將空白樣品與硅藻土充分研磨均勻,加入青霉素G標(biāo)準(zhǔn)工作液適量,使其最終在每個(gè)空白樣品中的添加濃度為L(zhǎng)OQ、0.5 MRL、1.0 MRL和2.0 MRL,每個(gè)添加濃度設(shè)6個(gè)平行,按“1.3.3”節(jié)、“1.3.4”節(jié)的方法處理進(jìn)行GC-MS/MS檢測(cè),最終將檢測(cè)結(jié)果帶入空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線中求得濃度,計(jì)算樣品加標(biāo)回收率。將LOQ、0.5 MRL、1.0 MRL和2.0 MRL濃度樣品在1 d內(nèi)不同時(shí)間用同一標(biāo)準(zhǔn)曲線和1周內(nèi)不同天和不同標(biāo)準(zhǔn)曲線用均用同一臺(tái)GC-MS/MS重復(fù)測(cè)定6次,分別計(jì)算日內(nèi)和日間精密度。

    1.3.8 靈敏度測(cè)定

    采用空白基質(zhì)提取液逐級(jí)稀釋低濃度的青霉素G標(biāo)準(zhǔn)工作液,用已建立的GC-MS/MS 方法進(jìn)行檢測(cè)。每個(gè)濃度進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定,計(jì)算平均信噪比(S/N)。當(dāng)S/N≥3時(shí),所對(duì)應(yīng)的青霉素G濃度作為該方法的檢測(cè)限(LOD);當(dāng)S/N≥10時(shí),所對(duì)應(yīng)的青霉素G濃度作為該方法的定量限(LOQ)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 母離子和子離子的確定

    準(zhǔn)確吸取青霉素G與TMSD衍生后的標(biāo)準(zhǔn)溶液(100.0 μg/mL)用電子轟擊離子源(EI)進(jìn)行全掃描(Full SCAN)和選擇離子掃描(SIM),獲得衍生產(chǎn)物的全掃描色譜圖和質(zhì)譜圖,根據(jù)質(zhì)譜圖分析特征離子結(jié)構(gòu),同時(shí),參照Preu等提出的青霉素G與重氮甲烷反應(yīng)的質(zhì)譜圖結(jié)構(gòu)和梯度試驗(yàn) [11],挑選質(zhì)荷比(m/z)比較大且豐度比較高的母離子,最終得到衍生產(chǎn)物的質(zhì)譜圖。由圖1可知,青霉素G衍生產(chǎn)物的母離子是m/z 174.1。

    確定好母離子(即定量離子)后,就需考慮子離子(即定性離子)的選擇。采用Auto SRM優(yōu)化儀器方法,查看母離子在不同碰撞能下產(chǎn)生的子離子碎片強(qiáng)度信息,選擇合適的碰撞能和較大強(qiáng)度的碎片離子作為子離子。由母離子與子離子組合為監(jiān)測(cè)離子對(duì)。為對(duì)青霉素G衍生產(chǎn)物進(jìn)行準(zhǔn)確的定性、定量,本研究選擇3個(gè)響應(yīng)強(qiáng)度較高且穩(wěn)定存在的監(jiān)測(cè)離子對(duì)。青霉素G三甲基硅甲酯的保留時(shí)間和相關(guān)質(zhì)譜參數(shù)見表3。

    2.2 色譜圖

    空白鵝肉樣品總離子流色譜圖(TIC)和定量、定性離子的質(zhì)量色譜圖(MC)及空白鵝肉添加50.0 μg/kg 青霉素G標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流色譜圖(TIC)和定量、定性離子的質(zhì)譜圖(MC)。由圖2、圖3可知,在優(yōu)化的樣品前處理和GC-MS/MS條件下,青霉素G與TMSD反應(yīng)的衍生產(chǎn)物與雜質(zhì)良好地分離,峰形正常良好,保留時(shí)間在10.85 min。

    2.3 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    以青霉素G標(biāo)準(zhǔn)工作液在不同空白基質(zhì)中添加濃度為橫坐標(biāo)(x),青霉素G衍生產(chǎn)物的定量離子對(duì)m/z 174.1 > 114.1*的峰面積為縱坐標(biāo)(y),繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖4)。由圖4可知,青霉素G線性范圍為4.50~200.0 μg/kg時(shí),回歸方程為y=27 567x-38 053,決定系數(shù)r2為0.999 6。

    2.4 添加回收率和精密度

    青霉素G在空白鵝肌肉的添加濃度為L(zhǎng)OQ、0.5 MRL、1.0 MRL和2.0 MRL時(shí),青霉素G的添加回收率及精密度見表4。由表4可知,青霉素G在鵝肌肉中的添加濃度范圍在LOQ~2.0 MRL之間時(shí),青霉素G在鵝肌肉中的添加回收率為80.67%~91.02%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.57%~2.58%,日內(nèi)RSD為2.72%~4.47%,日間RSD為3.51%~5.14%。

    2.5 檢測(cè)限與定量限

    經(jīng)靈敏度測(cè)定,鵝肌肉中青霉素G的檢測(cè)限(LOD)為1.50 μg/kg、定量限(LOQ)為4.50 μg/kg。

    3 討論

    3.1 毛細(xì)管色譜柱的選擇

    由于青霉素G屬于β-內(nèi)酰胺類抗生素,其β-內(nèi)酰胺環(huán)的羰基α-碳上有一個(gè)酰胺基側(cè)鏈,而在它稠和的環(huán)上有1個(gè)2位-羧基 [12],故青霉素G屬于強(qiáng)極性化合物。因?yàn)镚C-MS/MS只能檢測(cè)極性低、沸點(diǎn)低的化合物,所以不能直接檢測(cè)青霉素G,需將其進(jìn)行衍生化反應(yīng),降低其極性,才能用GC-MS/MS檢測(cè)。由于不知衍生產(chǎn)物的極性大小,所以本試驗(yàn)采用盲摸原則(色譜柱極性由弱到強(qiáng))和固定相相似性原則(固定相與待測(cè)物極性的相似性)進(jìn)行操作。試驗(yàn)初期先采用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的非極性毛細(xì)管色譜柱TG-5MS(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm,5%-二苯基-95%-二甲基硅氧烷),發(fā)現(xiàn)無法檢測(cè)到未知衍生物,然后又參考Preu等在GC-MS檢測(cè)牛肉中的青霉素G時(shí),選用Rtx-1(30.0 m×0.25 mm,0.25 μm)非極性毛細(xì)管色譜柱 [11],結(jié)果青霉素G峰形良好。綜合來看,青霉素G衍生物極性很弱,需選用比TG-5MS極性還要低的毛細(xì)管色譜柱。本試驗(yàn)最終選擇TG-1MS(30.0 m×0.25 mm,0.25 μm,100%聚二甲基硅氧烷)毛細(xì)管色譜柱檢測(cè)鵝肉中的青霉素G殘留,發(fā)現(xiàn)青霉素G峰形更好,與Preu等報(bào)道的結(jié)果 [11]一致。這是因?yàn)門G-1MS為完全非極性毛細(xì)管色譜柱,惰性更高,可保證良好峰形和靈敏度,適用于難以分析的化合物;可降低基線噪聲,提高信噪比;耐受溫度可達(dá)330 ℃或350 ℃,高溫操作時(shí)也不會(huì)出現(xiàn)柱流失。

    3.2 衍生化試劑的選擇與衍生產(chǎn)物的穩(wěn)定性

    衍生化試劑種類很多,包括甲硅烷基化試劑、?;噭?、烷基化試劑及酯化試劑等。重氮甲烷是烷基化試劑中常用的甲基化試劑,主要將羧酸轉(zhuǎn)化為甲酯(重氮鏈),然后通過GC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定。Preu等 [11]、伊冰 [13]都曾用重氮甲烷衍生青霉素G,前者采用的是GC-MS結(jié)合內(nèi)標(biāo)法,結(jié)果良好,后者是GC結(jié)合外標(biāo)法,結(jié)果較差。雖然重氮甲烷與羧酸類化合物反應(yīng)迅速,但需現(xiàn)用現(xiàn)配,否則會(huì)在色譜圖中產(chǎn)生雜峰,且不易制備和分解較快,同時(shí)具有高毒性、熱不穩(wěn)定性和易爆炸性等性質(zhì) [14]。本試驗(yàn)也對(duì)此進(jìn)行驗(yàn)證,最終效果不理想,得出重氮甲烷并不是實(shí)驗(yàn)室常用衍生試劑的最佳選擇,需要找一個(gè)更安全、穩(wěn)定的替代試劑。三甲基硅烷基重氮甲烷(TMSD)與重氮甲烷具有相同的衍生能力,而且TMSD具有無毒、安全、穩(wěn)定的性質(zhì),更方便合成藥物用于分析,也更適用于實(shí)驗(yàn)室操作。TMSD主要是通過用三甲基甲硅烷基取代一個(gè)氫來克服重氮甲烷的缺點(diǎn) [15-16]。雖然TMSD是重氮甲烷的安全替代品,但用TMSD作為青霉素G的衍生化試劑目前尚未見報(bào)道,因此需驗(yàn)證TMSD能否與青霉素G發(fā)生反應(yīng)。本試驗(yàn)首先將TMSD、青霉素G及二者的反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行薄層色譜點(diǎn)板并在紫外分析儀下照射,觀察是否發(fā)生反應(yīng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)衍生產(chǎn)物的點(diǎn)處于最前端,證明有反應(yīng)發(fā)生,然后用GC-MS/MS 測(cè)定分析;同時(shí)參考Presser等 [16]、Ranz等 [17]、Rompa等 [18]采用TMSD衍生羧酸類物質(zhì)并用GC進(jìn)行分析檢測(cè)的方法,試驗(yàn)結(jié)果良好。故本試驗(yàn)最終采用GC-MS/MS結(jié)合外標(biāo)法檢測(cè)鵝肉中青霉素G殘留,選擇TMSD作為衍生化試劑,不需購買內(nèi)標(biāo)物,降低試驗(yàn)成本,無需現(xiàn)用現(xiàn)配,保存周期長(zhǎng)且不易分解,縮短樣品前處理過程,結(jié)果良好。綜上所述,本試驗(yàn)選用TMSD作為衍生化試劑是最佳選擇。此外,本試驗(yàn)對(duì)青霉素G衍生產(chǎn)物在24 h內(nèi)的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究,由圖5可知,整體呈現(xiàn)穩(wěn)定趨勢(shì),但8~12 h波動(dòng)較大,可能與其反應(yīng)是否充分有關(guān),然后從12 h往后青霉素G衍生產(chǎn)物開始分解。因此,青霉素G衍生產(chǎn)物最好能在24 h內(nèi)完成檢測(cè)分析。

    3.3 氣相色譜和質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

    本試驗(yàn)參照Preu等建立的方法 [11],所得目標(biāo)物的峰形不好,且出峰時(shí)間較長(zhǎng),約21.08 min,因此需要優(yōu)化氣相色譜參數(shù)。通過反復(fù)優(yōu)化試驗(yàn),所得目標(biāo)物的峰形較好,且出峰時(shí)間大大縮短,最終篩選出氣相色譜最佳條件為:初始溫度100? ℃,1 min;

    30 ℃/min升至220 ℃,1 min;30 ℃/min升至280 ℃,5 min。進(jìn)樣口溫度:280 ℃;不分流進(jìn)樣模式;不分流時(shí)間:1.0 min;50.0 mL/min的分流流量;恒流模式;載氣流速1.0 mL/min;2 min后開閥,載氣節(jié)省2 min,載氣節(jié)省20.0 mL/min流量;進(jìn)樣體積1.0 μL。

    眾所周知,未知化合物的定性主要是通過將目標(biāo)化合物的標(biāo)準(zhǔn)品Full SCAN獲得的質(zhì)譜圖與Nist譜庫比對(duì)。由于青霉素G衍生產(chǎn)物質(zhì)譜圖在譜庫中不存在,所以主要根據(jù)Preu等提出的質(zhì)譜圖和大量的預(yù)試驗(yàn)確定的目標(biāo)物來進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn) [11]。故本試驗(yàn)最終采用Full SCAN和SIM方式對(duì)青霉素G衍生物進(jìn)行定性,掃描范圍m/z 50~360(圖1);TSQ 8000采用Auto SRM方式進(jìn)行定量掃描,選擇m/z 174.1>91.1和m/z 174.1>142.1為定性離子對(duì),m/z 174.1>114.1*為定量離子對(duì),確保定性和定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    4 結(jié)論

    本試驗(yàn)優(yōu)化并建立了鵝肉中青霉素G殘留的GC-MS/MS檢測(cè)方法。鵝肉中青霉素G回收率高于80.67%,LOD、LOQ分別為1.50、4.50 μg/kg。該檢測(cè)方法靈敏度高、定性、定量準(zhǔn)確,可滿足鵝肉中青霉素G殘留確證檢測(cè)的要求。

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