呼吸道不同血清型別腺病毒感染患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平變化研究

趙苗苗，呂朝治，余 玲

(漢中市中心醫(yī)院兒科，陜西 漢中 723000)

腺病毒是雙鏈DNA病毒，易侵犯呼吸道而引發(fā)呼吸道感染，如扁桃體炎、支氣管炎、支氣管肺炎等，且多發(fā)生在兒童時(shí)期，給患兒生命健康造成嚴(yán)重威脅[1]。人腺病毒型別眾多，現(xiàn)階段，將人腺病毒劃分為7個(gè)亞群(A、B、C、D、E、F、G)，共包含52個(gè)血清型別，其中引發(fā)呼吸道感染的腺病毒主要集中在1型、2型、3型、4型、5型、7型、11型等血清型中[2]。目前，關(guān)于腺病毒感染的發(fā)病機(jī)制雖尚未完全清楚，但有研究[3]表明，呼吸道腺病毒感染涉及到多種細(xì)胞因子及淋巴細(xì)胞亞群的作用。且有研究[4]顯示，重癥腺病毒肺炎患兒發(fā)病時(shí)，其外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+比值均降低，存在機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降的情況，但經(jīng)治療后，恢復(fù)期外周血CD3、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+比值均升高，其為治療效果的判斷提供了監(jiān)測依據(jù)。本研究特就此展開探討，以期為臨床病情及治療的判斷提供客觀參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將本院2017年3月至2019年12月收治的67例呼吸道腺病毒感染患兒設(shè)為研究組，另將同期體檢健康的53例兒童設(shè)為對(duì)照組。其中研究組男36例，女31例；年齡3個(gè)月至12歲，平均(3.56±0.67)歲；體重6.02～36.19 kg，平均(15.82±3.06)kg；發(fā)病類型：急性上呼吸道感染35例，支氣管炎17例，支氣管肺炎15例。對(duì)照組男29例，女24例；年齡4個(gè)月至10歲，平均(3.35±0.54)歲；體重6.62～33.24 kg，平均(14.83±2.46)kg。兩組在性別、年齡、體重等方面比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，本研究已獲取醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：研究組均符合呼吸道腺病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且經(jīng)病原學(xué)檢測確診；對(duì)照組均體檢健康，無慢性疾病，且近1個(gè)月內(nèi)未發(fā)生感染性疾??；年齡<14歲；家屬均知情且自愿參與。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴肺結(jié)核、哮喘、支原體感染等呼吸系統(tǒng)疾病者；其他病毒感染者；伴免疫系統(tǒng)疾病者；營養(yǎng)不良者；近期使用過抗生素、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素等藥物者；先天性肺發(fā)育不良者。

1.2 研究方法

1.2.1 外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平檢測：抽取兩組研究對(duì)象空腹外周靜脈血4 ml，離心并分離血清，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+水平，并計(jì)算CD4+/CD8+比值，其中流式細(xì)胞儀及相關(guān)試劑盒均購于美國BD公司。

1.2.2 腺病毒血清型別檢測：采取研究組患兒鼻咽分泌物，應(yīng)用免疫熒光法對(duì)其進(jìn)行病毒抗原檢測，確定腺病毒陽性。提取病毒DNA，并進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，其反應(yīng)體系(25 μl)：反應(yīng)液2 μl，模板液2 μl，TaqDNA聚合酶12.5 μl，上、下游引物各0.5 μl，加水補(bǔ)足至25 μl；反應(yīng)條件：在94 ℃下預(yù)變性4 min，94 ℃下變性1 min，在55 ℃下退火30 s，另在72 ℃下延伸1 min，總共35個(gè)循環(huán)，在72 ℃下終延伸5 min。其中DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、聚合酶、脫氧核苷酸試劑盒購自上海雅吉生物科技有限公司，PCR試劑盒購自生工生物工程(上海)股份有限公司，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，PCR擴(kuò)增儀購自杭州朗基科學(xué)儀器有限公司。

1.3 觀察指標(biāo) ①研究組與對(duì)照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平情況；②研究組血清型別情況；③研究組各血清型別外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平情況。

2 結(jié) 果

2.1 研究組與對(duì)照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 研究組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均較對(duì)照組降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；研究組外周血CD8+水平與對(duì)照組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P>0.05)。見表1。

表1 研究組與對(duì)照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

2.2 研究組血清型型別情況 經(jīng)腺病毒血清型別檢測，在67例呼吸道腺病毒感染患兒中，3型腺病毒35例(52.24%)，7型腺病毒21例(31.34%)，其他型腺病毒11例(16.42%)。

2.3 研究組各血清型別外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 CD8+在研究組各血清型別間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；CD3+、CD4+、CD4+/CD8+在研究組各血清型別間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)，3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于其他型別腺病毒感染，7型腺病毒感染患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于3型腺病毒感染，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表2。

表2 研究組各血清型別外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

3 討 論

腺病毒是兒童呼吸道感染常見病原體之一，可引發(fā)嚴(yán)重支氣管炎或重癥肺炎等，增加兒童死亡風(fēng)險(xiǎn)[6]。機(jī)體感染腺病毒后，可產(chǎn)生免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)，以對(duì)抗腺病毒感染[7]。T淋巴細(xì)胞亞群主要包括CD3+、CD4+、CD8+等，在免疫系統(tǒng)中具有重要的調(diào)控作用，正常情況下，T淋巴細(xì)胞亞群各細(xì)胞數(shù)量保持一定的比例而使機(jī)體免疫功能維持在動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，但當(dāng)受到感染時(shí)，各數(shù)量或功能出現(xiàn)改變，導(dǎo)致免疫功能紊亂，引發(fā)疾病發(fā)生發(fā)展[8-9]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，研究組外周血CD8+水平與對(duì)照組無明顯區(qū)別，但CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均較對(duì)照組明顯降低，提示呼吸道腺病毒感染患兒細(xì)胞免疫功能降低。CD3+是成熟T細(xì)胞，CD4+是免疫應(yīng)答中重要反應(yīng)細(xì)胞，協(xié)同發(fā)揮免疫功能，而CD8+為免疫抑制細(xì)胞，另CD4+/CD8+比值反應(yīng)機(jī)體免疫狀態(tài)[10]。正常情況下，CD4+與CD8+相互制約而達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，腺病毒感染機(jī)體后，機(jī)體細(xì)胞免疫功能紊亂，輔助性T細(xì)胞比例下降[11]。有研究[12]表明，急性呼吸道腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+水平均較正常對(duì)照兒童明顯降低，而CD3+、CD8+無明顯差異，此與本研究結(jié)果相符合。盧華君等[13]研究亦表明呼吸道腺病毒感染患兒存在免疫功能紊亂，外周血CD3+、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，在67例呼吸道腺病毒感染患兒中，3型腺病毒感染占比52.24%，7型腺病毒感染占比31.34%，其他型腺病毒感染占比16.42%，提示腺病毒引發(fā)的呼吸道感染患兒以3型及7型腺病毒為主。帥金鳳等[14]研究顯示，2017年石家莊地區(qū)呼吸道腺病毒感染住院兒童中，3型腺病毒9例(11.8%)、7型腺病毒27例(35.5%)，為主要流行型別。另Haque等[15]研究表明，人腺病毒3型是世界范圍內(nèi)急性呼吸道感染主要病原，占所有腺病毒呼吸道感染的15%～87%。此外，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，研究組各血清型別腺病毒感染患兒間CD8+無明顯差異，但3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于其他型別腺病毒感染，且7型腺病毒感染患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均較3型腺病毒感染降低，提示3型、7型腺病毒引發(fā)的呼吸道感染對(duì)機(jī)體免疫功能損傷較其他型別嚴(yán)重，且7型最為嚴(yán)重。有研究[16]表明，B亞組中的人腺病毒7型、3型的致病性較C組、E組中的其他型別強(qiáng)。另有研究[17]顯示，在人腺病毒7個(gè)亞組中，與呼吸道感染有關(guān)的主要是B組(3、7、11型等)、C組(1、2、5型等)、E組(4型)，尤其是B亞組中3、7型可引發(fā)嚴(yán)重呼吸道感染性疾病。3型、7型腺病毒致病性較強(qiáng)，可引發(fā)較重的臨床表現(xiàn)，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞亞群紊亂較為嚴(yán)重，促使細(xì)胞免疫功能嚴(yán)重降低，則CD3+、CD4+、CD4+/CD8+下降更為明顯；而1型、2型等其他型別腺病毒的毒力較小，較少引發(fā)嚴(yán)重臨床表現(xiàn)，免疫功能紊亂相對(duì)較輕。此外，有研究[18-20]表明，與3型腺病毒感染相比較，7型腺病毒感染引起了更為嚴(yán)重的疾病特征與結(jié)果。此可有助于對(duì)患兒病情嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估，以指導(dǎo)臨床治療，并可有助于治療效果的判斷。

綜上所述，呼吸道腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯降低，其腺病毒感染型別以3型、7型為主，且3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低情況較其他型別的腺病毒感染明顯，并以7型腺病毒感染降低最為嚴(yán)重，可指導(dǎo)臨床對(duì)此類患兒的免疫干預(yù)，實(shí)施重癥疾病的救治。