脂聯(lián)素在前列腺癌組織中的表達及意義研究＊

唐柯南 程麗憲 嚴玲玲 翁海燕 黃夢婷 林誠鳳 何月 林榮臻 林清坪

前列腺癌男性高發(fā)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居男性惡性腫瘤的第二位。近年來，隨著我國居民生活方式的改變和老齡人口的增加，本病發(fā)病率呈逐年上升趨勢。肥胖是前列腺癌的高危因素之一，通過胰島素和胰島素樣生長因子1（IGF-1）相關通路、脂聯(lián)素和瘦素等脂肪因子、影響性激素合成利用等促進病情的發(fā)生發(fā)展[1]。脂聯(lián)素是脂肪細胞分泌的一種細胞因子，具有抗腫瘤作用，其表達水平與肥胖呈負相關關系[2]。流行病學研究顯示，前列腺癌組織中脂聯(lián)素表達明顯降低，且隨著組織學分級和Gleason評分升高而降低[3]。因此，低脂聯(lián)素血癥和脂聯(lián)素受體缺陷被認為與前列腺癌密切相關。本研究進一步分析脂聯(lián)素在前列腺癌組織中的表達及意義，現(xiàn)匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月-2020年6月在廈門醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院治療的60例前列腺癌患者的病理組織作為A組（高分化、中分化、低分化各20例），年齡41～84歲，平均（67.3±9.6）歲；選取同期60例前列腺增生患者的病理組織作為B組，年齡43～85歲，平均（67.1±9.4）歲；選取同期60例健康體檢者的前列腺組織作為C組，年齡40～85歲，平均（67.2±9.7）歲。所有A組患者均經(jīng)病理組織檢查確診為前列腺癌；B組和C組患者均經(jīng)前列腺B超、PSA和fPSA檢測等排除前列腺癌；排除合并其他惡性腫瘤，近期使用過二甲雙胍、抗雄藥物，合并非酒精性脂肪肝病、糖尿病、心腦血管疾病、嚴重尿路感染等。本研究患者均知情同意，醫(yī)院倫理委員會審批通過。對比三組一般資料差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

三組均進行病理組織脂聯(lián)素檢測。（1）試劑與儀器。兔抗人脂聯(lián)素抗體（Anti-Adi-ponectin）購自北京奧博森生物技術公司；兩步法免疫組織化學試劑盒、DBA顯色劑購自北京中杉金橋生物技術有限公司；IMAGE-proplus 5.1醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)。（2）試驗方法。脂聯(lián)素表達用免疫組化法檢測，制作4 μm厚連續(xù)切片石蠟標本，常規(guī)脫蠟至水，滴加3%H2O2液孵育5～10 min，阻斷內源性過氧化物酶，用0.01 mmol/L、pH=7.4的PBS沖洗3 min，共沖洗3次。枸櫞酸鹽緩沖液0.1 mmol/L修復組織中脂聯(lián)素，PBS沖洗3 min，共3次。滴加兔抗人Adiponec-tin多克隆抗體，37 ℃孵育2 h，PBS沖洗3 min，共3次。滴加二抗（鼠抗兔IgG/生物素），37 ℃溫箱孵育30 min，PBS沖洗3 min，共3次。分別滴加50～100 pl新鮮配制的DBA溶液，在室溫下，用光鏡DBA顯色10 min，蒸餾水充分沖洗。蘇木素復染，酒精梯度脫水、透明、中性樹膠封片[4]。（3）陰性對照。用0.01 mmol/L、pH=7.4的PBS液分別代替一抗、二抗用作每次染色的陰性對照。（4）結果判定。細胞質內有棕黃色顆粒，即判定為脂聯(lián)素陽性細胞，表達強度用IMAGE-proplus 5.1醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)組織光密度值測量程序測定，重新校正各平均光密度值[5]。

1.3 觀察指標

記錄三組間的脂聯(lián)素表達水平，記錄A組中高分化、中分化、低分化的脂聯(lián)素表達水平；分析脂聯(lián)素與BMI、Gleason 評分的相關性。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以（±s）表示，采用t/F檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，雙變量相關性分析采用Pearson和Spearman相關分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組間組織中脂聯(lián)素表達比較

A組脂聯(lián)素表達水平明顯低于B組和C組（P＜0.05），而A組中，高分化、中分化、低分化的脂聯(lián)素表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 三組間組織中脂聯(lián)素表達比較 （±s）

表1 三組間組織中脂聯(lián)素表達比較 （±s）

組別 脂聯(lián)素表達水平（平均光密度）A組 高分化（n=2 0） 0.2 0 8±0.0 3 2中分化（n=2 0） 0.1 9 2±0.0 2 3低分化（n=2 0） 0.1 9 0±0.0 2 8 F值 0.2 7 2 P值 ＞0.0 5 B組（n=6 0） 0.3 2 5±0.0 3 0 C組（n=6 0） 0.3 3 9±0.0 2 1 F值 2.8 4 5 P值 ＜0.0 5

2.2 不同BMI值及Gleason評分的脂聯(lián)素表達比較

BMI≥30 kg/m2的脂聯(lián)素表達水平明顯低于BMI在25～29 kg/m2及＜25 kg/m2者，Gleason評分在2～4分者脂聯(lián)素表達水平明顯高于Gleason評分在5～7分和8～10分者（P＜0.05），見表2。

表2 不同BMI值及Gleason評分脂聯(lián)素表達比較 （±s）

表2 不同BMI值及Gleason評分脂聯(lián)素表達比較 （±s）

組別 脂聯(lián)素表達水平B M I（n=6 0） ≥3 0 k g/m 2（n=2 0） 0.1 8 1±0.0 2 8 2 5～2 9 k g/m 2（n=2 0） 0.1 9 6±0.0 3 2＜2 5 k g/m 2（n=2 0） 0.2 5 1±0.0 2 7 F值 2.1 5 7 P值 ＜0.0 5 G l e a s o n評分（n=6 0） 2～4分（n=2 0） 0.2 1 7±0.0 2 6 5～7 分（n=2 0） 0.1 9 8±0.0 3 1 8～1 0 分（n=2 0） 0.1 8 5±0.0 2 4 F值 2.0 4 6 P值 ＜0.0 5

2.3 BMI值及Gleason評分與脂聯(lián)素表達的相關性分析

組織脂聯(lián)素的表達與BMI、Gleason評分呈負相關（r=-0.574，P＜0.001 ；r=-0.511，P＜0.001）。

3 討論

前列腺癌是威脅男性健康的主要惡性腫瘤之一，隨著我國人口老齡化、飲食結構的改變、診斷技術的提高等，前列腺癌的發(fā)病率和死亡率也明顯上升。流行病學研究顯示，肥胖、高BMI是前列腺癌的高危因素，與腫瘤細胞的侵襲和轉移密切相關[6]。肥胖或超重患者的前列腺癌風險較高，且前列腺癌的侵襲性、病理分期、死亡率與Gleason評分呈正相關。但肥胖與前列腺癌在分子水平上的關系尚未完全明確[7]。

脂肪組織可分泌多種細胞因子，通過內分泌作用調節(jié)機體組織功能。脂聯(lián)素是脂肪細胞合成分泌最多的一種細胞因子，可作用于機體靶器官，發(fā)揮抑制增殖、抗炎、胰島素增敏、抗動脈粥樣硬化、抑制腫瘤等多種功效[8]。在生理狀態(tài)下，血清脂聯(lián)素水平在0.5～30 μg/ml，而在肥胖、超重、胰島素抵抗、代謝綜合征等病理狀態(tài)下，血清脂聯(lián)素水平明顯降低[9-10]。前列腺癌的發(fā)生發(fā)展與機體內環(huán)境和局部微環(huán)境的變化密切相關，浸潤區(qū)的前列腺癌細胞可與微環(huán)境相互作用，導致癌細胞的遠處轉移。而血管形成是微環(huán)境改變的重要因素，脂聯(lián)素可通過VEGF-A達到抑制血管生成，阻礙癌細胞遠處轉移，這給脂聯(lián)素抗腫瘤提供了有力依據(jù)[11]。

本研究結果顯示，A組脂聯(lián)素水平明顯低于B組和C組（P＜0.05），而A組中，高分化、中分化、低分化的脂聯(lián)素水平相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；BMI≥30 kg/m2的脂聯(lián)素表達水平明顯低于BMI在25～29 kg/m2及＜25 kg/m2者，Gleason評分在2～4分者脂聯(lián)素表達水平明顯高于Gleason評分在5～7分和8～10分者（P＜0.05）；組織脂聯(lián)素表達與BMI、Gleason評分呈負相關（r=-0.574，P＜0.001；r=-0.511，P＜0.001）。進一步證實前列腺癌組織中的脂聯(lián)素表達明顯降低，而肥胖者脂聯(lián)素表達明顯下調或缺失與機體內分泌調節(jié)失衡有關。Gleason評分也與脂聯(lián)素表達有一定關聯(lián)，說明前列腺癌惡性程度越高，脂聯(lián)素表達越低，可作為臨床評估病情嚴重程度和預后的標志[12]。

綜上所述，脂聯(lián)素在前列腺癌組織中的表達明顯下降，與BMI及Gleason評分呈負相關，對腫瘤細胞的侵襲和轉移有一定抑制作用，可作為臨床診斷和治療前列腺癌的新途徑。