中藥材小血藤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張靜雅 劉春花 馬雪 王愛民 李勇軍 王永林 孫佳

【摘 要】 目的：建立小血藤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采集來自貴州六批次小血藤藥材，參考2015版《中國藥典》和2003版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)小血藤的質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究，包括性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜建別、水分檢查、總灰分檢查及浸出物檢查。結(jié)果：六批小血藤的性狀特征相似，顯微特征明顯;薄層色譜斑點(diǎn)清晰、分離度好、專屬性強(qiáng);水分為8.90%～10.08%，平均值9.52%;總灰分為11.1%～12.7%，平均值11.8%;水溶性浸出物為12.83%～16.55%，平均值14.93%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可為小血藤質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 小血藤;顯微鑒別;薄層色譜鑒別;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）08-0045-06

Abstract：Objective The aim of this study is to establish the quality standard of Rubiae alatae Radix et Rhizoma. Methods Six batches of Rubiae alatae Radix et Rhizoma from Guizhou were collected. According to pharmacopoeia 2015， the quality control methods of Rubiae alatae Radix et Rhizoma were studied， including character， microscopic and thin layer chromatography （TLC） identification， water content， total ash inspection and water-soluble extract determination. Results The characters of the six batches of Rubiae alatae Radix et Rhizoma were similar， and their microscopic characteristics were obvious. The spots in TLC are clear， possessing good resolution and specificity.The range of water content of the six batches of samples was 8.90%～10.08% and the average value was 9.52%; the total ash content ranged from 11.1% to 12.7% with an average value 11.8%; and the content of water-soluble were 12.83%～16.55% with a mean value 14.93%. Conclusion This method is simple， accurate and reliable， which can provide experimental basis for the quality control of Rubiae alatae Radix et Rhizoma.

Key words：Rubiae alatae Radix et Rhizoma; Microscopic Identification; Thin Layer Chromatography; Quality Control

小血藤為茜草科植物金劍茜草（Rubia alata Roxb.）、大葉茜草（Rubia schumanniana Pritzel）或鉤毛茜草（Rubia oncotricha Hand.-Mazz.）的干燥根及根莖，為我國傳統(tǒng)常用中藥[1]，亦為貴州省少數(shù)民族用藥，小血藤為三種茜草的總稱。其最早記載于秦漢時(shí)期的《神農(nóng)本草經(jīng)》，原名“茜根”，書中記載“茜根主寒濕，風(fēng)痹，黃疽，補(bǔ)中，生山谷[2]，關(guān)于茜草的藥用歷史在《名醫(yī)別錄》、《新修本草》《本草綱目》《中華本草》等歷代本草中均有描述[2]，其功效與作用是涼血止血、清熱退黃、止癢止痛、消炎殺菌[3] 。小血藤主要在西南地區(qū)如云南、四川、貴州等地分布，其中金劍茜草在貴州分布較為廣泛[4]。雖然三種茜草在植物形態(tài)、生態(tài)環(huán)境及分布上略有差異，但是在民間均采集其根及根莖，用于治療吐血，衄血，崩漏，經(jīng)閉，黃疸，支氣管炎，跌撲損傷等疾病[5]，具有良好的藥用價(jià)值。

研究顯示，茜草及同屬植物的主要化學(xué)成分是蒽醌及其苷類[6]，此外還含有萘醌類、萜類、環(huán)己肽類及多糖等成分[7-11] 。目前關(guān)于小血藤的質(zhì)量控制尚不完善，在《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2003版）中沒有建立小血藤的定性鑒別和檢查項(xiàng)等，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)簡(jiǎn)單，限制了其應(yīng)用和開發(fā)。因此，本研究通過收集不同批次的小血藤藥材（包括三種不同的茜草），通過開展三種不同茜草的性狀研究，鑒別研究（顯微、薄層），有關(guān)檢查項(xiàng)目研究（水分、總灰分、浸出物），建立共性的小血藤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為完善小血藤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 儀器 超聲波清洗儀（上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠），XTP-A500多功能粉碎機(jī)（永康市紅太陽機(jī)電有限公司），EL204電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），WP-MP-II-20實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（四川沃特爾科技發(fā)展有限公司），青島海洋硅膠G板（青島海洋化工廠分廠），煙臺(tái)黃海江友硅膠G板（煙臺(tái)黃海江友化工廠），青島鼎康硅膠G板（青島鼎康化工廠），REPROSTAR3薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司），DK-98-Ⅱ型水浴鍋和DH600BII恒溫箱（天津泰斯特儀器有限公司），ProskitPD-153游標(biāo)卡尺購自上海寶工工具有限公司，微量滴定管3 mL（分度值0.01 mL）、擴(kuò)散皿（標(biāo)準(zhǔn)）、鑷子、載玻片、蓋玻片、酒精燈等。

1.1 試劑 無水乙醇、95%乙醇、甲醇、水合氯醛、硼酸、碳酸鉀、甘油及溴甲酚綠指示劑（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），三氯甲烷、冰醋酸、丙酮、正丁醇（上海試四赫維化工公司），茚三酮、甲基紅指示劑（上海馨晟試化工科技有限公司），丙三醇購（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司），阿拉伯樹膠（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），鹽酸（重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司），無水碳酸鈉基準(zhǔn)試劑（天津市化學(xué)試劑研究所有限公司），以上試劑均為分析純。

1.2 試藥 本品橫切面和粉末性狀的顯微鑒別所用樣本來至于貴州不同地區(qū)收集的6批小血藤藥材樣品，樣品均由貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院中藥民族藥標(biāo)本館龍慶德副教授鑒定為茜草科植物金劍茜草Rubia alata Roxb.、大葉茜草Rubia schumanniana Pritzel或鉤毛茜草Rubia oncotricha Hand.-Mazz.的干燥根及根莖，憑證標(biāo)本存放于貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。來源見表1。（其中20170819作為對(duì)照藥材）

2 方法與結(jié)果

2.1 原植物形態(tài) 小血藤為三種不同茜草的根及根莖，植物形態(tài)中葉片材質(zhì)、葉基部形狀、花序、果實(shí)顏色、大小等存在一定差異，根據(jù)中國植物志記載[12]，總結(jié)其原植物的特征差異，見表2。

2.2 性狀鑒定 參照2003版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，對(duì)采集來的6批藥材樣品除去雜質(zhì)、曬干后，采用標(biāo)尺對(duì)小血藤的大小進(jìn)行測(cè)量，用看、摸、聞、嘗等方法對(duì)樣品進(jìn)行顏色、形狀、表面、質(zhì)地、氣味、斷面的外觀鑒定。

其藥材在形狀上相似，如圖2所示。根莖結(jié)節(jié)狀，叢生多條細(xì)根。根長(zhǎng)圓柱形，略彎曲，長(zhǎng)10～30 cm，直徑0.2～1 cm;表面紅棕色或暗棕色，具細(xì)縱皺及少數(shù)細(xì)根痕;皮部脫落處黃紅色。質(zhì)脆，易折斷，斷面平坦，皮部狹窄，紫紅色，木部寬廣，淺黃紅色，可見多數(shù)小孔。氣微，味微苦，久嚼刺舌。

2.3 顯微鑒別 采用直接切片法，將根切到一層細(xì)胞的厚度，置于載玻片上，滴加水合氯醛透化，再滴加稀甘油。蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察，拍照記錄。篩選小血藤粉末少許在載玻片上，滴加水合氯醛加熱透化，再滴加稀甘油。蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察，拍照記錄。通過觀察多批小血藤根的橫切面，選擇其中有代表性的結(jié)果，如圖3～4所示，但三種來源間的橫切面的木栓層、木栓內(nèi)層、韌皮部、木質(zhì)部均存在差異，見表3。

根據(jù)對(duì)小血藤三種來源的粉末進(jìn)行觀察后，發(fā)現(xiàn)三者的粉末顏色都呈灰褐色，進(jìn)行顯微觀察后，能明顯的觀察到草酸鈣針晶、導(dǎo)管、木栓細(xì)胞等，如圖4～5所示。但針晶、導(dǎo)管、木栓細(xì)胞等均存在差異，根據(jù)顯微鑒別后總結(jié)出其異同點(diǎn)，見表4。

通過對(duì)多批樣品的粉末進(jìn)行觀察和測(cè)量，其粉末的顯微鑒別特征總結(jié)如下：本品粉末棕褐色。木栓細(xì)胞呈類方形或多角形，壁增厚。草酸鈣針晶散在或成束，長(zhǎng)20～250 μm。具緣紋孔導(dǎo)管多見，直徑20～300 μm，如圖5所示。

2.4 薄層色譜鑒別 取本品粉末0.5 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取小血藤對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以石油醚-丙酮（8∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。按照擬定的的薄層色譜鑒別方法，對(duì)6批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果圖6所示，來源于金劍茜草、大葉茜草和鉤毛茜草的小血藤的薄層色譜主斑點(diǎn)幾乎一致，但也存在一定的差異，尤其是大葉茜草，提示其所含成分種類及含量存在差異，還有待進(jìn)一步深入研究。

2.5 水分、總灰分及浸出物檢查 取本品粉末（過二號(hào)篩）2 g，水分照《中國藥典》2015年版通則0832水分測(cè)定法（第二法烘干法）測(cè)定。6批小血藤中含水量分為8.90%～10.08%，平均值9.52%，故暫定本品水分不得過12.0%。見表5。取本品粉末2 g，照《中國藥典》2015年版通則2302灰分測(cè)定法測(cè)定。6批小血藤中總灰分為11.1%～12.7%，平均值11.8%，暫定本品總灰分不得過15.0%。見表5。

取本品粉末（過二號(hào)篩）2 g，精密稱定，置100 mL的錐形瓶中，照《中國藥典》2015年版四部通則2201浸出物測(cè)定法中，水溶性浸出物測(cè)定法-熱浸法，采用水為溶劑進(jìn)行浸出物測(cè)定，以浸出物作為本品質(zhì)量控制指標(biāo)之一。6批干小血藤水溶性浸出物為12.83%～16.55%，平均值14.93%，暫定本品水溶性浸出物不得少于12.0%。見表5。

3 討論

中藥顯微鑒定是通過顯微技術(shù)確定中藥品種和質(zhì)量的一種鑒定方法，是目前中藥材鑒別的主要方法之一[12]。本研究通過對(duì)小血藤三種不同來源的根的橫切面進(jìn)行顯微鑒定，發(fā)現(xiàn)其木栓層、木栓內(nèi)層、韌皮部、木質(zhì)部及薄壁細(xì)胞中的草酸鈣針晶均有不同，粉末中的導(dǎo)管的大小也有明顯的區(qū)別。上述差異有助于對(duì)三種茜草加以區(qū)別，進(jìn)一步完善了小血藤藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

從性狀研究來看，三種茜草根及根莖的性狀無顯著差異。為了方便小血藤藥材的采集并對(duì)三種茜草加以區(qū)分，研究發(fā)現(xiàn)三種茜草在植物形態(tài)和顯微鑒別上存在一定的差異。從植物形態(tài)上看，大葉茜草葉片較寬，呈厚紙質(zhì)至革質(zhì);金劍茜草葉片呈薄革質(zhì)，線形或披針狀線形;鉤毛茜草葉片近紙質(zhì)，其主要特征是全株均密被灰色硬毛，毛的末端作彎鉤狀。

在薄層色譜研究中，還考察專屬性和耐用性。分別考察青島海洋硅膠G板、青島鼎康硅膠G板和煙臺(tái)黃海硅膠HSG板的展開效果，三個(gè)品牌的硅膠G板中，青島海洋與青島鼎康硅膠G板的分離度基本一致，說明其耐用性較好，煙臺(tái)江友黃海硅膠HSG板是高效板，其分離開的斑點(diǎn)較其它兩種普通硅膠G板多，從經(jīng)濟(jì)適用的角度選擇普通硅膠G板。同時(shí)，分別以不同濃度硫酸調(diào)節(jié)的展開環(huán)境相對(duì)濕度為32%、52%、72%，在25℃溫度下分別考察不同相對(duì)濕度展開的效果。結(jié)果顯示，雖不同濕度下色譜圖的條帶清晰，Rf值有一定差異，但仍能較好鑒別藥材，說明該濕度范圍耐用性較好。分別在相對(duì)濕度58%的條件下，考察10 ℃、25 ℃、35 ℃不同溫度對(duì)薄層展開的影響，結(jié)果顯示，不同溫度下色譜圖的條帶清晰，Rf值差異不明顯，說明該藥材受溫度的影響不大。進(jìn)一步對(duì)供試品的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，將同一批次的本品粉末于3天前、2天前、1天前、當(dāng)天按擬定的方法制備供試品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，展開，顯色。結(jié)果顯示，放置1～3天的供試品溶液展開后的色譜圖基本一致，各斑點(diǎn)無差異?？梢娝⒌谋由V鑒別方法色譜斑點(diǎn)清晰、無干擾、專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、耐用性強(qiáng)。

在對(duì)水分、總灰分、浸出物和含量測(cè)定的限量測(cè)定中，6批小血藤的含水量平均值為9.52%，初步擬定本品水分不超過12.0%;總灰分的平均值為11.8%，初步擬定本品總灰分不超過15.0%;水溶性浸出物的平均值為14.93%，初步擬定本品水溶性浸出物不得少于12.0%。

綜上，本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)地研究了小血藤性狀特征、顯微特征、薄層色譜特征、水分、總灰分和浸出物含量，為小血藤的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

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（收稿日期：2020-10-07 編輯：程鵬飛）