青貯劑對再生稻頭季全株青貯品質(zhì)和體外瘤胃發(fā)酵特性的影響

鄒詩雨 ，陳思葵 ，唐啟源 ，陳東 *，陳元偉 ，鄧攀 ，黃胥萊 ，李付強(qiáng)

（1. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長沙410128；2. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，湖南長沙410128；3. 湖南天華實(shí)業(yè)有限公司，湖南婁底417000）

近年來，隨著我國草食畜牧產(chǎn)品產(chǎn)量的持續(xù)增長和養(yǎng)殖規(guī)模化的持續(xù)推進(jìn)，牧場對于優(yōu)質(zhì)粗飼料和蛋白質(zhì)飼料的依賴程度越來越高。但是，由于我國飼草種植成本較高，造成了優(yōu)質(zhì)粗飼料和蛋白質(zhì)飼料的短缺以及飼養(yǎng)成本高等問題，制約了我國畜牧業(yè)的發(fā)展。水稻（Oryza sativa）是世界上主要的糧食作物之一，而再生稻作為水稻種植的一種模式，具有種植成本低、經(jīng)濟(jì)效益高的特點(diǎn)。據(jù)各地?zé)崃抠Y源測算，中國南方稻區(qū)適宜發(fā)展再生稻的耕地面積約335 萬hm2，而實(shí)際種植面積只有40 萬hm2，由于再生稻必須在溫、光、水條件適宜的地區(qū)種植才能保證其穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)，且對品種要求嚴(yán)格，再生稻作為糧食作物的應(yīng)用受到了限制，但是作為飼料原料的應(yīng)用仍具有廣闊的發(fā)展前景［1］。本研究通過提前將再生稻頭季進(jìn)行全株刈割，并在添加不同青貯劑后進(jìn)行青貯，延長其再生季生育期，在大幅提升再生季稻谷產(chǎn)量的同時(shí)，為草食動(dòng)物提供穩(wěn)定且質(zhì)量保障的青貯飼料。

添加青貯劑能有效提高青貯發(fā)酵品質(zhì)，某些添加劑（乳酸菌、纖維素酶等）還能提高青貯飼料的營養(yǎng)價(jià)值［2］。植物乳桿菌可以在厭氧發(fā)酵的起始階段，通過高效利用飼料作物中的可溶性碳水化合物快速發(fā)酵產(chǎn)生乳酸和降低pH，從而有效地改善青貯飼料的品質(zhì)［3］。糞腸球菌可以加快產(chǎn)生乳酸，使pH 值迅速降低至5.0 以下，有利于乳酸菌的發(fā)酵［4］。纖維素酶和木聚糖酶可以降解植物細(xì)胞壁，將纖維素和木聚糖分解為可溶性碳水化合物，為乳酸菌的繁殖提供更多的底物，同時(shí)也能提高青貯飼料的消化率［2］。目前青貯劑對青貯品質(zhì)和體外瘤胃發(fā)酵特性的影響主要集中在全株玉米和苜蓿等［5?6］方面，且再生稻頭季全株青貯發(fā)展起步較晚，研究主要集中在稻秸的青貯劑選擇［7］、品種特性［8］和混合青貯技術(shù)［9］上，添加不同青貯劑對再生稻頭季全株青貯品質(zhì)和體外瘤胃發(fā)酵特性的影響研究還鮮見報(bào)道。本研究以再生稻頭季全株為研究對象，評價(jià)不同青貯劑對再生稻頭季全株的青貯品質(zhì)和青貯后體外瘤胃發(fā)酵的影響，為商品化再生稻頭季全株青貯飼料的開發(fā)和利用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 青貯試驗(yàn)

1.1.1 青貯調(diào)制 2018 年8 月于益陽市大通湖區(qū)千山紅鎮(zhèn)大西港村進(jìn)行青貯試驗(yàn)。青貯原料為2018 年大通湖區(qū)宏碩生態(tài)農(nóng)業(yè)農(nóng)機(jī)合作社試驗(yàn)地種植的水稻（湘兩優(yōu)900），刈割時(shí)期為齊穗后25 d、留茬高度為20 cm，切碎至2～3 cm 待用。青貯原料營養(yǎng)水平見表1。

表1 青貯原料營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Nutrient levels of silage raw materials（air-dry basis，%）

試驗(yàn)所用植物乳桿菌、糞腸球菌、纖維素酶、木聚糖酶和半纖維素酶為湖南普菲克生物科技有限公司贈(zèng)送，采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，青貯劑處理組分別為1 組（N1）：植物乳桿菌（60%）+纖維素酶（30%）+木聚糖酶（10%）；2 組（N2）：植物乳桿菌（70%）+糞腸球菌（20%）+纖維素酶（5%）+半纖維素酶（5%）；3 組（N3）：植物乳桿菌（30%）+糞腸球菌（60%）+纖維素酶（5%）+半纖維素酶（5%）；對照組添加等量的水（CK）。將不同青貯劑（添加量為500 g·t?1FW）溶液分別均勻地噴灑在混合青貯料上并充分混勻，分別裝入聚乙烯袋（200 mm×300 mm）中，用真空包裝機(jī)（諾豐DZ400/2D）抽真空模擬裹包青貯，在室溫條件下（25 ℃左右）貯藏45 d 后進(jìn)行開包取樣，每組6 個(gè)重復(fù)。

1.1.2 青貯后營養(yǎng)物質(zhì)評定 各組逐一開啟青貯袋并混勻后，按“四分法”［10］得到分析樣品，每個(gè)重復(fù)600 g 左右，然后進(jìn)行粉碎，一部分過0.425 mm 孔篩，進(jìn)行營養(yǎng)物質(zhì)成分干物質(zhì)（dry matter，DM）、粗蛋白質(zhì)（crude protein，CP）、粗脂肪（ether extract，EE）、中性洗滌纖維（neutral detergent fiber，NDF）、酸性洗滌纖維（acid detergent fiber，ADF）、可溶性碳水化合物（water soluble carbohydrate，WSC）含量的檢測；另一部分過0.250 mm孔篩，于清潔干燥處保存，之后進(jìn)行體外瘤胃發(fā)酵批次培養(yǎng)。

1.1.3 青貯發(fā)酵特性評定 青貯袋開啟后，各組按“四分法”［10］稱取20 g 青貯飼料，加入180 mL 去離子水，用榨汁機(jī)（九陽JYL-C012 型多功能攪拌機(jī)）榨汁1 min，勻質(zhì)液用4 層紗布過濾，測定pH。濾液用于測定氨態(tài)氮（ammoniacal nitrogen，NH3-N）和揮發(fā)性脂肪酸（volatile fatty acid，VFA）含量。

1.2 體外發(fā)酵試驗(yàn)

1.2.1 供體動(dòng)物飼養(yǎng)管理 2018 年12 月于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院以再生稻頭季全株青貯樣品進(jìn)行體外發(fā)酵試驗(yàn)。選擇3 只安裝永久性瘤胃瘺管、體況良好、體重［（25.0±2.0）kg］接近的成年湘東黑山羊羯羊作為體外瘤胃液供體動(dòng)物，每日營養(yǎng)需要參考《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 816-2004）［12］1.3 倍維持需要設(shè)計(jì)，配制精粗比為40∶60 的飼糧。精料組成（風(fēng)干基礎(chǔ)）為：玉米47.00%，豆粕24.00%，麩皮22.00%，食鹽0.77%，石粉2.23%，預(yù)混料4.00%。粗料為玉米秸稈，鍘短，長度2～3 cm；精料經(jīng)2.5 mm 篩粉碎。山羊自由飲水，單籠飼養(yǎng)，實(shí)行限飼，采食量設(shè)計(jì)為風(fēng)干樣500 g·d?1，每天08：00 和16：00 各等量飼喂1 次。預(yù)試期調(diào)整山羊采食量，確保試驗(yàn)期能完全采食。

1.2.2 人工瘤胃緩沖液與培養(yǎng)液配制 人工瘤胃緩沖液參照Menke 等［13］的方法進(jìn)行配制。取520.2 mL 蒸餾水、0.1 mL 微量元素溶液、208.1 mL 緩沖溶液、208.1 mL 常量元素溶液和1.0 mL 刃天青溶液，于具塞玻璃瓶中，持續(xù)充入CO2氣體，置于恒溫水浴中預(yù)熱至39.5 ℃待用。使用前加入62.4 mL 還原劑溶液，并繼續(xù)充入CO2氣體，直至緩沖液從藍(lán)色轉(zhuǎn)變紅色，再變?yōu)榻鼰o色即可。試驗(yàn)當(dāng)天晨飼前采集供體羊的瘤胃液1000 mL，置于預(yù)先通有CO2的保溫瓶中，立即蓋嚴(yán)瓶口，迅速帶回實(shí)驗(yàn)室。將供體羊的瘤胃液混合均勻后經(jīng)4 層紗布擠壓過濾于接收瓶中，置于39.5 ℃水浴中保存，并持續(xù)充入CO2以確保瘤胃液處于厭氧環(huán)境。以體積比1∶4 將瘤胃液和已預(yù)熱至39 ℃的人工瘤胃緩沖液混合均勻制成培養(yǎng)液。

1.2.3 體外發(fā)酵操作 采用 Menke 等［13］體外產(chǎn)氣法，分別稱取 N1、N2、N3和 CK 組的樣品各 0.6 g 放入 200 mL發(fā)酵瓶中，并將其置入39.5 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)預(yù)熱30～60 min。取50 mL 培養(yǎng)液厭氧分裝至200 mL 發(fā)酵瓶中（邊操作邊通入CO2），發(fā)酵瓶用橡膠塞和鋁蓋封口后，在（39.5±0.5）℃的水浴搖床中體外發(fā)酵24 h，每個(gè)樣品設(shè)6個(gè)重復(fù)，同時(shí)做空白試驗(yàn)。發(fā)酵過程中，用具有1 mL 分度的100 mL 具塞注射器裝體外產(chǎn)氣管（Fortuna?，德國產(chǎn)）記錄培養(yǎng)3、6、9、12 和24 h 的產(chǎn)氣體積。在24 h 體外發(fā)酵結(jié)束后，迅速將發(fā)酵瓶放置在碎冰中終止發(fā)酵，用已編號并65 ℃烘干稱重的尼龍布（50 μm）過濾，再經(jīng)蒸餾水沖洗發(fā)酵瓶數(shù)次直至干凈，確保發(fā)酵瓶內(nèi)無殘留物。待濾液置于接收瓶后，將尼龍布及濾渣小心無損地轉(zhuǎn)移到烘箱中65 ℃烘干48 h 至恒重。

1.2.4 體外產(chǎn)氣量與產(chǎn)氣參數(shù)的計(jì)算

式中：GPt為樣品在t時(shí)刻的產(chǎn)氣量（mL）；Vt為樣品發(fā)酵t小時(shí)后，玻璃管刻度讀數(shù)（mL）；V0為樣品在開始培養(yǎng)時(shí)的玻璃管刻度讀數(shù)（mL）；W為樣品干物質(zhì)重量（mg）；GP空白為空白對照的產(chǎn)氣量。

采用Φrskov 等［14］提出的數(shù)學(xué)模型對0～24 h 的產(chǎn)氣規(guī)律進(jìn)行擬合：

式中：GP為t時(shí)刻產(chǎn)氣量；a為快速降解部分的產(chǎn)氣量（mL）；b為慢速降解部分的產(chǎn)氣量（mL）；c為慢速降解部分的產(chǎn)氣速率（%·h?1）；a+b為潛在產(chǎn)氣量（理論總產(chǎn)氣量）（mL）；t為發(fā)酵時(shí)間（h）。

1.2.5 體外瘤胃發(fā)酵特性 發(fā)酵24 h 后迅速采用pH 計(jì)（UB-7 型；Denver Instrument 公司，美國）對每個(gè)發(fā)酵瓶中的發(fā)酵液進(jìn)行pH 測定，并將發(fā)酵液分裝到5 mL 離心管中，?20 ℃保存，測定其VFA 和NH3-N 的含量。

1.2.6 體外降解特性評定 將裝有濾渣的尼龍布反復(fù)用水洗滌后，晾干，105 ℃烘4 h 后稱重，測定其DM、CP、NDF 和ADF 含量，按以下公式計(jì)算體外瘤胃發(fā)酵底物的DM 降解率和營養(yǎng)物質(zhì)瘤胃降解率：

DM降解率=[(放入發(fā)酵瓶前底物重?終止發(fā)酵后殘留底物重)/放入發(fā)酵瓶前底物重]×100%

某營養(yǎng)物質(zhì)的降解率=［（發(fā)酵前該營養(yǎng)物質(zhì)的含量?發(fā)酵后該營養(yǎng)物質(zhì)的含量）/發(fā)酵前該營養(yǎng)物質(zhì)的含量］×100%

飼料樣品在體外發(fā)酵24 h 的產(chǎn)氣量與綿羊體內(nèi)有機(jī)質(zhì)（organic matter，OM）降解率之間呈顯著的正相關(guān)［13］，體外OM 降解率公式為：

式中：GP（gas production）為 24 h 產(chǎn)氣量；CP 為粗蛋白質(zhì)含量。

1.3 指標(biāo)測定方法

DM、CP 或總氮（TN）、NDF、ADF 及 EE 的測定分別按 GB/T 6435-2006［15］、GB/T 24318-2009［16］、GB/T 20806-2006［17］、NY/T 1459-2007［18］及 GB/T 6433-2006［19］的 方法進(jìn)行，參 考 Zahiroddini 等［20］的方法 測 定 WSC 含量，總能（gross energy，GE）的測定采用氧彈燃燒法進(jìn)行。用 Spectrum 公司 SI400 型 pH 計(jì)測定 pH［21］。通過裝有檢測器和HP-INNOwax（30.0 m×320 μm×0.5 μm，Catalog No：19091N-213）毛細(xì)管色譜柱的氣相色譜儀（GC-2010；Shimadzu Corporation，日本）測定 VFA 含量［22］，主要測定乙酸、丙酸、丁酸、異戊酸和正戊酸 5 種 VFA 含量。采用T/CAAA 003-2018［23］中的苯酚?次氯酸鈉比色法測定濾液NH3-N 含量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010 整理后，利用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 青貯劑對再生稻頭季全株?duì)I養(yǎng)物質(zhì)的影響

如表 2 所示，再生稻頭季全株青貯在添加 N1、N2和 N3組青貯劑后，CP、EE 和 WSC 含量無顯著差異（P＞0.05）。N1、N2和 N3組的 GE 均顯著高于 CK 組（P＜0.05），且 N1、N2和 N3組之間無顯著差異（P＞0.05）。N1、N2和N3組的 NDF 含量極顯著低于 CK 組（P＜0.01），且 N2組極顯著低于 N1和 N3組（P＜0.01），N1和 N3組之間無顯著差異（P＞0.05）。N1、N2和 N3組的 ADF 含量均極顯著低于 CK 組（P＜0.01），且 N1、N2和 N3組之間無顯著差異（P＞0.05）。N1、N2和 N3組的 TDN 含量 極顯著高于 CK 組（P＜0.01），且 N1、N2和 N3組 之間無 顯著差異（P＞0.05）。

表2 青貯劑對再生稻頭季全株青貯營養(yǎng)物質(zhì)含量的影響（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 2 Effects of silage additives on nutrients of first season ratoon rice whole silage（air-dry basis）

2.2 青貯劑對再生稻頭季全株青貯品質(zhì)的影響

如表 3 所示，N1、N2和 N3組的乙酸含量顯著高于 CK 組（P＜0.05），且 N1、N2和 N3組之間無顯著差異（P＞0.05）。N1、N2和 N3組的 NH3-N/TN 顯著低于 CK 組（P＜0.05），且N1、N2和 N3組之間無顯著差異（P＞0.05）。

表3 青貯劑對再生稻頭季全株青貯品質(zhì)的影響Table 3 Effects of silage additives on quality of first season ratoon rice whole silage

2.3 青貯劑對再生稻頭季全株體外發(fā)酵24 h 累積產(chǎn)氣量和體外產(chǎn)氣參數(shù)的影響

如表 4 所示，N2組的 24 h 累積產(chǎn)氣量極顯著高于 N1、N3和 CK 組（P＜0.01），且 N1、N3和 CK 組之間無顯著差異（P＞0.05）。N2組的快速降解部分的產(chǎn)氣量極顯著高于 N1、N3和 CK 組（P＜0.01），且 N1、N3和 CK 組之間無顯著差異（P＞0.05）。N2組的潛在產(chǎn)氣量極顯著高于 N1、N3和 CK 組（P＜0.01），且 N1組極顯著高于 CK 組（P＜0.01）。

表4 青貯劑對再生稻頭季全株青貯24 h 累積產(chǎn)氣量和體外產(chǎn)氣參數(shù)的影響Table 4 Effects of silage additives on 24 h cumulative GP and gas production parameters in vitro of first season ratoon rice whole silage

2.4 青貯劑對再生稻頭季全株青貯體外瘤胃發(fā)酵特性的影響

如表 5 所示，體外瘤胃發(fā)酵 24 h 后，N1和 N2組的 pH 極顯著低于 N3和 C K 組（P＜0.01）。N2組的乙酸和 NH3-N 含量顯著高于 N1、N3和 CK 組（P＜0.05）。N1和 N2組的丙酸含量顯著高于 N3和 CK 組（P＜0.05）。N2組的乙酸/丙酸顯著低于N3和 CK 組（P＜0.05）。

表5 青貯劑對再生稻頭季全株青貯體外瘤胃發(fā)酵特性的影響Table 5 Effects of silage additives on in vitro rumen fermentation characteristics of first season ratoon rice whole silage

2.5 青貯劑對再生稻頭季全株體外發(fā)酵24 h 的營養(yǎng)物質(zhì)降解率的影響

如表 6 所示，N2和 N3組的 DM 降解率和 CP 降解率顯著（P＜0.05）和極顯著（P＜0.01）高于 N1和 CK 組。N2組的 OM 降解率、NDF 降解率和 ADF 降解率均極顯著高于 N1、N3和 CK 組（P＜0.01），且 N1、N3和 CK 組之間無顯著差異（P＞0.05）。

表6 青貯劑對再生稻頭季全株青貯體外發(fā)酵24 h 的營養(yǎng)物質(zhì)降解率的影響Table 6 Effects of silage additives on degradation rates of nutrients after 24 h in vitro fermentation of first season ratoon rice whole silage（%）

3 討論

3.1 青貯劑對再生稻頭季全株青貯品質(zhì)的影響

乳酸菌制劑和酶制劑是目前青貯過程中最常見的發(fā)酵促進(jìn)型添加劑。本試驗(yàn)采用的植物乳桿菌和糞腸球菌分別屬于乳桿菌屬和腸球菌屬，都是目前用于生產(chǎn)乳酸的主要菌屬，可以有目的地調(diào)節(jié)青貯原料內(nèi)微生物區(qū)系，增加青貯初期乳酸菌的數(shù)量，迅速降低青貯原料的pH，抑制蛋白質(zhì)分解，更有效地保存營養(yǎng)物質(zhì)。但是乳酸菌在實(shí)際生產(chǎn)條件下的添加效果受植物本身附著的乳酸菌數(shù)量、碳水化合物的可利用性和環(huán)境因素的影響較大［24］，且有眾多研究表明［6?7，25?26］，單獨(dú)添加乳酸菌制劑無法有效降解NDF 和ADF，對提高青貯品質(zhì)的效果有限，與酶制劑組合使用才能達(dá)到更佳的青貯效果。通過添加纖維素酶和半纖維素酶等，可以將植物細(xì)胞壁的纖維素分解為單糖和雙糖，為乳酸菌繁殖提供所需營養(yǎng)。木聚糖酶屬于半纖維素酶，與纖維素酶共同作用有降低青貯原料NDF 和ADF 的作用。本試驗(yàn)設(shè)計(jì)3 個(gè)菌酶組合，結(jié)果發(fā)現(xiàn)N1、N2和N3組與CK 相比，DM 含量有增加的趨勢，說明3 組青貯劑均可以降低再生稻頭季全株青貯DM 的損耗，提高青貯品質(zhì)。N1、N2和N3組與CK 相比，CP 和WSC含量無顯著差異，這與興麗［27］研究添加乳酸菌對全株水稻青貯飼料營養(yǎng)成分的影響結(jié)果一致，但與徐然等［25］研究結(jié)果不同。主要原因可能是再生稻頭季全株青貯原料的WSC 含量較低，且由于額外添加乳酸菌需要消耗更多的發(fā)酵底物，影響了乳酸菌的生長繁殖，建議在條件容許時(shí)，可以通過添加糖蜜等碳源來改善青貯品質(zhì)。同時(shí)也有研究證明［28］，有些乳酸菌和酶制劑之間存在一定的拮抗作用，本試驗(yàn)的結(jié)果可能與此有關(guān)。N1、N2和N3組的總能顯著高于CK，這可能是青貯過程中，青貯劑添加組青貯發(fā)酵時(shí)間短，熱能散失較少。N1、N2和N3組與CK 相比，NDF 和ADF 含量顯著降低，且N2組的NDF 含量顯著低于N1和N3組，說明添加纖維素酶和半纖維素酶能在青貯過程中對植物細(xì)胞壁進(jìn)行降解，使得NDF 和ADF 含量降低，改善了再生稻頭季全株青貯的品質(zhì)，改善效果以N2組青貯劑的菌酶組合更佳。TDN 含量是衡量飼料采食量和能量價(jià)值的重要指標(biāo)［29?30］，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，N1、N2和N3組的TDN 含量顯著高于CK 組，說明3 組青貯劑均可以提高飼料可利用率，改善青貯營養(yǎng)品質(zhì)，效果以N2組青貯劑的菌酶組合更佳。

pH 決定了青貯飼料最終發(fā)酵品質(zhì)的好壞及其營養(yǎng)損失的情況，其理想pH 在3.9～4.2［31］。本試驗(yàn)中各組pH均在4.5～4.6，雖然沒能降到理想?yún)^(qū)間，但是纖維素酶在pH 為4.5 時(shí)活性最強(qiáng)［32］，能發(fā)揮其最佳作用。N1、N2和N3組的pH 與CK 組無顯著差異，這與徐然等［25］的研究結(jié)果一致。pH 不在4.2 以下，可能是青貯原料的WSC 含量偏低，或是發(fā)酵過程中乙酸較乳酸的酸性弱，乳酸菌在發(fā)酵后期變得活躍，可以將乳酸轉(zhuǎn)化為醋酸和1，2?丙二醇［33］，建議在條件容許時(shí)，可以適當(dāng)添加WSC 含量較豐富的原料進(jìn)行混合青貯來提高再生稻頭季全株青貯品質(zhì)。VFA 濃度是反映青貯品質(zhì)好壞的重要指標(biāo)。Kung 等［34］研究發(fā)現(xiàn)，高含量的乙酸可以顯著提高青貯飼料的有氧穩(wěn)定性。所以，乙酸含量可以作為判斷青貯有氧穩(wěn)定性的重要依據(jù)。本試驗(yàn)中，N1、N2和N3組乙酸含量與CK 組相比顯著增加，對提高再生稻頭季全株青貯品質(zhì)具有促進(jìn)作用。NH3-N/TN 被廣泛用于衡量青貯品質(zhì)的好壞。NH3-N 主要是由丁酸菌和大腸桿菌分解青貯原料中的有機(jī)含氮物質(zhì)生成，從而使青貯飼料的營養(yǎng)價(jià)值降低［35］。本試驗(yàn)3 組添加青貯劑的NH3-N/TN 與CK 組相比顯著降低，有效地抑制了植物酶和微生物對蛋白質(zhì)的水解，這與鐘書等［26］的研究結(jié)果一致。各組的NH3-N/TN 比例較高，主要原因可能是青貯飼料的pH 高于4.2，丁酸菌等有害微生物的活動(dòng)未能得到有效地抑制［36］，同時(shí)青貯原料的TN 含量低（CP 為10.07%），少量NH3-N 產(chǎn)生也可造成NH3-N/TN 比例較高?？傮w來看，3 組青貯劑均可以在一定程度上改善青貯品質(zhì)，但N2組青貯劑的菌酶組合效果更佳。

3.2 青貯劑對再生稻頭季全株體外瘤胃發(fā)酵特性的影響

飼料的體外瘤胃發(fā)酵產(chǎn)氣量可以反映飼料在瘤胃中的可發(fā)酵程度和瘤胃微生物的動(dòng)態(tài)趨勢，是評定反芻動(dòng)物瘤胃發(fā)酵特性的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，N2組的24 h 累計(jì)產(chǎn)氣量和快速降解部分的產(chǎn)氣量顯著高于N1、N3和CK 組，同時(shí)，N1和N2組的潛在產(chǎn)氣量顯著高于CK 組，N2組的潛在產(chǎn)氣量顯著高于N1和N3組，說明再生稻頭季全株青貯在添加了N2組青貯劑后，瘤胃微生物對底物的降解效率得到了提高，有利于瘤胃微生物的生長。

pH 是瘤胃內(nèi)環(huán)境的重要指標(biāo)，瘤胃微生物生長繁殖適宜的pH 范圍為6.0～7.0［37］。體外發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果表明，各組 pH 均略高于 7.0，為 7.03～7.11，與雒瑞瑞等［38］的研究結(jié)果（pH 7.02～7.28）相似，對瘤胃纖維素分解菌的活性不會產(chǎn)生不良影響。N1和N2組的pH 顯著低于N3和CK 組，說明添加N1和N2組青貯劑后，發(fā)酵液的環(huán)境較穩(wěn)定，適合瘤胃微生物的生長。瘤胃中VFA 是微生物發(fā)酵日糧中碳水化合物產(chǎn)生的，其濃度的多少及組成成分不僅反映了碳水化合物在瘤胃中消化率的高低，同時(shí)也是衡量瘤胃微生物活力的重要指標(biāo)，瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生的VFA 以乙酸、丙酸和丁酸為主，占TVFA 的95%左右。乙酸是乳脂合成的主要前體物質(zhì)，丙酸則是乳糖合成的主要前體物質(zhì)。本試驗(yàn)中，N2組體外發(fā)酵產(chǎn)生的乙酸含量顯著增加，N1和N2組的丙酸含量顯著增加，說明添加N1和N2組青貯劑對再生稻頭季全株青貯在瘤胃中的降解和能量轉(zhuǎn)化有促進(jìn)作用，且N2組更佳。乙酸/丙酸可以反映結(jié)構(gòu)性碳水化合物和非結(jié)構(gòu)性碳水化合物的供給情況。Lemosquet 等［39］提出，若是將乙酸/丙酸降低至一定范圍內(nèi)，可以綜合提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)結(jié)果表明，N2組乙酸/丙酸顯著低于N3和CK 組，原因可能在于N2組青貯劑的菌酶組合改變了瘤胃微生物的數(shù)量和區(qū)系，有利于瘤胃微生物的能量轉(zhuǎn)化。瘤胃中NH3-N 既是微生物對底物含氮物質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，也是合成微生物蛋白（microbial protein，MCP）的主要氮源［40］，Owens 等［41］研究指出，瘤胃微生物合成MCP 所需的NH3-N 含量為0.35～29 mg·dL?1。本試驗(yàn)各組體外瘤胃發(fā)酵液NH3-N 含量（2.35～4.10 mg·dL?1）均位于正常范圍，但略低，可能是在體外發(fā)酵試驗(yàn)中，發(fā)酵瓶內(nèi)除了溶解在發(fā)酵液中的NH3-N，發(fā)酵濾渣中還有NH3-N 殘留。在體外發(fā)酵試驗(yàn)中，N2組的NH3-N 含量與N1、N3和CK 組相比顯著提高，說明添加N2組青貯劑對體外瘤胃發(fā)酵氮代謝具有促進(jìn)作用。孟慶翔等［42］研究表明，體外發(fā)酵NH3-N 含量與體外產(chǎn)氣量存在高度正相關(guān)，本試驗(yàn)結(jié)果與其相符。總體來看，N2組青貯劑的菌酶組合可以使瘤胃微生物作用增強(qiáng)。

青貯飼料所引起的瘤胃環(huán)境改變還表現(xiàn)在對營養(yǎng)物質(zhì)的降解上。在體外瘤胃發(fā)酵試驗(yàn)中，N2和N3組的DM降解率和CP 降解率顯著提高，同時(shí)，N2組的OM 降解率、NDF 降解率和ADF 降解率也顯著提高，與陶蓮等［5］的研究結(jié)果類似，說明添加N2組青貯劑后，瘤胃微生物對再生稻頭季全株青貯的發(fā)酵利用效果更佳，原因可能是其發(fā)酵底物的TDN 含量升高。總體來看，添加N2組青貯劑可以在一定程度上提高再生稻頭季全株青貯的瘤胃微生物利用效率。

4 結(jié)論

再生稻頭季全株青貯原料在添加青貯劑比例為70%植物乳桿菌，20%糞腸球菌，5%纖維素酶和5%半纖維素酶發(fā)酵后，青貯品質(zhì)更優(yōu)，體外發(fā)酵后可顯著提高累計(jì)產(chǎn)氣量、快速降解部分的產(chǎn)氣量和潛在產(chǎn)氣量，增加乙酸和NH3-N 的含量，降低乙酸/丙酸，提高瘤胃OM 降解率、NDF 降解率和ADF 降解率。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，建議青貯劑在以植物乳桿菌為主要添加劑的前提下，輔助添加糞腸球菌、纖維素酶和半纖維素酶，有利于獲得營養(yǎng)價(jià)值較佳的再生稻頭季全株青貯。