湖南豬血桃花色苷提取工藝優(yōu)化及抗氧化活性研究

楊 玉，陳為峰，袁 野，廖 瓊，鄧 文，徐 海，卜范文

（1.湖南省農(nóng)科院 園藝研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125；2.湖南省水果產(chǎn)業(yè)體系 長(zhǎng)沙試驗(yàn)站，湖南 長(zhǎng)沙 410125；3.國(guó)家農(nóng)業(yè)部華中地區(qū)果樹科學(xué)觀測(cè)站，湖南 長(zhǎng)沙 410125；4.長(zhǎng)沙時(shí)鮮水果工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410125；5.湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410125；6.湖南省農(nóng)科院 農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)和農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125）

【研究意義】桃是我國(guó)主栽水果之一，市場(chǎng)需求量大。豬血桃（Amygdalus persica）為薔薇科桃屬中型落葉小喬木，學(xué)名紅脆桃、血桃，屬中華血桃的一種，是我國(guó)湖南衡山的地理標(biāo)志保護(hù)農(nóng)產(chǎn)品，果肉色澤殷紅、甜脆爽口，深受消費(fèi)者喜愛[1]。近年來(lái)的研究表明，一些紅肉桃資源的果實(shí)抗氧化能力可與藍(lán)莓相媲美，使得富含花色苷的紅肉桃成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外功能性水果開發(fā)與研究的熱點(diǎn)[2-5]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】花色苷被普遍認(rèn)為是自然界中最重要的水溶性色素，也是許多水果、花卉和其他植物的顏色來(lái)源[6-8]?；ㄉ兆鳛橐环N天然色素，安全無(wú)毒，且具有清除自由基、抗氧化、抗腫瘤、抗炎、保護(hù)肝臟、預(yù)防糖尿病等多種生理功能，在一些功能性食品、化妝品和醫(yī)藥等領(lǐng)域已有應(yīng)用，并有著巨大的綜合利用潛力[9-15]。然而，花色苷由于自身化學(xué)結(jié)構(gòu)對(duì)光、溫度、pH 值等外界因素敏感，導(dǎo)致其穩(wěn)定性差，在提取和加工利用過程中很容易發(fā)生降解，而這也正是花色苷能否得到廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵[16-17]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，花色苷的提取方法有溶劑提取法、加壓溶劑萃取法、水溶液提取法超高壓輔助提取、微波輔助提取和超聲波輔助提取等[18]；在提取過程中，為了降低其降解速率，通常會(huì)加入一定濃度的鹽酸或甲酸[19]。水果果實(shí)中具有抗氧化能力的物質(zhì)主要為酚類化合物和花色苷，且二者含量呈正相關(guān)[20-21]。研究發(fā)現(xiàn)，桃富含花色苷等化學(xué)物質(zhì)[22]，其果實(shí)顏色取決于花色苷的種類和含量，且不同品種果肉的花色苷種類存在差異[23-24]。目前，有關(guān)豬血桃花色苷的組分含量尚有待明確，關(guān)于桃果實(shí)中花色苷的提取方法研究報(bào)道較少?！緮M解決的關(guān)鍵問題】研究以湖南衡山地方特色優(yōu)勢(shì)桃品種豬血桃為材料，采用超聲波輔助有機(jī)溶劑法提取花色苷，通過單因素和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)探索其適宜的提取工藝條件，并對(duì)提取的花色苷進(jìn)行體外抗氧化活性研究，旨在為進(jìn)一步促進(jìn)湖南地方特色品種資源的開發(fā)與利用提供技術(shù)支撐。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

材料：豬血桃，產(chǎn)地為湖南衡山；頤紅水蜜桃，產(chǎn)地為湖南芷江；紅肉M1001，產(chǎn)地為湖南長(zhǎng)沙；瀏陽(yáng)4 斤桃，產(chǎn)地為湖南長(zhǎng)沙。新鮮桃果實(shí)洗凈，切片，置于冷凍干燥機(jī)中避光干燥24 h。干燥去除水分后，粉碎機(jī)粉碎，避光置干燥皿中備用。

主要試劑：矢車菊素-3-O-葡萄糖苷，美國(guó)Sigma 公司；無(wú)水乙醇（分析純）、甲醇（分析純）、丙酮（分析純）、乙腈（分析純）、甲酸、乙酸、鹽酸、磷酸，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；三氟乙酸，美國(guó)Sigma 公司；1，1-二苯基-2-苦基肼、過硫酸鉀、2，2'-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸，Sigma-Aldrich（上海）貿(mào)易有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Thermo Savant 冷凍干燥機(jī)，諸城市博眾機(jī)械有限公司；高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，天津泰斯特儀器有限公司；AR2140 電子天平，奧豪斯國(guó)際貿(mào)易有限公司；超聲波清洗儀器，昆山美美超聲儀器有限公司；島津LC-20AT 液相色譜儀，日本Shimadzu 公司；UV-1800PC 紫外-可見分光光度計(jì)，上海奧析科學(xué)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 豬血桃花色苷的制備 稱取一定質(zhì)量的經(jīng)冷凍干燥的桃粉末，加入適量提取液，避光超聲提取，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔微膜濾過，平行制樣3次，備用。

1.3.2 花色苷HPLC 分析方法 色譜柱：ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；流動(dòng)相：A 0.2%磷酸水溶液，B 乙腈，梯度洗脫0～35 min，B 相5%～35%；二極管陣列檢測(cè)器（DAD）。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)，得知豬血桃中主要的花色苷為矢車菊素-3-O-葡萄糖苷，以該花色苷作為測(cè)定豬血桃中花色苷的標(biāo)準(zhǔn)品。精密稱取矢車菊素-3-O-葡萄糖苷（純度95%）對(duì)照品1.128 mg 置于50 mL 棕色量瓶中，以甲醇溶解，每1 mL 含0.022 6 mg 矢車菊素-3-O-葡萄糖苷。采用HPLC 液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，分別設(shè)置進(jìn)樣量為1，2，5，10，20 μL，以質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 豬血桃花色苷提取單因素試驗(yàn) 1）有機(jī)溶劑篩選。取4份1.0 g豬血桃粉末至100 mL具塞錐形瓶中，分別加入50 mL 60%乙醇、甲醇、丙酮、乙腈，用鹽酸調(diào)節(jié)pH 為1.5，在40 ℃下超聲提取30 min，測(cè)定不同提取溶劑下花色苷的含量。

2）酸種類篩選。取4份1.0 g豬血桃粉末至100 mL具塞錐形瓶中，各加入50 mL 60%乙醇溶液，分別用鹽酸、磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸調(diào)節(jié)pH 值至1.5，在40 ℃下超聲提取30 min，測(cè)定不同酸種類下花色苷的含量。

3）pH 對(duì)花色苷提取率的影響。取5 份1.0 g 豬血桃粉末至100 mL 具塞錐形瓶中，分別加入50 mL 60%乙醇，用鹽酸調(diào)節(jié)pH 分別為1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，在40 ℃下超聲提取30 min，測(cè)定不同pH 值下花色苷的含量。

4）乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)花色苷提取率的影響。取6 份1.0 g 豬血桃粉末至100 mL 具塞錐形瓶中，分別加入50 mL用鹽酸調(diào)節(jié)pH 值為1.5的不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇（0%，20%，40%，60%，80%，100%），在40 ℃下超聲提取30 min，測(cè)定不同乙醇體積分?jǐn)?shù)下花色苷的含量。

5）超聲時(shí)間對(duì)花色苷提取率的影響。取5 份1.0 g 豬血桃粉末至100 mL 具塞錐形瓶中，加入50 mL用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為1.5的60%乙醇，在40 ℃下分別超聲提取20，30，40，50，60 min，測(cè)定不同提取時(shí)長(zhǎng)下花色苷含量。

6）超聲溫度對(duì)花色苷提取率的影響。取5 份1.0 g 豬血桃粉末至100 mL 具塞錐形瓶中，加入50 mL用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為1.5的60%乙醇，分別在20，30，40，50，60 ℃下超聲提取30 min，測(cè)定不同提取溫度下花色苷的含量。并采用DPPH自由基清除試驗(yàn)對(duì)其花色苷的活性進(jìn)行測(cè)定。

7）料液比對(duì)花色苷提取率的影響。6 份1.0 g 豬血桃粉末至100 mL 具塞錐形瓶中，分別加入不同體積（10，25，50，75，100 mL）用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為1.5的60%乙醇，在40 ℃下超聲提取30 min，測(cè)定不同料液比條件下花色苷的含量。

1.3.5 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素測(cè)試的基礎(chǔ)上，響應(yīng)面測(cè)試采用Design-Expert 8.0.6.1 軟件設(shè)計(jì)。試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)的因素和水平Tab.1 Coded factors and levels in quadratic regression rotational combinational design

1.3.6 驗(yàn)證試驗(yàn) 利用上述方法得出的最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，重復(fù)5次。

1.3.7 不同品種桃花色苷含量測(cè)定 在最佳的提取工藝條件下，分別對(duì)4個(gè)不同品種桃的果皮、果實(shí)（果皮＋果肉）及果肉中花色苷含量進(jìn)行測(cè)定。

1.3.8 豬血桃花色苷體外抗氧化試驗(yàn) 按文獻(xiàn)的方法進(jìn)行DPPH 自由基清除能力的測(cè)定[25]；按文獻(xiàn)的方法進(jìn)行ABTS+自由基清除能力的測(cè)定[26]。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬血桃花色苷提取物HPLC分析

花色苷屬于類黃酮化合物，在280 nm 和520 nm處均有特征吸收峰[19]。由圖1可見，樣品提取液分別在280 nm 和517 nm 處有最大吸收峰，由此可推斷樣品中提取的色素為花色苷類物質(zhì)。如圖2 所示與標(biāo)準(zhǔn)品矢車菊素-3-O-葡萄糖苷比對(duì)，二者出峰時(shí)間一致并均有單一峰，故可推斷出豬血桃中所含的花色苷主要為矢車菊素-3-O-葡萄糖苷。

圖1 豬血桃花色苷提取物的紫外吸收光譜Fig.1 Ultraviolet absorption spectrum of anthocyanin extract from blood fleshed peach

圖2 HPLC液相色譜圖Fig.2 HPLC liquid chromatogram

2.2 豬血桃花色苷提取單因素試驗(yàn)

2.2.1 有機(jī)溶劑對(duì)花色苷提取效果的影響 在提取時(shí)間為30 min，料液比為1∶50，pH 值為1.5，有機(jī)溶劑體積為60%，溫度設(shè)定為40 ℃的條件下，探究有機(jī)溶劑種類對(duì)花色苷提取效果的影響，結(jié)果如圖3 所示。由圖3 可知，在4 組有機(jī)溶劑中，甲醇和乙醇對(duì)花色苷的溶出效果最好。由于甲醇具有毒性，所以確定乙醇為最佳提取溶劑。

圖3 有機(jī)溶劑對(duì)花色苷含量的影響（P=0.01）Fig.3 The effect of organic solvent on the content of anthocyanin（P=0.01）

2.2.2 酸種類對(duì)花色苷提取效果的影響 在提取時(shí)間為30 min，料液比為1∶50，乙醇體積為60%，溫度設(shè)定為40 ℃的條件下，用不同的酸將pH 值調(diào)為1.5，探究其對(duì)花色苷提取效果的影響，結(jié)果如圖4所示。由圖4 可看出，鹽酸對(duì)花色苷的提取效果最佳，磷酸其次，表明對(duì)該花色苷的提取效果無(wú)機(jī)酸大于有機(jī)酸。因此試驗(yàn)確定以鹽酸調(diào)節(jié)pH。

圖4 酸對(duì)花色苷含量的影響（P=0.01）Fig.4 The effect of acid on the content of anthocyanin（P=0.01）

2.2.3 pH 值對(duì)花色苷提取率的影響 在提取時(shí)間為30 min，料液比為1∶50，乙醇體積為60%，溫度設(shè)定為40 ℃的條件下，用鹽酸將pH 值分別調(diào)到1.5、2.0、2.5、3.0和3.5，探究pH 對(duì)花色苷提取效果的影響，結(jié)果如圖5所示。當(dāng)pH值為1.5的處理提取含量最高，表明酸可以防止花色苷的降解和提高花色苷的溶出率。所以確定以pH值1.5進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

圖5 pH對(duì)花色苷含量的影響（P=0.01）Fig.5 The effect of pH value on the content of anthocyanin（P=0.01）

2.2.4 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)花色苷提取率的影響 在提取時(shí)間為30 min，料液比為1∶50，pH值為1.5，溫度設(shè)定為40 ℃的條件下，分別用不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇提取花色苷，花色苷溶出率如圖6 所示，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到60%時(shí)花色苷的提取效果最好，此后隨著體積分?jǐn)?shù)的增大，花色苷的提取效率趨于平衡。這種情況可能是因?yàn)槭杠嚲账?3-O-葡萄糖苷極性較大，使用同樣具有較大極性的溶劑更利于C3G 溶出?？紤]到節(jié)約有機(jī)溶劑，單因素試驗(yàn)初步確定的最佳乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%。

圖6 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)花色苷含量的影響Fig.6 The effect of ethanol concentration on the content of anthocyanin

2.2.5 提取時(shí)長(zhǎng)對(duì)花色苷溶出率的影響 在料液比為1∶50，pH 值為1.5，乙醇體積為60%，溫度設(shè)定為40 ℃的條件下，探究不同提取時(shí)長(zhǎng)對(duì)花色苷溶出率的影響。結(jié)果如圖7 所示，隨著超聲時(shí)間延長(zhǎng)，提取率有增大趨勢(shì)，當(dāng)提取時(shí)間為50 min時(shí)達(dá)到最大（圖7）。當(dāng)提取時(shí)間超過50 min后得率降低。這可能與長(zhǎng)時(shí)間的提取，超聲產(chǎn)熱量增加，組織中大量細(xì)胞破裂和溶液中雜質(zhì)增多有關(guān)，最終使吸附部分花色苷含量下降。單因素試驗(yàn)結(jié)果篩選最佳提取時(shí)間為50 min。

圖7 提取時(shí)間對(duì)花色苷含量的影響Fig.7 The effect of time on the content of anthocyanin

2.2.6 提取溫度對(duì)花色苷提取效果的影響 在料液比為1∶50，pH 值為1.5，乙醇體積為60%，提取時(shí)間為30 min 的條件下，探究提取溫度對(duì)花色苷溶出率的影響。由圖8 和圖9 可知，在溫度60 ℃以下對(duì)花色苷的提取含量及其抗氧化活性幾乎沒有影響。而在不對(duì)超聲儀進(jìn)行溫度設(shè)置的情況下，超聲所產(chǎn)生的熱量很難使水浴溫度超過60 ℃，所以后續(xù)試驗(yàn)不對(duì)溫度進(jìn)行考察，只需控制溫度在60 ℃以下進(jìn)行即可。

圖8 提取溫度對(duì)花色苷含量的影響Fig.8 The effect of temperature on the content of anthocyanin

圖9 提取溫度對(duì)DPPH自由基清除能力的影響Fig.9 The effect of temperature on the DPPH·scavenging activity

2.2.7 料液比對(duì)花色苷溶出率的影響 在提取時(shí)間為30 min，pH值為1.5，乙醇體積為60%，溫度設(shè)定為40 ℃的條件下，探究料液比對(duì)花色苷溶出率的影響。圖10結(jié)果表明，隨著溶劑用量的增多，花色苷含量先增加后減少，表明一定量的溶劑用量有利于原料中花色苷的傳質(zhì)與擴(kuò)散，提升提取率。但溶劑太多造成浪費(fèi)，也不利于后續(xù)處理。因此，單因素試驗(yàn)下的最佳料液比確定為1∶50。

圖10 料液比對(duì)花色苷含量的影響Fig.10 The effect of material-solvent ratio on the content of anthocyanin

2.3 響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝試驗(yàn)結(jié)果

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)Box-Behnken 中心組合試驗(yàn)原理，提取溶劑為乙醇，鹽酸調(diào)節(jié)pH 至1.5，選擇時(shí)間、料液比和乙醇體積分?jǐn)?shù)3 個(gè)因素，并用響應(yīng)面法對(duì)提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。試驗(yàn)方案和結(jié)果見表2。

表2 響應(yīng)面分析方案及結(jié)果Tab.2 Response surface analysis and results

用Design-Expert 8.0.6 軟件對(duì)表2 的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，其方差分析結(jié)果見表3，并對(duì)響應(yīng)值與各個(gè)因素進(jìn)行回歸擬合，其擬合方程為：花色苷含量Y=1.74+0.080X1+0.096X2+0.28X3-0.023X1X2-0.063X1X3-。結(jié)果表明，回歸方程模型極顯著（P＜0.01），方程失擬項(xiàng)不顯著（P＞0.05），表明該模型適用。回歸系數(shù)R2=0.986 1＞0.9，表明該模型相關(guān)度良好。每項(xiàng)方差分析表明，X1、X2、對(duì)花色苷提取量有極顯著的影響。根據(jù)各影響因素標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)的大?。篨3＞X2＞X1，可知各因素對(duì)花色苷得率的影響由大到小依次為乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比和提取時(shí)間。在交互項(xiàng)對(duì)花色苷得率的影響中，X1X3也就是時(shí)間和乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)最終花色苷提取量有較大的影響。

表3 回歸模型方差分析Tab.3 Analysis of variances for the created regression model

根據(jù)建立的參數(shù)優(yōu)化分析模型（圖11），獲得最高花色苷提取量所需的參數(shù)是：pH 1.5、m（料）∶V（液）=1∶54.31、提取時(shí)間40.89 min、乙醇體積分?jǐn)?shù)78.61%，豬血桃提取量預(yù)測(cè)值為1.881 mg/g。為方便實(shí)際操作，確定最佳提取條件為：pH 1.5、m（料）∶V（液）=1∶55、提取時(shí)間41 min、提取溫度45 ℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)78%。

圖11 各因素交互作用的響應(yīng)及等高線圖Fig.11 Response surface and contour plots showing the interactive effects of variables on the extraction yield of anthocyanin

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

在pH 1.5、m（料）∶V（液）=1∶55、提取時(shí)間41 min、提取溫度45 ℃和乙醇體積分?jǐn)?shù)78%的條件下，重復(fù)試驗(yàn)5 次。由表4 可知，豬血桃花色苷的平均提取量為1.901 mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 值為2.158%，表明該提取工藝條件適用于豬血桃花色苷的提取。

表4 最佳提取工藝驗(yàn)證結(jié)果Tab.4 Optimum extraction process verification results

2.5 湖南4種地方紅肉桃品種花色苷含量比較

試驗(yàn)所選4 種紅肉桃品種所含花色苷均為C3G。從表5 可知，豬血桃的C3G 含量遠(yuǎn)高于其他3 個(gè)桃品種，且其他3 個(gè)桃品種花色苷主要集中在果皮，而豬血桃為果肉，表明豬血桃果肉更具營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值。

表5 不同品種桃不同部位C3G含量Tab.5 C3G content in different parts of different varieties of peach

2.6 豬血桃花色苷的抗氧化活性

2.6.1 對(duì)DPPH 自由基的清除能力 在所考察的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，樣品溶液清除DPPH·的能力均隨著質(zhì)量濃度的增加而增大，并呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系（圖12）。對(duì)豬血桃提取物清除DPPH·的效果與濃度進(jìn)行線性擬合，線性方程為：y=0.600 3x-6.19，R2=0.995 2。IC50為93.6 mg/mL，表明豬血桃花色苷對(duì)DPPH·具一定的清除能力。

圖12 DPPH自由基清除率Fig.12 DPPH·scavenging activity

2.6.2 對(duì)ABTS+自由基的清除能力 將豬血桃花色苷對(duì)ABTS+·的清除率與濃度進(jìn)行線性擬合，如圖13所示，其方程為y=1.087 8x+1.409 6，R2=0.999 0，根據(jù)方程計(jì)算其IC50為47.26 mg/mL，表明桃花色苷對(duì)ABTS+·具有一定的清除能力，可使具有高度氧化性的自由基還原，終止自由基的連鎖反應(yīng)，起到清除或抑制自由基的作用。

圖13 ABTS+自由基清除率Fig.13 ABTS+·scavenging activity

3 結(jié)論與討論

3.1 豬血桃花色苷主要成分鑒定及提取工藝的優(yōu)化

研究表明，花色苷的存在是使果肉呈現(xiàn)紅色的關(guān)鍵物質(zhì)[29]。趙玉等[5]檢測(cè)了48 份桃果實(shí)中所含的花色苷主要為矢車菊素-3-O-葡萄糖苷（C3G），但在烏黑雞肉桃、大果黑桃果肉中同時(shí)檢測(cè)到矢車菊-3-O-蕓香糖苷（C3R）。筆者研究結(jié)果表明豬血桃花色苷主要成分為矢車菊素-3-O-葡萄糖苷（C3G）。本文在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上選取pH 值、液料比、提取溫度和提取時(shí)間進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化，得到豬血桃花色苷最適宜的提取工藝為：pH 值1.5、m（料）∶V（液）=1∶55、提取時(shí)間41 min、提取溫度45 ℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)78%，平均提取量為1.901 mg/g（RSD=2.158%），與預(yù)測(cè)值1.881 mg/g相近。研究表明，溫度會(huì)影響C3G這類多酚羥基化合物結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，高溫可致其降解，筆者在提取豬血桃C3G時(shí)觀察到只要保持水浴溫度在60 ℃以下即可，這與前人對(duì)紅肉桃“天仙紅”花色苷提純工藝的研究一致[15]。經(jīng)過工藝優(yōu)化，豬血桃花色苷的提取最適時(shí)間明顯短于“天仙紅”，含量也相對(duì)較高。此外，pH 值也會(huì)影響酚類化合物C3G 分子結(jié)構(gòu)從而導(dǎo)致其色澤發(fā)生變化。楊梅花色苷種類也為C3G[27]，當(dāng)pH＜3 時(shí)，主要以2-苯基苯并吡喃陽(yáng)離子形式存在使提取液呈現(xiàn)明亮的紅色；當(dāng)pH值升高至4～5時(shí)，主要以醌型堿形式存在而使提取液逐漸變?yōu)樗{(lán)色；當(dāng)pH＞6時(shí)，C3G的碳環(huán)打開則以黃色的查爾酮形式存在[28]。豬血桃果實(shí)花色苷含量隨鹽酸pH 值的增大而減少，據(jù)此判定偏酸條件更有利于豬血桃花色苷穩(wěn)定性的保持。通過響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)同樣也證明pH 在1.5時(shí)更有助于提高豬血桃花色苷的溶出率。萃取溶劑的采選也是優(yōu)化提取工藝參數(shù)的重要步驟。以往的研究均利用甲醇作為萃取溶劑，但甲醇具有毒性；筆者的研究結(jié)果表明甲醇和乙醇對(duì)桃花色苷提取量均接近0.6 mg/g，溶出效果在4組有機(jī)試劑中最佳，因此可用乙醇替代甲醇作為溶劑進(jìn)行花青素提取。

3.2 豬血桃花色苷的抗氧化活性探究

利用優(yōu)化后的工藝提取比較了湖南4個(gè)地方品種桃果皮和果肉的花色苷，發(fā)現(xiàn)豬血桃的花色苷果肉大于果皮，并且果肉C3G含量在4個(gè)品種中最高，但其他3個(gè)桃品種花色苷果皮大于果肉，與前人對(duì)紅肉桃果肉中類胡蘿卜素、花青素含量低于果皮中類胡蘿卜素、花青素含量研究結(jié)果一致[30]。通過對(duì)DPPH·和ABTS＋·的清除試驗(yàn)表明，其對(duì)DPPH·清除作用的IC50為93.6 mg/mL，對(duì)ABTS＋·清除作用的IC50為47.26 mg/mL。研究顯示，紅肉桃果實(shí)抗氧化能力顯著高于白肉和黃肉桃，從抗氧化的角度分析紅肉桃資源更有開發(fā)利用的價(jià)值，且桃果實(shí)總酚對(duì)抗氧化能力的貢獻(xiàn)高于花色苷[2]。豬血桃中花色苷對(duì)DPPH·及ABTS+·存在明顯的清除效果，但其抗氧化的量效關(guān)系及作用機(jī)制尚不清楚，有待于進(jìn)一步探究。