ApoE基因型多態(tài)性與血脂水平相關(guān)性研究及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估*

莫巧璇，黃聲淳，呂微風(fēng)

佛山市中醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心,廣東佛山 528000

載脂蛋白E(ApoE)是一種糖蛋白，包括299個(gè)氨基酸，存在3種異構(gòu)體：ApoE2(基因型為E2/E2和E2/E3)、ApoE3(基因型為E3/E3和E2/E4)和ApoE4(基因型為E3/E4和E4/E4)。ApoE的3種蛋白異構(gòu)體結(jié)構(gòu)上的區(qū)別導(dǎo)致了蛋白功能的差異[1]。ApoE通過(guò)多種途徑參與機(jī)體的脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)，是影響機(jī)體血脂水平的重要內(nèi)在因素，在人體脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用[2-3]，主要通過(guò)與低密度脂蛋白(LDL)受體、極低密度脂蛋白(VLDL)受體及LDL受體相關(guān)蛋白相互作用而發(fā)揮其功能，是脂類代謝和心血管疾病的決定因子。脂質(zhì)代謝紊亂引起的多種脂質(zhì)水平異常，是導(dǎo)致心腦血管損害等多種疾病的重要因素。近30年來(lái)，我國(guó)人群的血脂水平逐步升高，血脂異?；疾÷拭黠@增加[4]，成人血脂異?；颊叩闹獣月屎椭委熉孰m有提高，但仍處于較低水平，血脂異常的防治工作亟待加強(qiáng)[5]。本研究通過(guò)研究不同年齡段ApoE基因型與血脂水平的相關(guān)性，分析不同基因型及不同年齡的體檢人群患動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病(ASCVD)的風(fēng)險(xiǎn)性，為血脂防控健康管理提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年7月至2020年1月在本院健康體檢中心進(jìn)行體檢健康的883名參與者作為研究對(duì)象。其中男488名，女395名，年齡20～91歲。在檢驗(yàn)信息系統(tǒng)查閱883名參與者的ApoE基因分型及11項(xiàng)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果，并做回顧性分析，包括基因型E2/E2、E2/E3、E2/E4、E3/E3、E3/E4、E4/E4的定性結(jié)果及11項(xiàng)生化指標(biāo)葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、尿素(BUN)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、肌酐(CR)和尿酸(UA)的定量結(jié)果。883名參與者的血脂四項(xiàng)(TC、TG、HDL-C和LDL-C)平均水平分別為5.11、1.75、1.34、3.07 mmol/L，GLU、ALT、AST、GGT、BUN、CR、UA水平均在正常范圍內(nèi)，肝、腎功能無(wú)明顯異常，無(wú)明顯糖尿病、痛風(fēng)等代謝性疾病。各ApoE基因型組參與者的年齡相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2儀器與試劑 艾康NES-32核酸提取儀及配套全血DNA提取和純化試劑盒；美國(guó)Life公司ABI7500熒光擴(kuò)增儀及友芝友公司人類SLCO1B1和ApoE基因檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?。

1.3方法

1.3.111項(xiàng)生化指標(biāo)檢測(cè) 參與者空腹12 h，采集靜脈血3 mL于分離膠真空管，3 000 r/min離心10 min分離出血清，使用西門子ADVIA 2400全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑盒和校準(zhǔn)品檢測(cè)11項(xiàng)生化指標(biāo)GLU、TC、TG、HDL-C、LDL-C、BUN、ALT、AST、GGT、CR和UA水平，4 h內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.3.2ApoE基因型檢測(cè) 采集參與者EDTA抗凝靜脈血2 mL，使用艾康NES-32核酸提取儀及配套全血DNA提取和純化試劑盒進(jìn)行DNA的提取和純化；采用人類SLCO1B1和ApoE基因檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?及美國(guó)Life公司ABI7500熒光擴(kuò)增儀進(jìn)行基因分型，通過(guò)兩種不同通道熒光信號(hào)來(lái)確定其基因多態(tài)性。

2 結(jié) 果

2.1ApoE基型分型及單倍體分布頻率 在883名參與者中，ApoE基因型E3/E3占47.6%、E2/E4占17.6%、E3/E4占11.3%、E2/E3占9.2%、E2/E2占7.4%、E4/E4占7.0%，其中E3/E3最為常見(jiàn)，E4/E4最為少見(jiàn)。ApoE異構(gòu)體以E3為主，占65.2%，其次為E4，占18.3%，E2最少，占16.5%。見(jiàn)表1。

表1 ApoE基因型組別的臨床特征及生化指標(biāo)

2.2ApoE基因型與血脂四項(xiàng)的相關(guān)性分析 不同ApoE基因型與TC、TG、HDL-C和LDL-C比較結(jié)果見(jiàn)圖1。ApoE各基因型中，E2/E2組TC及LDL-C水平最低，而E3/E3、E3/E4、E4/E4 TC及LDL-C水平與E2/E2、E2/E3、E2/E4組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，各基因型TG、HDL-C水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。不同的年齡段ApoE基因型組及不同性別組中，TC、TG、HDL-C和LDL-C血脂四項(xiàng)生化指標(biāo)定量結(jié)果見(jiàn)表2。在不同性別組中，男性的TG水平高于女性，而HDL-C則相反，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，不同性別TC和LDL-C水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在50～<60歲年齡段的異構(gòu)體E4組的TC和LDL-C水平最高，E3組次高，E2組最低；TC和LDL-C水平在各基因型的不同年齡段有著相似的變化趨勢(shì)，一般從20歲開(kāi)始到60歲呈曲線升高，60歲后逐漸回落。

注：A為不同ApoE基因型TCH水平比較；B為不同ApoE基因型LDL-C水平比較；C為不同ApoE基因型TG水平比較；D為不同ApoE基因型HDL-C水平比較。

表2 性別間及不同年齡段ApoE基因型血脂四項(xiàng)水平比較

續(xù)表2 性別間及不同年齡段ApoE基因型血脂四項(xiàng)水平比較

3 討 論

脂類標(biāo)志物是心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志物，能預(yù)測(cè)和評(píng)估人群患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，并指導(dǎo)血脂干預(yù)治療。臨床上血脂的檢測(cè)項(xiàng)目較多，基本項(xiàng)目為TC、TG、HDL-C和LDL-C[6]。流行病學(xué)資料表明，LDL-C或TC升高是ASCVD重要的危險(xiǎn)因素，TG升高或HDL-C降低與ASCVD發(fā)病危險(xiǎn)的升高也存在一定的關(guān)聯(lián)[7-9]，血清HDL-C具有抗炎、抗氧化和保護(hù)血管內(nèi)皮的功能[10]，且水平與ASCVD發(fā)病危險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)[11-12]。根據(jù)2013-2014年全國(guó)調(diào)查結(jié)果顯示，成人血清TC、TG、HDL-C和LDL-C平均值分別為4.70 mmol/L、1.14 mmol/L、1.35 mmol/L和2.88 mmol/L[13]。本文研究對(duì)象為2016-2020年佛山地區(qū)健康體檢的健康成人，其血清TC、TG、HDL-C和LDL-C的均值分別是5.11 mmol/L、1.75 mmol/L、1.34 mmol/L和3.07 mmol/L，2016-2020年TC、TG、LDL-C水平比2013-2014年全國(guó)調(diào)查結(jié)果均有增高，而HDL-C則有所下降。可能由于隨著佛山地區(qū)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，市民生活水平日益提高，飲食偏向高脂、高熱量，這使心腦血管疾病的發(fā)生率大大增加。

ApoE基因定位于19號(hào)染色體上，有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，主要有兩種單核苷酸多態(tài)性526C>T和388T>C，可以形成3種單倍型，分別是ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)。不同ApoE基因型中，E2/E2、E2/E3、E2/E4組的TC和LDL-C比E3/E3、E3/E4、E4/E4組明顯降低，其中E2/E2組最低，說(shuō)明不同的ApoE基因型與血脂水平存在因果關(guān)系，E2等位基因可能通過(guò)降低LDL-C降低血液中的TC水平，從而降低ASCVD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；而E4等位基因則因?yàn)橛休^高的TC和LDL-C水平，表明E4等位基因可能通過(guò)增加LDL-C的合成或降低其在外周血的代謝，從而影響血漿血脂水平，增加ASCVD的風(fēng)險(xiǎn)，說(shuō)明在針對(duì)心血管疾病的防控指導(dǎo)中，E3/E4、E4/E4基因型人群可列為重點(diǎn)防控對(duì)象。

不同年齡段中ApoE各基因型的血脂四項(xiàng)變化趨勢(shì)結(jié)果較為一致，一般從20歲開(kāi)始到60歲呈曲線升高，說(shuō)明隨著年齡的增長(zhǎng)，各基因型的ASCVD的風(fēng)險(xiǎn)均不斷上升，尤其是50～<60歲的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)最高。因此，特別強(qiáng)調(diào)隨著年齡的增長(zhǎng)，應(yīng)不斷增強(qiáng)血脂異常的防治管理，除了要降低血清LDL-C水平外，也要強(qiáng)調(diào)控制血清 TG 水平，以降低心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)[9,14]。

TG、HDL-C水平與ApoE的基因型沒(méi)有明顯的相關(guān)性，但不同性別TG、HDL-C水平有明顯差異。男性相對(duì)于女性有著更高的TG及更低的HDL-C水平，男性患ASCVD的風(fēng)險(xiǎn)比女性更高，這與我國(guó)多個(gè)地區(qū)的結(jié)果文獻(xiàn)報(bào)道相似[14-16]。

綜上所述，研究ApoE基因型多態(tài)性在不同年齡段與血脂水平的相關(guān)性，有助于判斷不同基因型及不同年齡的人群患ASCVD的風(fēng)險(xiǎn)性，尤其是針對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)人群，可提供科學(xué)的防控指導(dǎo)，并對(duì)實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥和安全用藥等有重要意義。