火龍果采后病原菌的鑒定及其防控處理的優(yōu)化

葛春暉，尤文靜，蔣澤橙，成梓瑜，湯 月，邵遠(yuǎn)志

（1. 海南大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，?？?570228; 2. 海南大學(xué) 生命科學(xué)與藥學(xué)院，?？?570228）

火龍果 (Hylocereus undatus)是一種仙人掌科植物，原產(chǎn)地在南美洲和中美洲等部分地區(qū)，屬于典型的熱帶植物，在我國(guó)引入后，得到了廣泛的馴化和改良，品種更加豐富，目前在我國(guó)廣東、廣西、海南以及福建等地區(qū)均有推廣種植和栽培，成為了一種倍受人們喜愛(ài)的熱帶水果[1-2]。近些年來(lái), 伴隨著我國(guó)的火龍果種植栽培面積不斷擴(kuò)大，一些相應(yīng)的病害也隨之產(chǎn)生，并且火龍果采后病害呈現(xiàn)出逐漸加重的趨勢(shì)?；瘕埞诓烧蟮膬?chǔ)藏運(yùn)輸過(guò)程中，由于自然衰老，果實(shí)會(huì)褐變萎蔫，在褐變萎蔫中還會(huì)受到多種微生物侵染造成腐爛變質(zhì)，其中真菌病害十分普遍[3-4]。據(jù)報(bào)道，海南地區(qū)火龍果采后主要病害有炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)、根霉病(Rhizopus stolonifer)、焦腐病(Botryodiplodia theobrom)，偶見(jiàn)鐮刀菌果腐病(Fusariumsp)等[5]。這些病害對(duì)當(dāng)?shù)氐墓弋a(chǎn)業(yè)造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失。

化學(xué)殺菌劑在針對(duì)果蔬病害的防治中占據(jù)著主要地位，使用化學(xué)殺菌劑是防治果蔬采后病害的重要方式，但其易殘留、會(huì)造成環(huán)境污染、易產(chǎn)生抗藥性等缺點(diǎn)一直被人們?cè)嵅6]。近年來(lái)，生物防治作為綠色安全的新興防治技術(shù)成為國(guó)內(nèi)外果蔬采后病害防治的研究熱點(diǎn)。生物防治技術(shù)主要分為3類：微生物菌體及其代謝產(chǎn)物、天然提取物和基因工程技術(shù)[7-8]。拮抗菌防治病害有著不可替代的優(yōu)勢(shì)和潛力，是針對(duì)果蔬采后病害防治極其重要的生防材料。拮抗菌主要種類有酵母菌、細(xì)菌、霉菌等，且部分菌株已實(shí)現(xiàn)了商業(yè)化應(yīng)用[9-10]。許多天然植物提取物中含有具有抗菌、抗氧化功能的活性物質(zhì)，其中包括從食用香辛料和中草藥等提取的有效成分，這些活性物質(zhì)普遍具有較強(qiáng)的抑菌活性，且被認(rèn)為有利于開(kāi)發(fā)成天然新型果蔬防腐保鮮劑[11]。

綜合拮抗菌和天然植物提取物的優(yōu)勢(shì)，加之兩者都能夠?qū)Σ≡鸬揭欢ǖ姆揽匾种谱饔?，因此本研究以從火龍果上分離得到的病原菌為研究對(duì)象，篩選對(duì)火龍果采后果腐病具有較好防效的天然植物提取物，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室已有的拮抗菌（JK-A1枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis和JK-L1廣島鏈霉菌Streptomyces hiroshimensis），探究2種生物抑菌保鮮方式的有效結(jié)合途徑。對(duì)于拓寬火龍果采后病害的防 控途經(jīng)，提高生防安全性，具有十分重要的理論意義和研究?jī)r(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器供試果實(shí)購(gòu)自海南省?？谑心媳彼袌?chǎng)，做為病原菌分離純化（放置于室溫陰涼處待其自然發(fā)病后取樣）和用于致病性測(cè)定；供試土壤取自海南省海口市火龍果園，取果樹(shù)根系離土表5～15 cm 的土壤樣品，用密封袋封存，做好標(biāo)記帶回實(shí)驗(yàn)室用于拮抗菌的分離；供試香辛料（生姜和大蒜）和香蕉皮、石榴皮、柑橘皮、火龍果皮、黃皮皮購(gòu)自海南省?？谑轩i泰興超市；供試拮抗菌為實(shí)驗(yàn)室前期分離鑒定得到的2株拮抗菌，分別為JK-A1枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、JK-L1廣島鏈霉菌（Streptomyces hiroshimensis）；真菌基因組 DNA 抽提試劑盒購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (PDA)：馬鈴薯 200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g、蒸餾水 1 000 mL，pH自然；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（NA）：蛋白胨 10 g、牛肉膏 3 g、NaCl 5 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 mL，pH 7.2～7.4；液體NA 培養(yǎng)基不加瓊脂；高氏一號(hào)培養(yǎng)基：可溶性淀20 g，KNO31 g，K2HPO40.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，NaCl 0.5 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g，瓊脂 20 g，pH 7.4～7.6；液體高氏一號(hào)培養(yǎng)基不加瓊脂。

儀器與設(shè)備：BCM－1000生物凈化工作臺(tái)，F(xiàn)YL－YS－280L 型恒溫培養(yǎng)箱，NRY－211恒溫培養(yǎng)搖床，AL－204電子天平，ZEALWAYGR60DA高壓滅菌器，Nikon ECLIPSE Ci-s/Ci-L電子顯微鏡，TG16KR臺(tái) 式高速冷凍離心機(jī)，RV-211M型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，JY300C型電泳儀，GE4832T型PCR基因擴(kuò)增儀。

1 .2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌分離純化病原菌分離純化采用常規(guī)組織分離法[12]。選取自然發(fā)病的火龍果果實(shí)，用75%酒精消毒后，用無(wú)菌水沖洗3次，然后在無(wú)菌環(huán)境下切取病健交界處組織塊（5 mm × 5 mm），將病健交界處組織塊置于PDA培養(yǎng)基平板上，于 28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 3～5 d。待長(zhǎng)出菌絲后，轉(zhuǎn)接到新的 PDA 培養(yǎng) 基上繼續(xù)恒溫培養(yǎng), 待長(zhǎng)出單菌落后進(jìn)行單孢培養(yǎng)，直至得到純化的病原菌。

1.2.2 病原菌的柯赫氏法則驗(yàn)證選取健康、大小、成熟度一致的火龍果，用75%酒精進(jìn)行表面消毒備用。用無(wú)菌打孔器將PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)了3～5 d的新鮮病原菌打成6 mm菌餅。將菌餅貼于消毒備用的 火龍果表面，每個(gè)果實(shí)接種3個(gè)，以接種PDA培養(yǎng)基為對(duì)照，置于 28 ℃恒溫箱培養(yǎng)，觀察發(fā)病情況。

1.2.3 病原菌形態(tài)鑒定將純化菌株接種于PDA培養(yǎng)基，28 ℃恒溫箱培養(yǎng)，待產(chǎn)孢后觀察菌落形態(tài)，利用 光學(xué)顯微鏡記錄孢子形態(tài)和結(jié)構(gòu)，參照《真菌鑒定手冊(cè)》[13]進(jìn)行初步鑒定。

1.2.4 病原菌分子生物學(xué)鑒定采用 Ezup 柱式真菌基因組 DNA 抽提試劑盒提取病原菌 DNA，使用真菌鑒定通用引物ITS1 和 ITS4 進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，序列測(cè)定委托生工生物工程(上海) 股份有限公司完成。將測(cè)序結(jié)果在 GenBank 核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行 Blast 比對(duì)，并結(jié)合數(shù) 據(jù)庫(kù)中的同源序列，利用 MEGA6.0 軟件中的 Neighbor-joining 構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

1.2.5 拮抗菌的抑菌活性測(cè)定通過(guò)平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)對(duì)拮抗菌進(jìn)行抑菌活性測(cè)定，測(cè)量抑菌帶寬度，寬度越 大表示抑菌活性越強(qiáng)。

1.2.6 植物提取物的制備植物提取物制備方法參照張新龍[14]的方法，并適當(dāng)修改。取適量新鮮熱帶水果果皮或主要香辛料（生姜和大蒜），50 ℃烘箱干燥5 h，粉碎機(jī)粉碎，過(guò)40目篩，稱取25 g干燥植物材料粉末于三角瓶中，按料液比1∶20（g·mL-1）往瓶中加入濃度為95%的乙醇溶液，50 ℃條件下超聲波提取30 min。處理液用4層紗布過(guò)濾，以5 000 r·min-1轉(zhuǎn)速離心20 min。取上清液，50 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇成浸膏狀態(tài)，干燥后加入適量蒸餾水超聲振蕩溶解，定容至50 mL，得提取物懸浮母液，于4 ℃冰箱保存?zhèn)?用。

1.2.7 植物提取物的抑菌效果采用打孔法[15]測(cè)定不同植物（香蕉皮、石榴皮、柑橘皮、火龍果皮、黃皮皮、生姜和大蒜）提取液的抑菌效果。采用對(duì)倍稀釋法測(cè)定植物提取物的最低抑菌濃度（MIC）。菌落被完全抑制時(shí)的提取液濃度即為最低抑菌濃度。用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，抑菌圈越大表示抑菌作用越 強(qiáng)，并選擇該提取液進(jìn)行下一步的抑菌實(shí)驗(yàn)。

1.2.8 植物提取液與拮抗菌發(fā)酵液復(fù)合效果篩選按照單因素實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以拮抗物質(zhì)對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率指標(biāo)為考查指標(biāo)，分別研究拮抗菌種類、拮抗菌濃度、黃皮皮提取液濃度和生姜提取液濃度 對(duì)2株鐮刀菌的抑菌活性的影響。4個(gè)因素分別設(shè)計(jì)3個(gè)水平（表1），利用SPSS軟件生成正交表（表2），并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)獲得菌絲生長(zhǎng)抑制率結(jié)果。

表1 拮抗菌發(fā)酵液與植物提取液復(fù)合抑菌正交設(shè)計(jì)因素水平Tab. 1 Orthogonal design factors of inhibition of pathogens with combinations of antagonistic bacteria fermentation broth and plant extracts

表2 拮抗發(fā)酵菌與植物提取液正交組合表Tab. 2 Orthogonal combinations of antagonistic fermentative bacteria and plant extracts

吸取6 mL植物提取液與拮抗菌發(fā)酵液等比例混合于三角瓶中，并與54 mL PDA培養(yǎng)基混勻，倒入培養(yǎng)皿中，每皿20 mL。無(wú)菌條件下每個(gè)平板中央放置1塊6 mm新鮮病原菌菌餅，重復(fù)3次，以加入等量無(wú)菌水為對(duì)照。置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)5 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，按如下公式評(píng)判抑菌效果。

2 結(jié)果與分析

2 .1 火龍果采后病原菌的鑒定

2.1.1 病原菌形態(tài)鑒定結(jié)果從自然發(fā)病的火龍果果實(shí)上分離得到2種主要病原微生物，分別命名為菌株HL-R1和HL-I1，經(jīng)過(guò)致病性檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)后，可造成火龍果發(fā)?。▓D1-A）。病原菌菌株 HL-R1 在 PDA 培養(yǎng)基上的菌落呈圓形，生長(zhǎng)旺盛，氣生絮狀菌絲初期呈白色，后期有橙黃色孢子堆產(chǎn)生（圖1-B）；培養(yǎng)基平板背面顏色初期為白色，后變?yōu)辄S褐色。經(jīng)顯微鏡觀察可得菌絲及孢子形態(tài)（圖2-A），大型分生孢子鐮刀狀，略微向內(nèi)彎曲，3～5 個(gè)隔膜（圖2-B）。根據(jù)病原菌菌落形態(tài)和大型分生孢子特征，參考《真菌鑒定手冊(cè)》，初步鑒定為鐮刀菌屬。

病原菌菌株HL-I1在PDA 培養(yǎng)基生長(zhǎng)初期可形成白色絮狀菌絲, 隨后由菌絲中心轉(zhuǎn)變?yōu)榈仙? 并產(chǎn)生紫紅色色素(圖1-B)；經(jīng)顯微鏡觀察可得菌絲及孢子形態(tài)（圖2-A）大型分生孢子鐮刀形、多細(xì)胞、3～5 隔膜；小型分生孢子卵圓形至橢圓形（圖2-D）。根據(jù)病原菌菌落形態(tài)和分生孢子特征，參考《真菌鑒定手冊(cè)》，初步鑒定為鐮刀菌屬。

圖1 病原菌HL-R1和HL-I1在PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)B中上圖為正面，下圖為背面。Fig. 1 Morphology of pathogen strains HL-R1 and HL-I1 on PDA mediumThe upper two mediums in B are viewed from the front, and the lower two from the back.

圖2 兩株病原菌菌絲和分生孢子形態(tài)(400×)A、B：菌株HL-R1的菌絲和分生孢子形態(tài), C、D：菌株HL-I1的菌絲和分生孢子形態(tài)。Fig. 2 Morphology of hyphae and conidia of two pathogens(400×)A and B: Morphology of hyphae and conidia of strain HLR1; C and D: Morphology of hyphae and conidia of strain HL-I1.

2.1.2 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果采用 rDNA-ITS 分子鑒定將分離獲得的病原菌鑒定到種。以分離獲得的病原菌菌株HL-R1、HL-I1的基因組 DNA 為模板，使用真菌通用引物ITS1和ITS4擴(kuò)增獲得它們的rDNA-ITS 序列（圖3）。測(cè)序結(jié)果表明，病原菌菌株HL-R1和HL-I1的序列長(zhǎng)度分別為 521 bp和557 bp。將病原菌菌株HL-R1序列在NCBI上進(jìn)行BLAST比對(duì)，結(jié)果表明，菌株HL-R1的rDNAITS序列與鐮刀菌屬的木賊鐮刀菌(Fusarium equiseti，登錄號(hào)MH707078)的 ITS序列100% 同源, 而菌株HL-I1的rDNA-ITS 序列則與尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum，登錄號(hào)MK751702)的同源性為100%，因此將菌株HL-R1鑒定為尖孢鐮刀菌。將測(cè)序所得的致病真菌 HL-R1 和 HL-I1 的rDNA-ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù), 得出火龍果致病菌的遺傳關(guān)系 (圖4)。

圖3 火龍果致病病原菌 rDNA-ITS序列的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果M：DNA Ladder Mix maker，A：HL-R1 擴(kuò)增產(chǎn)物，B：HLR1 擴(kuò)增產(chǎn)物。Fig. 3 The PCR amplification results of the rDNA-ITS sequence of the pathogens isolated from pitaya fruitM: DNA Ladder Mix maker; A: HL-R1 amplification product; B: HL-R1 amplification product.

圖4 病原菌 HL-R1和HL-I1的 ITS 系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)Fig. 4 The ITS phylogenetic tree of pathogen strains HL-R1 and HL-I1

2.2 兩株拮抗菌的抑菌活性測(cè)定兩株菌株JK-A1、JK-L1在NA培養(yǎng)基上的形態(tài)如圖5-A所示。通過(guò)平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)對(duì)HL-R1（木賊鐮刀菌）、HL-I1（尖孢鐮刀菌）的拮抗效果明顯，對(duì)木賊鐮刀菌抑菌帶寬度分別為 （11.33±0.37） mm和（12.67 ±0.45） mm；對(duì)尖孢鐮刀菌分別為（12.75±0.62） mm和（12.93±0 .43） mm (圖5-B)。

圖5 拮抗菌 JK-A1和JK-L1的菌落形態(tài)和對(duì)兩株病原菌的抑制效果A上圖為正面，下圖為背面Fig. 5 Colony morphology of antagonistic bacteria JK-A1 and JK-L1 and their inhibitory effects on the two pathogensThe top pictures in A are the front, and the bottom pictures are the back.

2.3 植物提取物的篩選及抑菌活性由表3 可知, 選取的幾種植物提取物中，香蕉皮、石榴皮和柑橘皮提取液對(duì)兩株病原菌抑制作用比較低；火龍果皮、黃皮皮、生姜和大蒜提取液均具有較明顯的抑制作用，其中黃皮皮提取液的抑制作用較顯著，對(duì)HL-R1（木賊鐮刀菌）抑菌圈直徑達(dá)到了（24.67±0.28）mm，對(duì)HL-I1（尖孢鐮刀菌）抑菌圈直徑達(dá)到了（26.00±0.55）mm。根據(jù)最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定結(jié)果（表4），黃皮皮對(duì)HL-R1木賊鐮刀菌和HL-I1尖孢鐮刀菌的MIC均達(dá)到了62.5 g·L-1，抑菌能力最為突出，生姜?jiǎng)t僅僅對(duì)木賊鐮刀菌的MIC僅達(dá)到62.5 g·L-1。因此，選取黃皮皮和生姜2種提取物進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

表3 不同植物提取物的抑菌圈直徑Tab. 3 Diameter of pathogen inhibition circle of different plant extracts

表4 四種植物提取物對(duì)兩株病原菌的最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定結(jié)果Tab. 4 Determination of minimum inhibitory concentration (MIC) of four plant extracts against two pathogen strains

2.4 植物提取液與拮抗菌發(fā)酵液的復(fù)合抑菌效果經(jīng)過(guò)前期單因素影響因素的篩選，選取效果最佳的黃皮皮和生姜2種提取液，結(jié)合拮抗菌，以復(fù)合抑菌組合對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率為考察指標(biāo)，抑菌結(jié)果見(jiàn)圖6。由圖6可知，菌株HL-R1和HL-I1在不同處理間均受到了明顯的抑制效果。

圖6 植物提取液與拮抗菌發(fā)酵液復(fù)合正交處理對(duì)2株病原菌的抑制效果Fig. 6 The compound inhibitory effect of the combination of plant extracts and antagonistic antibacterial fermentation broths at the orthogonal design on the two pathogen strains

由表5 可知，在對(duì)木賊鐮刀菌的正交實(shí)驗(yàn)中，各因素對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率影響強(qiáng)弱的次序?yàn)椋狐S皮皮提取液濃度（C）＞生姜提取液濃度（D）＞拮抗菌發(fā)酵液濃度（B）＞拮抗菌種類（A）；在對(duì)尖孢鐮刀菌的正交實(shí)驗(yàn)中，各因素對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率影響強(qiáng)弱的次序?yàn)椋篋＞A＞C＞B，即生姜提取液濃度＞拮抗菌種類＞黃皮皮提取液濃度＞拮抗菌發(fā)酵液濃度。2株病原菌得出的結(jié)果并不一致，可能是由于2株病原菌對(duì)不同的抑菌物質(zhì)敏感性不同。

表5 拮抗菌發(fā)酵液與植物提取液正交組合對(duì)2株病原菌的抑菌效果Tab. 5 Experimental results of orthogonal combinations of antagonistic fermentation bacteria and plant extracts against the two pathogen strains

結(jié)果分析表明：抑制木賊鐮刀菌生長(zhǎng)的最佳條件為：拮抗菌種類 JK-A1+JK-L1、拮抗菌發(fā)酵液濃度1×108CFU·mL-1、黃皮皮提取液濃度 500 g·L-1、；抑制尖孢鐮刀菌生長(zhǎng)的最佳條件為：拮抗菌種類 JKA 1、拮抗菌發(fā)酵液濃度1×108CFU·mL-1、黃皮皮提取液濃度 500 g·L-1。

3 討 論

在本研究中，通過(guò)對(duì)火龍果致病病原分離、致病性測(cè)定以及形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定等方法，筆者將海南省?？谑谢瘕埞珊蟛『γ鞔_為2株鐮刀菌：木賊鐮刀菌（F. equiseti）和尖孢鐮刀菌(F. oxysporum)。其中木賊鐮刀菌曾被雷夢(mèng)英等[16]發(fā)現(xiàn)可以引起廣東省廣州市地區(qū)火龍果的果柄腐爛病，其是否會(huì)影響火龍果可食用部分并沒(méi)有明確，而林珊宇等[17]在廣西地區(qū)也分離得到了木賊鐮刀菌，可造成火龍果的軟腐病。因此，木賊鐮刀菌已經(jīng)成為危害火龍果采后品質(zhì)的一種重要鐮刀菌，并且在其他國(guó)家或地區(qū)已報(bào)道該菌可以引起菠蘿、西瓜、花卉等植物的病害[18-20]。據(jù)報(bào)道尖孢鐮刀菌為上海地區(qū)火龍果采后病害的主要致病菌[21]，國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的被尖孢鐮刀菌嚴(yán)重為害的作物還有香蕉、番茄、黃瓜、哈密瓜、西瓜等多種果蔬作物[22-23]。

利用生物抑菌保鮮技術(shù)防控植物病害是近年來(lái)一種非常有前景的手段，得到了人們的廣泛認(rèn)可[24]，其中枯草芽孢桿菌作為一種常見(jiàn)的芽孢桿菌屬菌株，具有較強(qiáng)的抑菌活性。如曹琦琦等[25]發(fā)現(xiàn)1株對(duì)水稻紋枯病菌具有較強(qiáng)拮抗活性的枯草芽胞桿菌，談泰猛等[26]也發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌可以用來(lái)防治辣椒疫病。鏈霉菌屬雖然不如芽孢桿菌屬應(yīng)用廣泛，但是也有相關(guān)抑菌報(bào)道。玫瑰輪絲鏈霉菌可以用來(lái)防治水稻白葉枯病菌[27]，亞黃鏈霉菌可以用來(lái)防治煙草青枯菌[28]。另外在筆者篩選的幾種天然植物混合提取物中，黃皮皮提取物和生姜提取物的抑菌活性最佳，對(duì)2株病原菌的抑菌圈直徑均達(dá)到了22.35 mm以上。李奕星等[29]研究發(fā)現(xiàn)，黃皮不同部位提取物的抗氧化活性強(qiáng)弱關(guān)系為果皮＞枝條＞果肉＞枝子，同時(shí)趙豐麗[30]研究發(fā)現(xiàn)黃皮葉乙醇提取物對(duì)黑曲霉、瘡痂病、砂皮病、炭疽病、青霉和芒果蒂腐病等6種植物病原菌具有較強(qiáng)的抑菌作用，其抑菌范圍較廣，而生姜作為一種常見(jiàn)的香辛料，抑菌活性已經(jīng)被廣泛研究和應(yīng)用[31-32]。

綜合以上篩選出的幾種植物提取物和拮抗菌，筆者為了探究其復(fù)合抑菌效果，考慮了幾種單因素的影響，進(jìn)行了相應(yīng)的正交實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，拮抗菌發(fā)酵液與植物提取液的復(fù)合配比組合對(duì)木賊鐮刀菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率最高達(dá)到59.19%，對(duì)尖孢鐮刀菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率最高達(dá)到53.11%。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，拮抗菌可以和提取物復(fù)合使用，從而達(dá)到更加穩(wěn)定的抑菌效果，但其復(fù)合作用的機(jī)制以及在實(shí)際應(yīng)用中的防治效果的高效性和穩(wěn)定性還需要進(jìn)一步探索。