“補腎生髓成肝”治則下的地五養(yǎng)肝膠囊研究進展*

陳光亞 金姝娜 肖明中 宋成武△

1.湖北中醫(yī)藥大學藥學院 (湖北 武漢， 430061) 2.湖北中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院 3.湖北省中醫(yī)院肝病研究所

地五養(yǎng)肝膠囊是湖北省中醫(yī)院研制的院內制劑，由茵陳、姜黃、熟地黃、五味子及甘草5味中藥組成，體現(xiàn)了“開源截流”、“補瀉兼施”的配伍特點。具有抗炎保肝、解毒通絡、清熱利濕、補腎養(yǎng)肝以及調控肝再生的功效[1, 2]，臨床上主要用于治療多種慢性肝病，包括慢性肝炎、肝癌等。

“補腎生髓成肝”理論是繼承中醫(yī)“生機學說”，針對肝臟病“肝失生發(fā)”、“髓失生肝”病因病機的一種治療法則?！把a腎生髓成肝”通過補腎生精髓、骨髓和腦髓從而調控轉化生成肝，以維持或促進肝組織的發(fā)生發(fā)育和再生修復(即“肝主生發(fā)”、“髓生肝”)、防止肝再生紊亂機制(即“肝失生發(fā)”、“髓失生肝”)，以達到預防和治療肝病的目的[3-6]。

本文就“補腎生髓成肝”治則下的地五養(yǎng)肝膠囊的臨床應用、藥理作用研究以及所含主要藥物化學成分情況進行綜述，為進一步闡明地五養(yǎng)肝膠囊藥效物質基礎和作用機理、推廣其臨床使用奠定基礎。

1 臨床應用研究

地五養(yǎng)肝膠囊作為院內制劑應用于臨床，并且取得較好的療效，地五養(yǎng)肝膠囊相關臨床研究概況見表1。

表1 地五養(yǎng)肝膠囊相關臨床研究情況

1.1 HBeAg陰性慢性乙型肝炎 HBeAg(-)慢性乙型肝炎是臨床上常見的傳染病之一，此病病程時間長，具有反復性，大多數(shù)患者病情呈慢性進行性發(fā)展，隨著病情的進展，逐漸發(fā)展成為肝硬化或肝功能衰竭，嚴重者可能進展為原發(fā)性肝癌，是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題[7]。趙賓賓[8]在研究地五養(yǎng)肝膠囊聯(lián)合抗病毒藥物治療慢性乙型肝炎時發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合治療組能獲得更好的病毒學、生化學和組織學應答，證明地五養(yǎng)肝膠囊可以提高治療慢性乙型肝炎的臨床療效。但吳雨[9]在研究該問題時發(fā)現(xiàn)，當?shù)匚屦B(yǎng)肝膠囊聯(lián)合抗病毒藥物治療慢性乙型肝炎時，其病毒學和生化學應答與單獨使用地五養(yǎng)肝膠囊或抗病毒藥物時基本相似，而組織學應答比單獨抗病毒治療療效更好。推測這可能是由于使用的抗病毒藥物種類不同以及患者之間的個體差異而導致的結果有所差異。此外，張金榮[10]采用REACH-B和Ma肝癌預測模型研究地五養(yǎng)肝膠囊單用或聯(lián)合抗病毒藥物治療，結果顯示單獨服用地五養(yǎng)肝膠囊降低HBeAg(-)慢性乙型肝炎患者肝癌發(fā)生風險的作用與單獨使用抗病毒藥物、地五養(yǎng)肝膠囊聯(lián)合抗病毒藥物的作用相當，且均有一定降低HBeAg(-)慢性乙型肝炎患者肝癌發(fā)生風險的作用。

1.2 乙型肝炎肝硬化 乙型肝炎肝硬化是臨床常見的慢性肝病，是多種病因長期或反復作用形成的彌漫性肝損傷，若不能給予有效的治療，最終可能發(fā)展為肝癌，嚴重威脅患者的生活質量與健康。閔捷[11]采用地五養(yǎng)肝膠囊輔助常規(guī)西藥治療乙型肝炎肝硬化失代償期患者，與僅用常規(guī)西藥治療的對照組相比，地五養(yǎng)肝膠囊輔助治療組患者具有更高的治療總有效率，可有效提高血清PAB、Alb、CHE水平，改善臨床癥狀，促進機體恢復；此外，黃芬等[12]采用地五養(yǎng)肝膠囊與核酸類抗病毒藥物聯(lián)合使用治療乙型肝炎肝硬化，其結果同樣證明了“補腎生髓成肝”治則的地五養(yǎng)肝膠囊可明顯改善乙型肝炎肝硬化患者的臨床癥狀。

1.3 肝癌 肝癌是一種多見的消化道腫瘤，具有早期癥狀不明顯、復發(fā)率高等臨床特征，其治愈率低、死亡率高，嚴重威脅人們的生命健康。目前肝癌以綜合治療為主，其中中醫(yī)藥在肝癌的綜合治療方面發(fā)揮了一定的作用。劉皎皎等[13]發(fā)現(xiàn)肝癌患者在接受吉西他濱化療的同時使用地五養(yǎng)肝膠囊，可明顯提高MELD評分和生存率，降低血清PDGF水平與AFP、CEA水平，減少不良反應。目前，已經構建“補腎生髓成肝”的肝癌第三級預防方案，而基于“補腎生髓成肝”理論的地五養(yǎng)肝膠囊更是被證明在治療肝癌患者方面療效顯著，可通過改善患者的肝再生微環(huán)境從而有效改善患者肝功能，提高患者生存率[13-16]。

2 基于“補腎生髓成肝”治則的地五養(yǎng)肝膠囊的動物模型實驗研究

以“補腎生髓成肝”為治則的地五養(yǎng)肝膠囊在防治肝臟疾病過程中，前期多項研究顯示可能涉及下丘腦-垂體-肝軸、EMT/MET平衡、Ras/Raf/Mek/Erk以及JAK/STAT 4條機制通路。通過補腎，增強腎臟功能，從而影響骨髓干細胞增殖分化及遷移，改善肝臟的結構與功能，起到防治各種肝病的作用?；凇把a腎生髓成肝”治則地五養(yǎng)肝膠囊作用機制概況見圖1，相關的動物實驗研究情況見表2。

表2 地五養(yǎng)肝膠囊相關動物模型實驗研究概況

圖1 基于“補腎生髓成肝”治則地五養(yǎng)肝膠囊作用機制概況

2.1 四氯化碳誘導肝纖維化模型 宋麗紅等[17]發(fā)現(xiàn)在四氯化碳誘導產生的肝纖維化大鼠體內存在EMT/MET失衡的“髓失生肝”的病因，施以地五養(yǎng)肝膠囊治療后發(fā)現(xiàn)，大鼠在肝纖維化過程中的EMT受到一定程度的抑制，促進了MET的發(fā)生，使肝纖維化的病程進展得到延緩，因此推測調節(jié)EMT/MET失衡是地五養(yǎng)肝膠囊治療肝纖維化的作用機制之一。在此基礎上，程思思等[18]進一步研究了纖維化大鼠體內EMT/MET相關基因及蛋白質的表達情況，從分子層面證實了在肝纖維化大鼠體內確實存在EMT/MET失衡機制，且地五養(yǎng)肝膠囊可通過調控EMT/MET失衡，即抑制EMT促進MET，減輕肝纖維化病變。

另有研究表明，地五養(yǎng)肝膠囊對四氯化碳誘導的肝纖維化大鼠體內的肝臟Hedgehog(Hh)信號通路有抑制作用，而Hh信號通路又與EMT和肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關。這也是地五養(yǎng)肝膠囊減輕肝組織損傷和抗纖維化效應的作用機制之一[19]。

EMT/MET一直被認為是多細胞生物胚胎發(fā)育和成體組織再生修復的基本機制，EMT參與包括肝臟在內的多種組織器官纖維化的發(fā)生發(fā)展。在癌細胞中，EMT會受到來自腫瘤微環(huán)境的細胞外刺激的異常調節(jié)[20]，由于EMT的發(fā)生，細胞表現(xiàn)為極性喪失，黏附能力降低，從而導致遷移能力增強。以“補腎生髓成肝”為治療法則的地五養(yǎng)肝膠囊，能夠調節(jié)細胞所處微環(huán)境，抑制EMT發(fā)生，進而起到防治肝癌的作用。

2.2 肝腎精虛/MSG-肝再生模型 肝腎精虛/MSG-肝再生-大鼠模型是一個病證結合的動物模型，能較好的揭示“髓生肝”的科學內涵[21]。宋麗紅、林立生等[21, 22]通過研究地五養(yǎng)肝膠囊對肝腎精虛/MSG-肝再生-大鼠肝再生的影響發(fā)現(xiàn)，地五養(yǎng)肝膠囊可一定程度地改善該模型大鼠的肝再生紊亂，早期可抑制肝再生的異?？哼M，而中晚期則可在一定程度上改善被抑制的肝再生功能，同時，骨髓中造血祖/干細胞表面的CD34/CD45、再生肝組織CD34蛋白表達增強，說明在嚴重肝組織損傷后，骨髓中的造血祖/干細胞活化增殖，并遷移至損傷部位，證明地五養(yǎng)肝膠囊具有促進骨髓干細胞增殖的功能，闡述了“補腎生髓成肝”治療法則中關于“生髓”這一理論。

2.3 2-AAF/PH肝癌前病變模型及Solt-Farber肝癌模型 趙賓賓[23]建立2-AAF/PH大鼠肝癌前病變模型，觀察地五養(yǎng)肝膠囊對正常肝再生和肝癌前病變的作用并探討其作用機制，結果顯示地五養(yǎng)肝膠囊組肝臟結構紊亂及膽管增生和纖維增生程度均低于模型組，且該組肝組織結節(jié)數(shù)在術后第8～22天內均低于模型組，說明地五養(yǎng)肝膠囊可以抑制2-AAF/PH模型大鼠肝癌前病變，并推測地五養(yǎng)肝膠囊通過改善肝再生微環(huán)境抑制肝癌前病變。

有學者通過研究地五養(yǎng)肝膠囊對Solt-Farber肝癌模型的影響發(fā)現(xiàn)，經地五養(yǎng)肝膠囊治療后，大鼠肝組織中與肝癌的發(fā)生和發(fā)展、侵襲和轉移關系密切的481個mRNA表達下調，236個mRNA表達上調，從基因水平上證實了地五養(yǎng)肝膠囊具有多層次、多靶點、多途徑發(fā)揮防治肝癌的療效優(yōu)勢[24]。同時，葉之華等[25, 26]的研究進一步論證了在Solt-Farber模型誘導的肝癌大鼠體內Ras/Raf/Mek/Erk信號傳導通路和JAK/STAT信號通路隨著肝癌的發(fā)生發(fā)展而逐漸激活，Ras/Raf/Mek/Erk信號傳導通路是一條可被廣泛激活的有絲分裂原活化蛋白激酶通路，該通路的持續(xù)激活，通過抑制細胞凋亡、促進細胞耐藥基因的表達，最終可導致肝細胞的異常增殖及腫瘤形成[27]；在正常生理情況下，JAK/STAT信號通路對細胞的生長分化、組織器官形成等方面起著決定性作用，其激活是短暫且迅速的，而持續(xù)激活的JAK/STAT信號通路會講解細胞外基質，增強細胞的運動能力從而提高腫瘤侵襲和轉移能力[28]。經地五養(yǎng)肝膠囊治療后，與該信號傳導通路相關的RaF-1、Mek1、Erk1、VEGF、JAK2、STAT3和STAT5這7種mRNA及對應蛋白質的表達降低，證明以“補腎生髓成肝”為治療法則的地五養(yǎng)肝膠囊可以抑制Ras/Raf/Mek/Erk和JAK/STAT信號通路在肝癌大鼠體內的過度激活，起到防治肝癌的作用。

3 地五養(yǎng)肝膠囊主要藥物的化學成分研究

地五養(yǎng)肝膠囊由五味中藥組成，其中茵陳在本方中作為君藥，主要發(fā)揮其清利濕熱、保肝退黃之功效。本文總結歸納了茵陳中已報道的89個化合物，主要為黃酮類化合物(16個)、有機酸類化合物(15個)、香豆素類化合物(17個)、烯炔類化合物(20個)以及其他類化合物(21個)；姜黃作為臣藥，主要發(fā)揮活血化瘀、溫經通絡之功效。姜黃中目前已報道的成分共269個，主要為姜黃素類成分(197個)和揮發(fā)油類成分(72個)；五味子與地黃配伍使用，以增強其補肝腎作用，其化學成分主要為木脂素、三萜類、揮發(fā)油等。五味子中化合物共246個，其中木脂素類化合物101個、三萜類化合物97個、單萜類化合物9和、倍半萜類21個以及其他類化合物18個；熟地黃中已報道的83個化合物，主要為環(huán)烯醚萜類化合物(41個)、紫羅蘭酮類化合物(22個)以及其他類化合物(19個)；甘草的化學成分主要為黃酮類和三萜類化合物，總結了241個已報道的成分，其中黃酮類化合物209個，三萜類化合物26個以及其他類化合物6個。

地五養(yǎng)肝膠囊組方中各味中藥中特征性代表成分結構見圖2。地五養(yǎng)肝膠囊組方中各味中藥物質基礎成分研究現(xiàn)況見表3。

圖2 地五養(yǎng)肝膠囊中各味中藥的特征代表性成分結構骨架

表3 地五養(yǎng)肝膠囊組方中各味中藥物質基礎成分研究情況 n(%)

4 小結

目前，地五養(yǎng)肝膠囊的藥理作用研究主要集中在動物實驗及部分臨床應用案例，組方中各單味藥的化學成分雖有大量研究，但鮮有涉及該復方膠囊的藥效物質基礎研究。本文主要歸納總結了地五養(yǎng)肝膠囊的臨床、動物實驗的藥理研究進展以及膠囊中所含茵陳、甘草、姜黃、五味子和熟地黃五味中藥的主要物質基礎成分，為今后更深入探索地五養(yǎng)肝膠囊的藥效物質基礎奠定了基礎。同時，“補腎生髓成肝”防治肝病所涉及的幾種現(xiàn)代藥理學機理通路是否與地五養(yǎng)肝膠囊中某一種或多種成分存在關聯(lián)性，仍有待進一步研究。