前S1抗原、乙型肝炎病毒的脫氧核糖核酸及乙型肝炎五項(xiàng)檢驗(yàn)對(duì)乙型肝炎患者肝纖維化的診斷價(jià)值

程涵芬

漢川市中醫(yī)院檢驗(yàn)科 （湖北漢川 431600）

肝纖維化（Hepaticfibrosis，HF）是乙型肝炎（Chronic Hepatitis B，CHB）向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段，是一個(gè)發(fā)展變化的病理過程，故早期準(zhǔn)確診斷乙型肝炎患者HF發(fā)生情況，并及時(shí)進(jìn)行針對(duì)性治療，對(duì)抑制病情進(jìn)展尤為關(guān)鍵。肝組織病理學(xué)活檢是診斷HF的金標(biāo)準(zhǔn)，但其屬于有創(chuàng)性操作，臨床應(yīng)用具有局限性，因而需尋求準(zhǔn)確、高效、無創(chuàng)的診斷方案。有研究表明，乙型肝炎五項(xiàng)能有效判定乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）的感染情況，有效診斷乙型肝炎［1］；乙型肝炎病毒的脫氧核糖核酸（hepatitis B virus－deoxyribonucleic acid，HBV－DNA）可定量反映病毒復(fù)制及繁殖情況，有效反映乙型肝炎疾病進(jìn)展；前S1抗原是HBV外膜蛋白的主要成分，可影響病毒的感染及復(fù)制繁殖，反映乙型肝炎疾病進(jìn)展情況［2］。鑒于乙型肝炎五項(xiàng)、HBV－DNA、前S1抗原與乙型肝炎疾病發(fā)生及進(jìn)展的關(guān)系，推測乙型肝炎五項(xiàng)、HBV－DNA、前S1抗原或可診斷乙型肝炎患者HF情況。基于此，本研究旨在探討前S1抗原和HBV－DNA及乙型肝炎五項(xiàng)檢驗(yàn)對(duì)乙型肝炎患者HF的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年12月至2020年1月我院收治的110例乙型肝炎患者作為研究對(duì)象。其中男65例，女45例；年齡35～75歲，平均（50.66±5.32）歲；乙型肝炎病程5～15年，平均 （8.50±1.50）年；體質(zhì)量50～70 kg，平均（60.95±2.34）kg。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年更新版）》［3］中對(duì)乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；患者簽署研究知情同意書且配合研究；心、肺、腎功能正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他類型肝炎病毒感染；免疫功能異常；其他感染性疾病。

1.2 方法

1.2.1 血清樣本獲取

所有患者均在入院后抽取其空腹肘部靜脈血4～5 ml，置于含有枸櫞酸鈉的真空抗凝管1∶9進(jìn)行抗凝處理，使用上海利鑫堅(jiān)離心機(jī)有限公司提供的H－1600R型高速冷凍離心機(jī)，以3 200 r／min的速度離心處理10 min，分離出上層血清待檢。

1.2.2 乙型肝炎五項(xiàng)檢查

選擇美國雅培公司生產(chǎn)的試劑盒，采用化學(xué)發(fā)光法測定乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙型肝炎e抗體（hepatitis B virus e antibody，HBeAb）、乙型肝炎核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）水平。正常范圍，HBsAg為0～0.05 IU／ml，HBsAb為0～10 mIU／ml，HBeAg為0～0.5 PEIU／ml，HBeAb為0～0.2 PEIU／ml，HBcAb為0～0.9 PEIU／ml。

1.2.3 HBV－DNA檢查

使用上海市科華生物技術(shù)有限公司提供的試劑盒及美國Pekin Elemer公司提供的GeneAmp 5700定量檢測儀，以熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）法嚴(yán)格按照說明書操作測定HBV－DNA水平，正常范圍為＜1 000 IU／ml。

1.2.4 前S1抗原檢測

使用上海阿爾法生物技術(shù)有限公司提供的試劑盒及雷杜RT－6000酶標(biāo)儀，以免疫雙抗夾心法測定前S1抗原水平。

1.2.5 肝組織病理學(xué)活檢

在完成上述檢查后，實(shí)施肝組織病理學(xué)活檢，連續(xù)切片獲取組織檢查標(biāo)本，常規(guī)蘇木精－伊紅、網(wǎng)狀纖維染色后依據(jù)ISHAK組織學(xué)評(píng)分［3］判定HF程度，S0期無纖維；S1期匯管區(qū)纖維化擴(kuò)大，局限于竇周及小葉內(nèi)纖維化；S2期匯管區(qū)周圍纖維化，纖維間隔形成，小葉結(jié)構(gòu)保留；S3期有纖維間隔伴小葉結(jié)構(gòu)紊亂，無肝硬化；S4期有早期肝硬化。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

以肝組織病理學(xué)活檢結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，分析前S1抗原和HBV－DNA及乙型肝炎五項(xiàng)檢驗(yàn)對(duì)乙型肝炎患者HF的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用Shapiro－Wilk進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，繪制ROC曲線并計(jì)算曲線下面積（area under curve，AUC），AUC＞0.90表示診斷性能較高，0.71～0.90表示有一定的診斷性，0.50～0.70表示診斷性能較差，＜0.5表示無診斷價(jià)值，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝組織病理學(xué)活檢結(jié)果

經(jīng)肝組織病理學(xué)活檢確診，110例乙型肝炎患者中的未發(fā)生HF 35例，占31.82%，設(shè)為未發(fā)生組；發(fā)生HF 75例，占68.18%，設(shè)為發(fā)生組。

2.2 兩組乙型肝炎五項(xiàng)、HBV－DNA、前S1抗原情況比較

發(fā)生組HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原水平均高于未發(fā)生組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；兩組HBsAb及HBeAb水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組乙型肝炎五項(xiàng)、HBV－DNA、前S1抗原情況比較（±s）

表1 兩組乙型肝炎五項(xiàng)、HBV－DNA、前S1抗原情況比較（±s）

注：HBsAg為乙型肝炎表面抗原，HBsAb為乙型肝炎表面抗體，HBeAg為乙型肝炎e抗原，HBeAb為乙型肝炎e抗體，HBcAb為乙型肝炎核心抗體，HBV－DNA為乙型肝炎病毒的脫氧核糖核酸

組別例數(shù)HBsAg（IU／ml）HBsAb（mIU／ml）HBeAg（PEIU／ml）HBeAb（PEIU／ml ）75 50.67±5.65 8.62±0.96 5.93±1.34 0.15±0.03未發(fā)生組35 25.36±3.20 8.61±0.93 1.85±0.25 0.14±0.04 t發(fā)生組24.681 0.051 17.827 1.459 P ＜0.001 0.959＜0.001 0.147組別例數(shù)HBcAb（PEIU／ml）HBV－DNA（IU／ml）前S1抗原（ng／ml ）75 8.49±1.15 2 500.25±300.15 1.24±0.23未發(fā)生組35 5.36±0.95 1 500.98±200.12 0.78±0.05 t發(fā)生組14.015 17.904 11.677 P ＜0.001＜0.001＜0.001

2.3 HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原單獨(dú)及聯(lián)合診斷乙型肝炎患者HF的效能分析

將乙型肝炎患者HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原水平作為檢驗(yàn)變量，HF發(fā)生情況作為狀態(tài)變量（1＝發(fā)生，0＝未發(fā)生），繪制ROC曲線圖（圖1），結(jié)果顯示，HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原單獨(dú)及聯(lián)合診斷乙型肝炎患者HF的AUC均＞0.7，具有一定診斷價(jià)值，其中聯(lián)合診斷效能最好，見表2。

圖1 HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原單獨(dú)及聯(lián)合診斷乙型肝炎患者HF的ROC圖

3 討論

乙型肝炎病情遷移難愈，各種致病因子會(huì)破壞患者肝臟內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解的穩(wěn)態(tài)平衡，當(dāng)細(xì)胞外基質(zhì)大量形成并沉積在肝臟內(nèi)后會(huì)引起HF。HF持續(xù)進(jìn)展會(huì)導(dǎo)致正常肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞壞死和凋亡，使得肝實(shí)質(zhì)逐步被細(xì)胞外基質(zhì)形成的瘢痕組織取代，最終進(jìn)展為肝硬化、肝癌甚至是肝衰竭，增加患者的病死率。因此，及早明確乙型肝炎患者HF發(fā)生情況，及早實(shí)施抗纖維化治療意義重大。

有研究表明，HF的本質(zhì)是慢性肝病過程中可逆的肝組織損傷后機(jī)體整體參與的修復(fù)反應(yīng)，與HBV感染、復(fù)制及繁殖情況密切相關(guān)［4］。乙型肝炎五項(xiàng)是臨床診斷乙型肝炎的重要手段，可有效反映HBV的感染情況［5］；HBV－DNA是反映HBV復(fù)制及活動(dòng)狀態(tài)的敏感指標(biāo)［6］；前S1蛋白是反映體內(nèi)HBV復(fù)制繁殖能力、傳染性強(qiáng)弱的重要指標(biāo)［7］。因此，臨床或可通過前S1抗原、HBV－DNA及乙型肝炎五項(xiàng)檢查來輔助診斷乙型肝炎患者HF發(fā)生情況。本研究結(jié)果顯示，發(fā)生組HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原水平均高于未發(fā)生組，提示可利用HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原等指標(biāo)輔助診斷乙型肝炎患者HF發(fā)生情況。分析其原因?yàn)?，HBsAg是乙型肝炎病毒最外層包膜中的一種外殼蛋白，可以刺激體內(nèi)產(chǎn)生抗體，是感染HBV特異性標(biāo)志物；HBeAg來自病毒核心，是由基因組表達(dá)的蛋白加工后分泌到細(xì)胞外，HBeAg存在提示HBV在體內(nèi)高度活躍；HBcAb是機(jī)體感染HBV后在血液中最早出現(xiàn)的特異性抗體。伴隨著HBsAg、HBeAg、HBcAb的不斷升高，乙型肝炎病情可不斷進(jìn)展，進(jìn)而不斷損傷肝組織正常生理功能并引起肝組織結(jié)構(gòu)的異常改變，肝組織可出現(xiàn)過度修復(fù)反應(yīng)，增加HF發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。HBV－DNA是病毒的遺傳物質(zhì)，可定量反映病毒復(fù)制情況，其水平升高提示病毒處于不斷復(fù)制及異常活躍狀態(tài)，可不斷損傷肝組織功能與結(jié)構(gòu)，增加HF發(fā)生率。HBV主要通過黏附在前S1蛋白內(nèi)的肝細(xì)胞膜受體上進(jìn)入肝細(xì)胞，前S1蛋白水平升高提示HBV復(fù)制繁殖能力增強(qiáng)，可加劇肝功能受損程度，增加HF發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［8］。本研究運(yùn)用ROC進(jìn)一步深入探討發(fā)現(xiàn)，HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原聯(lián)合診斷乙型肝炎患者HF的效能最好，提示臨床可利用HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原來診斷乙型肝炎患者HF發(fā)生情況。通過聯(lián)合診斷可以全面反映HBV感染、復(fù)制及繁殖情況，可彌補(bǔ)單項(xiàng)診斷的不足，更加全面地對(duì)乙型肝炎患者HF進(jìn)行評(píng)估，提高診斷價(jià)值。

表2 HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV－DNA、前S1抗原單獨(dú)及聯(lián)合診斷乙型肝炎患者HF的效能分析

綜上所述，前S1抗原、HBV－DNA及乙型肝炎五項(xiàng)診斷乙型肝炎患者HF均有較高的價(jià)值，且聯(lián)合診斷的價(jià)值更高。