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    XPertMTB/RIF 檢測技術(shù)在肺結(jié)核診斷中的臨床應(yīng)用

    2021-07-25 02:42:56文靜
    關(guān)鍵詞:抗酸涂片結(jié)核病

    文靜

    (廣西河池市南丹縣人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科,廣西 河池 547200)

    0 引言

    結(jié)核病是結(jié)合分期桿菌引起的傳染病,直接危害了機(jī)體多器官系統(tǒng),我國2020年結(jié)核病流行學(xué)調(diào)查中,全國活動(dòng)性肺結(jié)核患者高達(dá)499萬例,每年新發(fā)結(jié)核患者約100萬例[1]。隨著臨床醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展,肺結(jié)核致死率已經(jīng)較低,尤其是抗肺結(jié)核藥物的出現(xiàn),為肺結(jié)核的治療提供了諸多便利,但由于化療方案不合理,服藥不正規(guī)及單一用藥等,使結(jié)核桿菌產(chǎn)生耐藥性,不易被治愈[2-3]。傳統(tǒng)方法中的痰涂片找抗酸桿菌陽性率不高及金標(biāo)準(zhǔn)的痰結(jié)核菌培養(yǎng)時(shí)間過長均難以實(shí)現(xiàn)對結(jié)核病的做出早期診斷及及時(shí)有效的治療,GeneXPertMTB/RIF作為一種實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)以診斷自動(dòng)化,操作簡單化,檢測周期短的優(yōu)勢成為結(jié)核病早期診斷有利補(bǔ)充[4]。本文把該項(xiàng)檢測技術(shù)納入研究,選擇對象為我院收治的76例臨床確診的肺結(jié)核患者,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料。選取廣西河池市南丹縣人民醫(yī)院2020年10月至2021年5月收治的76例肺結(jié)核患者納入研究,其中男61例,女15例,年齡15~82歲;平均(45.65±7.58)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):①均為首次確診患者,未進(jìn)行抗結(jié)核治療;②知曉本文相關(guān)研究;③同時(shí)進(jìn)行痰涂片、痰培養(yǎng)及GeneXPertMTB/RIF檢測。排除標(biāo)準(zhǔn):①嚴(yán)重器官功能性障礙;②呼吸道中未留存足夠標(biāo)本患者;③合并其他傳染疾病者。

    1.2 方法。充分漱口后,用力深咳收集下呼吸道痰液及時(shí)送檢,一式三份,分別進(jìn)行金胺O染色法、羅氏培養(yǎng)、XPertMTB/RIF檢測。金胺O染色法:按照抗酸染色液(熒光金胺O法)試劑盒說明進(jìn)行專業(yè)操作。鏡下查見呈明亮的橘黃色或黃綠色細(xì)長略帶彎曲的桿菌即為抗酸分枝桿菌陽性,否則即為抗酸分枝桿菌陰性。

    羅氏培養(yǎng):按照羅氏培養(yǎng)管試劑盒說明進(jìn)行專業(yè)操作。接種后第3 d、第7 d各觀察,典型的分歧桿菌菌落粗糙且為淡黃色,菜花樣干燥,如有菌落生長需要實(shí)施涂片鏡檢以鑒別污染,以及速生長分枝桿菌。每周觀察一次,并及時(shí)記錄,至第八周末,無菌生長,培養(yǎng)陰性。

    XPertMTB/RIF:采用美國CePheid公司生產(chǎn)的GeneXPert儀器及XPertMTB/RIF檢測試劑盒,檢測痰中MTB及利福平耐藥性。將痰標(biāo)本與含氫氧化鈉及異丙醇的處理液常規(guī)按1∶2混合,震蕩均勻,常溫靜置15 min,使痰標(biāo)本充分液化。再將處理后的痰標(biāo)本轉(zhuǎn)移至XPertMTB/RIF檢測試劑盒中,置GeneXPert 系統(tǒng)全自動(dòng)檢測,在軟件窗口直接明確結(jié)果。

    質(zhì)量控制:嚴(yán)格做好室內(nèi)質(zhì)量控制,積極參加廣西檢測能力驗(yàn)證的室間質(zhì)評。

    1.3 觀察指標(biāo)。記錄三種檢測方式下,患者陽性率情況。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。本研究采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對本文數(shù)據(jù)計(jì)算,計(jì)量資料用表示,采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用百分比表達(dá),采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    三種檢測方式陽性率。XPertMTB/RIF檢測陽性率60.53%高于金胺O染色法40.79%、羅氏培養(yǎng)53.95%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    表1 三種檢測方法檢測結(jié)果[n(%)]

    3 討論

    結(jié)核俗稱“癆病”,由于機(jī)體感染結(jié)核桿菌所致,是臨床上常見的一種慢性的傳染性疾病,不同季節(jié)均會(huì)發(fā)病??捎绊懭矶鄠€(gè)器官(如腦膜、腹膜、腸、皮膚、骨骼等),尤其以肺結(jié)核發(fā)生率最高,主要表現(xiàn)為低熱、乏力、消瘦等全身,系統(tǒng)癥狀主要在于咳痰、咯血、咳嗽、胸痛等,主要傳播途徑是呼吸道,傳染源為傳染性肺結(jié)核,具有較高的死亡率,成為人類重要致死傳染病[5]。

    我國結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)核菌,是按規(guī)定進(jìn)行基本的檢查方式,也就是標(biāo)本涂片染色檢查、藥敏試驗(yàn)等。常規(guī)染色方法需要延長染色時(shí)間與加熱,使得其著色;而金胺0熒光法屬于熒光染色液,無需加熱,相對較抗酸熱染液更加安全。其染色原理在室溫環(huán)境下染色復(fù)染,紫外光源熒光顯微鏡檢查,而其他細(xì)菌與背景物質(zhì)一般為暗黃色,此時(shí)可選擇低倍鏡檢。而標(biāo)本涂片抗酸染色操作較為簡單,價(jià)格較低,已經(jīng)在臨床廣泛用于結(jié)合桿菌檢查,主要是在形態(tài)學(xué)觀察下,受制痰液中分枝桿菌數(shù)量,檢查期間敏感性較低,需要涂片中分枝桿菌達(dá)到103~104CFU/mL,對于部分患者無法檢出,僅僅適合20%的活性結(jié)合人群,漏檢率較高[6],而且該方法無法區(qū)分非結(jié)核分枝桿菌(NTM)與結(jié)核分枝桿菌(MTB)。與涂片法相比,固體培養(yǎng)法靈敏度較高[7-8],但檢查時(shí)間較長,需要4~8周完成,會(huì)影響患者治療,并會(huì)增加傳播風(fēng)險(xiǎn),無法滿足臨床診療要求。此時(shí)需要快速且簡單的檢查方式,用于臨床診斷與治療。

    XPert MTB/RIF是一種新型方法,在2 h內(nèi)完成痰樣本中結(jié)核分歧桿菌復(fù)合群和利福平耐藥rPoB基因突變檢測,實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化擴(kuò)增,操作簡單,時(shí)效性較強(qiáng)的目標(biāo)。有道報(bào)指出XPert MTB/RIF檢測肺泡灌洗液診斷涂陰肺結(jié)核及結(jié)核病應(yīng)急診斷靈敏度和特異度均較高[9-10]。本文將XPertMTB/RIF檢測技術(shù)納入研究,選擇其他檢測方式進(jìn)行對比,結(jié)果顯示:XPertMTB/RIF檢測陽性率60.53%高于金胺O染色法40.79%、羅氏培養(yǎng)53.95%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本文結(jié)果證實(shí)該方法整體檢測情況理想,具有重要意義。目前XPertMTB/RIF檢測已成為WHO重點(diǎn)推薦的肺結(jié)核和利福平耐藥、以及HIV合并結(jié)核分枝桿菌感染疑似病例的重要檢測方法。另外XPertMTB/RIF檢測技術(shù),利用巢式實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng),結(jié)合傳統(tǒng)PCR檢測需要的樣品制備,使用獨(dú)立一次性試劑盒,能夠自動(dòng)化完成,相比傳統(tǒng)的PCR方法更簡便、生物安全性更高、檢測過程不會(huì)受到影響、硬件設(shè)施要求低等優(yōu)勢。XPertMTB/RIF實(shí)現(xiàn)了結(jié)核病患者從“檢測+等待”到“檢測即治療”的模式轉(zhuǎn)換,這將是臨床診斷肺結(jié)核的重要方式。

    綜上所述,XPert MTB/RIF在肺結(jié)核中,診斷價(jià)值較高,能夠很好對患者進(jìn)行診斷,操作簡單、時(shí)間較短及安全性高,具有重要意義。

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