淺談實驗室校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)的方法及應(yīng)用

楊沙沙 劉露

作者單位：410007 湖南長沙，湖南省職業(yè)病防治院檢驗科

目前化學(xué)發(fā)光法在臨床檢驗領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，其利用抗原抗體結(jié)合反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光和磁性分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法，以磁性顆粒作為固相載體，吖啶酯作為發(fā)光底物，在酸堿變化過程中測定發(fā)光值，通過電路和計算機計算發(fā)光強度［1］。校準(zhǔn)是測試和調(diào)整檢驗系統(tǒng)（包括儀器、試劑、方法學(xué)參數(shù)等）的過程，用于建立該系統(tǒng)的計量學(xué)溯源性［2］。通常實驗人員對校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)及其與室內(nèi)質(zhì)量控制（質(zhì)控）的相關(guān)性未予足夠重視。本研究通過回顧促甲狀腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）、游離甲狀腺素（free thyroxine，F(xiàn)T4）、游離三碘甲狀腺原氨酸（free triiodothyronine，F(xiàn)T3）、雌二醇（estradiol，E2）、鐵蛋白（ferritin，F(xiàn)er）的校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)，分析校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)與室內(nèi)質(zhì)控情況，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1儀器與試劑 西門子ADVIA Centaur化學(xué)發(fā)光分析儀（德國西門子公司），試劑、校準(zhǔn)品均為原裝配套產(chǎn)品；質(zhì)控品為美國伯樂公司生產(chǎn)。

1.2研究方法

1.2.1質(zhì)控品與校準(zhǔn)品的配制與分裝 將質(zhì)控品和校準(zhǔn)品從冰箱取出復(fù)溫，復(fù)溶凍干粉，嚴(yán)格按說明書操作［3-4］。復(fù)溶20～30 min后，將溶液顛倒混勻6～8次，分裝至標(biāo)注批號及日期的凍存管內(nèi)，在-20 ℃條件下保存，有效期為1個月。

1.2.2質(zhì)控品檢測及結(jié)果判定 每日取分裝的低、中、高濃度質(zhì)控品在室溫下復(fù)溶20～30 min后進行檢測。采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法（12S、13S、2-2S、R4S）判斷室內(nèi)質(zhì)控情況，并記錄總結(jié)。

1.2.3校準(zhǔn)流程及數(shù)據(jù)分析 在更換試劑批號、校準(zhǔn)到期、質(zhì)控失控或儀器大修后進行校準(zhǔn)。低濃度校準(zhǔn)品（low concentration calibrator，CAL-L）、高濃度校準(zhǔn)品（high concentration calibrator，CAL-H）在室溫下復(fù)溶20～30 min后上機檢測。校準(zhǔn)完成后記錄各濃度校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)的發(fā)光值，并進行室內(nèi)質(zhì)控檢測。將各指標(biāo)CAL-L、CAL-H的有效校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)根據(jù)試劑和校準(zhǔn)品批次組合分組（TSH 8組，F(xiàn)T412組，F(xiàn)T35組，E2 6組，F(xiàn)er 4組），分析各組發(fā)光值，計算不同指標(biāo)的變異系數(shù)（coefficient of variation，CV），比較校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)的CV與允許總誤差（total allowable error，TEa）的差異。

1.2.4室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù) 收集2017年6月— 2019年12月TSH、FT4、FT3、E2、Fer的室內(nèi)質(zhì)控CV。各指標(biāo)TEa為室間質(zhì)量評價規(guī)范設(shè)定的25%，本實驗室質(zhì)控目標(biāo)為室內(nèi)精密度＜1/3TEa。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用Excel 軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以次（百分比）表示，計算各組均值、標(biāo)準(zhǔn)差及CV。

2 結(jié)果

2.1校準(zhǔn)情況

2.1.1校準(zhǔn)有效率 2017年6月—2019年12月本實驗室各指標(biāo)共校準(zhǔn)287次，校準(zhǔn)無效總次數(shù)18次，校準(zhǔn)無效率為6.27%。見表1。

表1 2017年6月—2019年12月各指標(biāo)校準(zhǔn)無效率比較

2.1.2校準(zhǔn)無效原因統(tǒng)計 校準(zhǔn)無效的主要原因有高CV、低濃度范圍偏差、比例超范圍、高濃度范圍偏差等，未定義比例、未定義斜率造成的校準(zhǔn)無效占比較低。各無效類型在不同指標(biāo)中的分布見表2。

表2 不同校準(zhǔn)無效類型在各指標(biāo)中的分布

2.2不同指標(biāo)校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)的CV比較 各指標(biāo)的TEa均為25%，以＜25%為判斷標(biāo)準(zhǔn)，TSH、FT4、Fer各組CAL-L、CAL-H發(fā)光值的CV均在TEa范圍內(nèi)；FT3第3組CAL-L、CAL-H發(fā)光值的CV為29.02%、135.66%，第4組CAL-H發(fā)光值的CV為76.59%，其余各組CAL-L、CAL-H發(fā)光值的CV均在TEa范圍內(nèi)；E2第5組CAL-H發(fā)光值的CV為55.21%，第6組CAL-H發(fā)光值的CV為37.21%，其余各組CAL-L、CAL-H發(fā)光值的CV均在TEa范圍內(nèi)。見表3。

表3 不同指標(biāo)低、高濃度校準(zhǔn)品（CAL-L、CAL-H）原始數(shù)據(jù)的變異系數(shù)（CV）比較

2.3 2017年6月— 2019年12月室內(nèi)質(zhì)控情況 TSH、FT3、E2、Fer的室內(nèi)質(zhì)控CV均小于8.33%，即低于1/3TEa。而FT42018年12月和2019年1月室內(nèi)質(zhì)控CV分別為9.97%和8.92%，室內(nèi)質(zhì)控未達標(biāo)，其他月份室內(nèi)質(zhì)控CV均控制在1/3TEa內(nèi)。

3 討論

為臨床提供準(zhǔn)確的檢測結(jié)果是檢驗科的目標(biāo)，而保證檢驗質(zhì)量是檢驗醫(yī)師的職責(zé)，提高檢驗質(zhì)量需要建立一套全面的質(zhì)控體系［5-6］。據(jù)統(tǒng)計，目前有7%～13%的差錯產(chǎn)生于檢驗中［7］。大量文獻表明，校準(zhǔn)品、試劑、質(zhì)控品以及儀器問題和人為因素是發(fā)生質(zhì)控失控的主要原因［8-10］。本研究中校準(zhǔn)無效率達6.27%，儀器提示校準(zhǔn)無效原因以高CV最多見（占38.89%），且在多個指標(biāo)中均有體現(xiàn)，與儀器、試劑、校準(zhǔn)品都有關(guān)系。為提高校準(zhǔn)成功率，需要做到以下幾點：① 保證儀器正常運行，定期進行維護保養(yǎng)；② 由于化學(xué)發(fā)光試劑含有順磁微粒，上機前需將磁珠充分混勻，且TSH、E2檢測試劑需避光保存；③ 校準(zhǔn)品應(yīng)保存于適宜條件，溶解過程嚴(yán)格按流程操作，上機前充分混勻，避免氣泡產(chǎn)生。

在儀器提示校準(zhǔn)有效時出現(xiàn)質(zhì)控失控，排除質(zhì)控品問題、人為因素、儀器故障后，校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)依然需要重點關(guān)注。同批號校準(zhǔn)品與同批號試劑作為組合，組內(nèi)數(shù)據(jù)有可比性。本研究結(jié)果顯示，各組校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)的差異較大，F(xiàn)T3第3組CAL-L和CAL-H發(fā)光值的CV、第4組CAL-H發(fā)光值的CV以及E2第5組與第6組CAL-H發(fā)光值的CV均高于該指標(biāo)的TEa。結(jié)合校準(zhǔn)數(shù)據(jù)和室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)，可見FT3、E2的室內(nèi)質(zhì)控CV有＞1/3TEa的情況。臨床實驗室內(nèi)質(zhì)控通常被用作考察檢測結(jié)果可靠性的標(biāo)準(zhǔn)，通過項目的不精密程度來評價測量過程的穩(wěn)定程度［11］。只有室內(nèi)質(zhì)控在控情況下，檢驗結(jié)果才能得到保證。TEa可以作為判斷校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)是否有效以及室內(nèi)質(zhì)控是否在控的預(yù)測因子，同時也能作為檢驗結(jié)果準(zhǔn)確與否的預(yù)測因子。

試劑穩(wěn)定性是質(zhì)控品最重要的指標(biāo)［12］。當(dāng)變異較大時，排除儀器故障、校準(zhǔn)品失效等因素后，可能原因為試劑變質(zhì)或瓶間差大，此時更需注意試劑質(zhì)量。試劑從出廠到使用需經(jīng)過輸運、儲存等多個環(huán)節(jié)，大部分醫(yī)院對檢驗試劑的驗收及入院后的監(jiān)管力度不夠［13］。任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都會影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。日常工作中為保證試劑的有效性需注意以下方面：① 入庫驗貨時，對有冷藏、冷凍要求的試劑，重點檢查是否使用規(guī)定設(shè)施運輸［14］，溫度記錄設(shè)備是否實時監(jiān)測且溫度在規(guī)定范圍內(nèi)；② 目測試劑性狀，因含有磁珠，試劑入庫前可進行混勻驗證，若磁珠不能混勻或有凝塊，則為不合格；③ 部分化學(xué)發(fā)光試劑需避光保存；④ 對用量少、使用周期長的試劑，需詳細記錄開瓶日期。

現(xiàn)階段實驗室信息管理系統(tǒng)在室內(nèi)質(zhì)控中運用廣泛，但未能從儀器中直接提取校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)。進口試劑校準(zhǔn)品的有效期較短，導(dǎo)致本研究樣本量少，若收集更多的校準(zhǔn)品發(fā)光值數(shù)據(jù)，則CV計算更加準(zhǔn)確。臨床工作中關(guān)注的多為質(zhì)控品的精密度，而校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)的精密度和準(zhǔn)確度易被忽視。如何確定校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)的精密度仍是未來探索方向。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突