腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)在漿膜腔積液性質(zhì)鑒別中的應(yīng)用

李俊虹 林 花 陳夢(mèng)婷 王 勇

人體多種疾病可引起漿膜腔積液的產(chǎn)生和改變，鑒別積液的性質(zhì)為臨床的診斷、治療和預(yù)后提供了重要依據(jù)。目前，臨床對(duì)積液的良惡性鑒別的主要方法是脫落細(xì)胞查找癌細(xì)胞，這是金標(biāo)準(zhǔn)，但是漿膜腔積液的抽取因部位、數(shù)量等的局限性，不易找到癌細(xì)胞。因而，當(dāng)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的結(jié)果是陰性時(shí)不能排除惡性腫瘤的可能。研究腫瘤標(biāo)志物是非常重要的課題，目前已發(fā)現(xiàn)多種腫瘤標(biāo)記物，當(dāng)機(jī)體在發(fā)生腫瘤的異常情況下，組織細(xì)胞代謝旺盛，釋放大量腫瘤抗原進(jìn)入胸腹腔積液，再通過主動(dòng)吸收進(jìn)入血液，引起惡性腫瘤患者胸腹水腫瘤標(biāo)志物水平升高，其水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)比血清高，因而體液中腫瘤標(biāo)志物的檢驗(yàn)具有更高的應(yīng)用價(jià)值和意義[1～4]。

1.資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年5月至2016年12月就診于云南省第一人民醫(yī)院門診以及住院患者標(biāo)本135例，患者簽署了知情同意書，患者年齡55～80歲，男性86例，女性49例，其中胸腔積液85例，腹水50例，臨床最后診斷為惡性積液的標(biāo)本數(shù)80例，良性積液55例。所有標(biāo)本經(jīng)EDTA-K2抗凝，每份標(biāo)本確保2～6ml，收到標(biāo)本后立即檢測(cè)，不能檢測(cè)的標(biāo)本放到低溫冰箱中(2～4℃)保存。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑與儀器：萊卡相差顯微鏡、低速臺(tái)式離心機(jī)、羅氏Cobas6000免疫分析儀、免疫-雅培I2000-2、羅氏專用免疫分析試劑、免疫-雅培I2000-2專用試劑。

1.2.2 體液腫瘤標(biāo)記物的檢測(cè)：將收集到的良、惡性積液,按標(biāo)準(zhǔn)化操作上機(jī)檢測(cè)(其中CA724、CYFRA21-1、NSE使用羅氏Cobas6000免疫分析儀檢測(cè)，其余項(xiàng)目使用免疫-雅培I2000-2檢測(cè))，記錄腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：胸腹水測(cè)定數(shù)值大于正常參考范圍為陽(yáng)性，反之為陰性。以AFP：1.09～8.04ng/ml、CEA：0.0～5.0ng/ml、CA125：0～35U/ml、CA153：0～31.3U/ml、CA199：0～37U/ml、CA724：0.0～67U/ml、NSE：0～5.2ng/ml、CYFRA21-1：0.0～3.3ng/ml、SCC：0～1.5ng/ml為參考值，進(jìn)行判定、分類和統(tǒng)計(jì)。

1.2.3 相差顯微鏡檢查：標(biāo)本沉淀后吸出上層液體丟棄，保留少量液體，把管底的液體輕輕混勻，制成涂片，規(guī)格約為2.5×1.0cm，待手工制片自然干燥后，固定標(biāo)本，用血球瑞氏染液按染血片的方法進(jìn)行染色(瑞氏染液和緩沖液1:1的比例染色)。待染色的制片自然干燥后，用萊卡相差顯微鏡在低倍鏡下整片觀察涂片，觀察異常細(xì)胞的分布情況，如有核細(xì)胞是否存在結(jié)構(gòu)形態(tài)的異常，重點(diǎn)觀察形態(tài)巨大的、成團(tuán)的、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)疏松的、形態(tài)異常的有核細(xì)胞，用油鏡辨認(rèn)。

2.結(jié)果

2.1 80例惡性積液腫瘤標(biāo)記物陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果 見表1和表2。

表1 80例惡性積液檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物陽(yáng)性率結(jié)果

表2 惡性積液與良性積液腫瘤標(biāo)志物水平比較

2.2 選取積液檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物結(jié)果正常及明顯增高的標(biāo)本共4例，與相差顯微鏡下圖譜及病理結(jié)果相互印證[5],見圖1、圖2、圖3和圖4。

注：標(biāo)本類型：胸腔積液。體液腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果：AFP 1.25ng/ml，CEA 2.02ng/ml,CA125 12.02U/ml，CA153 11.04u/ml，CA199 0.32U/ml,CA724 1.05U/ml,NSE 1.52ng/ml,CYFRA21-1 2.12ng/ml,SCC 0.34ng/ml，鏡下可見大量中性粒細(xì)胞，此外可見破碎的細(xì)胞，病理結(jié)果未見腫瘤細(xì)胞。出院診斷：肺部感染伴胸腔積液。圖1 體液腫瘤標(biāo)記物正常標(biāo)本的儀器及顯微鏡結(jié)果

注：標(biāo)本類型：胸腔積液。體液腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果：AFP 2.32ng/ml，CEA 4.32ng/ml,CA125 24.21U/ml，CA153 20.03U/ml，CA199 1.35U/ml,CA724 2.38U/ml,NSE 3.29ng/ml,CYFRA21-1 4.53ng/ml,SCC 1.02ng/ml，鏡下可見組織細(xì)胞和增生、變性的間皮細(xì)胞。病理結(jié)果：未見腫瘤細(xì)胞。出院診斷：肺部感染伴胸腔積液。圖2 體液腫瘤標(biāo)記物正常標(biāo)本顯微鏡結(jié)果

注：標(biāo)本種類：腹水。體液腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果：AFP 2.05ng/ml，CEA 10.32ng/ml,CA125 32.02U/ml，CA153 68.23U/ml，CA199 118.46U/ml,CA724 21.32U/ml,NSE 2.29ng/ml,CYFRA21-1 3.02ng/ml,SCC 0.35ng/ml，白細(xì)胞值較高，鏡下可見較多的腫瘤細(xì)胞。病理診斷：腺癌。臨床診斷：結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移。圖3 體液腫瘤標(biāo)記物異常標(biāo)本顯微鏡結(jié)果

注：標(biāo)本種類：胸腔積液。體液腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果：AFP 4.02ng/ml，CEA 96.25ng/ml,CA125 456.30U/ml，CA153 79.02U/ml，CA199 119.43U/ml,CA724 2.42U/ml,NSE 1.25ng/ml,CYFRA21-1 2.02ng/ml,SCC 0.65ng/ml，顯微鏡下見到較多的組織細(xì)胞、間皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞。病理診斷：腺癌。圖4 體液腫瘤標(biāo)記物異常標(biāo)本顯微鏡結(jié)果

3.討論

糖鏈抗原CA125是大分子的黏液糖蛋白，可在子宮內(nèi)膜、輸卵管的腫瘤中敏銳表達(dá)，其次在肺、胸及消化道等部位的腫瘤中表達(dá)[6，7]。CA125作為卵巢癌診斷和預(yù)后判斷的腫瘤標(biāo)志物，已廣泛應(yīng)用。非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原(CYFRA21-1)，由細(xì)胞角蛋白-19的兩個(gè)單克隆抗體組成，存在于腫瘤細(xì)胞單層和復(fù)層的上皮胞漿內(nèi)[8]。CYFRA21-1增高多見于癌性胸腔積液，在腹水中增高不明顯或不增高,CYFRA21-1對(duì)胸部腫瘤的診斷意義較大[9，10]。神經(jīng)特異烯醇化酶(NSE)主要分布在神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞，是烯醇化酶的r亞單位，是小細(xì)胞肺癌和神經(jīng)母細(xì)胞腫瘤特異性標(biāo)志物，在惡性胸腹水中具有較高的陽(yáng)性率。CEA作為傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物，因?yàn)樗膹V譜性，在多種腫瘤的診療判斷中仍然具有檢測(cè)價(jià)值，特別是胸腹水中CEA有較高的陽(yáng)性表達(dá)。本研究顯示CA199在惡性胸腹水中陽(yáng)性率為52.5%。在其他惡性腫瘤中也有一定的陽(yáng)性率，如乳腺癌、卵巢癌、肺癌等。某些消化道炎癥CA199也有不同程度的升高。糖鏈抗原CA724在疾病分期和判斷胃腸道癌癥、卵巢癌患者時(shí)可以作為良好的指標(biāo)。CA153是乳腺癌最重要的特異性標(biāo)志物，CA153動(dòng)態(tài)測(cè)定有助于乳腺癌治療后復(fù)發(fā)的早期發(fā)現(xiàn)。AFP可早于影像學(xué) 6～12月出現(xiàn)異常。病毒性肝炎、肝硬化絕大部分AFP<400ng/ml。本研究的數(shù)據(jù)顯示惡性積液的腫瘤標(biāo)記物水平結(jié)果明顯增高，因此，惡性積液的腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)有很好的應(yīng)用價(jià)值和意義。下一步的研究應(yīng)該對(duì)良惡性腫瘤患者的胸腹水和血清腫瘤標(biāo)記物同時(shí)篩查，結(jié)合體腔液細(xì)胞學(xué)強(qiáng)熒光參數(shù)檢測(cè)、病理細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，參考生化指標(biāo)(如PH、LDH、ADA等)進(jìn)行分析，快速、準(zhǔn)確地為臨床鑒別診斷提供依據(jù)[11]，必要時(shí)選擇生物芯片、基因檢測(cè)等方法輔助診斷。