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    不同碳氮源對長根菇菌絲生長的影響*

    2021-07-10 01:52:06趙曉朋汪建文
    貴州科學 2021年3期
    關鍵詞:碳氮比氮源碳源

    熊 雪,李 鵬,向 準▲,趙曉朋,汪建文

    (1貴州省生物研究所,貴州 貴陽 550009;2貴陽學院,貴州 貴陽 550002;3貴州科學院,貴州 貴陽 550001)

    長根菇(Oudemansiellaradicata)屬于白蘑科、奧德蘑屬,又名長根奧德蘑、長根金錢菌、長根小奧德蘑等[1-2]。其菌肉白色而薄,味道鮮美,口感細嫩,富含多糖、蛋白質、氨基酸、脂肪、維生素等營養(yǎng)成分,深受消費者喜歡[1-3]。同時其特有的長根菇素對高血壓患者有明顯的降低血壓的作用,其多糖成分對腫瘤有明顯的抑制作用[3-6],是一種優(yōu)質的食藥用真菌[7],具有極大的研究價值。長根菇分布地廣,在我國云南、河北、吉林、江蘇、安徽、福建、廣西、四川、西藏等大部分地區(qū)均有分布[8]。但由于長根菇栽培中需培土栽培,可重復性差、產量較低、病蟲害嚴重,目前還很難實行規(guī)?;耘郲8]。因此,本文探索不同碳源、氮源對長根菇菌絲生長的影響,挑選較為適宜其生長的營養(yǎng)條件、溫度條件,為培育高質量的長根菇菌絲奠定基礎,為實現長根菇的規(guī)?;a提供科學依據。

    1 材料與方法

    1.1 供試菌株

    供試長根菇菌株保藏于貴州省生物研究所。

    1.2 實驗培養(yǎng)基

    活化培養(yǎng)基:馬鈴薯(去皮)200 g,葡萄糖20 g,KH2PO43 g,MgSO4·7H2O 1.5 g,維生素B110 mg,瓊脂粉20 g,去離子水1000 mL,pH自然。

    基礎培養(yǎng)基:葡萄糖 20 g,(NH4)2SO42 g,KH2PO41 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,維生素B110 mg,瓊脂20 g,去離子水1000 mL。

    1.3 試驗方法

    1.3.1 菌種活化

    制備長根菇活化培養(yǎng)基平板10個,無菌環(huán)境下將試管母種接種到長根菇活化培養(yǎng)基平板上(接種至平板的中心位置),25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)活化備用。

    1.3.2 不同碳源試驗

    以長根菇基礎碳源培養(yǎng)基為對照,分別以等量果糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖代替基礎培養(yǎng)基中的葡萄糖,作為不同碳源培養(yǎng)基,每處理5次重復,將菌絲長至平板三分之二的活化平板用5 mm的打孔器將菌落打成圓片,然后接種于不同碳源平板的中心位置,25 ℃下進行培養(yǎng),待菌絲萌發(fā)后開始采用劃線法每日標記菌落直徑(十字交叉法),培養(yǎng)至菌絲長滿或停止生長,測量菌落直徑。菌絲鋪滿平板時,觀察記錄菌落的菌絲形態(tài)、色澤、菌落形狀、菌絲長勢和邊緣特征等,用“+”“-” 表示菌絲的長勢,“+” 越多表示菌絲生長得越好、越健壯、均勻,“-”表示菌絲不生長。

    1.3.3 不同氮源試驗

    以等量的蛋白胨、酵母膏、谷氨酸、硝酸鉀、尿素分別代替基礎氮源培養(yǎng)基中的氮源硫酸銨,每處理5次重復。后續(xù)操作同1.3.2。

    1.3.4 不同碳氮比試驗

    在固定溫度培養(yǎng)基中調整碳氮比進行試驗,碳源為葡萄糖,氮源為蛋白胨,碳源濃度為2%,添加不同重量蛋白胨,配成碳氮比10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1、80∶1、90∶1和100∶1(蛋白胨含碳量忽略不計)的培養(yǎng)基,每處理5次重復。后續(xù)操作同1.3.2。

    1.3.5 不同溫度試驗

    將菌絲長至平板三分之二的活化平板用5 mm的打孔器將菌落打成圓片,然后接種于長根菇活化培養(yǎng)基上,將接種好的平板分別放置在15 ℃、18 ℃、20 ℃、23 ℃、25 ℃、27 ℃、30 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每處理5次重復。其余操作同1.3.2。

    1.4 數據統(tǒng)計

    實驗數據采用EXCLE及PASW Statistics 18.0統(tǒng)計軟件進行分析。

    2 結果與分析

    2.1 不同碳源對長根菇菌絲生長的影響

    如表1所示,對于試驗所選5種不同碳源,長根菇接種培養(yǎng)48 h后均能萌發(fā),且正常吸收,菌絲鋪滿平板后為絨毛狀白色圓形菌落。但不同碳源培養(yǎng)下日均生長速度不同,蔗糖、乳糖為碳源培養(yǎng)時,速度顯著快于其他處理,平板鋪滿時間也最短,菌絲萌發(fā)后鋪滿平板僅需8 d,且長勢最佳;碳源為果糖時,生長速度顯著低于其他處理,鋪滿時間最長(11 d),且長勢最差。整體呈現蔗糖(10.00 mm/d)>乳糖(9.96 mm/d)>麥芽糖(8.81 mm/d)>葡萄糖(8.50 mm/d)>果糖(7.60 mm/d)的趨勢。綜上所述,在5種供試碳源中,長根菇菌絲生長最佳碳源為蔗糖,其次為乳糖、麥芽糖。

    表1 不同碳源對長根菇菌絲生長的影響Tab.1 Effect of different carbon sources on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

    2.2 不同氮源對長根菇菌絲生長的影響

    如表2所示,長根菇菌絲在所選6種氮源培養(yǎng)下,菌落表現有差異。氮源為尿素時,菌絲不生長,其余5種氮源培養(yǎng)基,接種培養(yǎng)48 h后菌絲萌發(fā),菌落為絨毛狀白色圓形菌落。菌絲日均生長速度呈現出酵母膏(10.06 mm/d)>硝酸鉀(9.89 mm/d)>蛋白胨(9.88 mm/d)>谷氨酸(9.67 mm/d)>硫氨酸(8.87 mm/d)>尿素(0 mm/d)。其中,菌落長勢最好的為酵母膏,萌發(fā)后鋪滿平板時間也最短(8 d);菌落長勢較差的為硫酸銨,鋪滿平板時間最長(10天)。綜上可知,長根菇的最佳氮源為酵母膏,其次為硝酸鉀和蛋白胨,不能吸收尿素。

    表2 不同氮源對長根菇菌絲生長的影響Tab.2 Effect of different nitrogen sources on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

    2.3 不同碳氮比對長根菇菌絲生長的影響

    結合表3、圖1可知,在所設10∶1~100∶1碳氮配比范圍間,長根菇接種培養(yǎng)48 h后均可萌發(fā),長滿平板后菌落呈絨毛狀白色圓形菌落。菌絲生長速度存在一定差異,隨著碳源的增加,整體呈波浪式增長。碳氮比為40∶1、60∶1、100∶1時,菌落長勢較好且快,僅需8 d鋪滿平板;其余處理下菌落長勢相當,速度較慢,需9 d方能鋪滿平板。在碳氮比為40∶1時菌絲日均生長速度最快(11.53 mm/d),在碳氮比為10∶1時菌絲日均生長速度最慢(9.14 mm/d)。綜上可知,碳源為葡萄糖,氮源為蛋白胨時,長根菇對碳氮配比的要求不嚴,均能較快的生長,其中最佳碳氮比為40∶1。

    表3 不同碳氮比對長根菇菌絲生長的影響Tab.3 Effect of different carbon-nitrogen ratios on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

    圖1 不同碳氮比對長根菇菌絲生長速度的影響Fig.1 Effect of different carbon-nitrogen ratios on the mycelial growth speed of Oudemansiella radicata

    2.4 不同溫度對長根菇菌絲生長的影響

    如表4、圖2所示,在不同溫度條件下,長根菇菌絲生長過程表現出明顯差異。隨著溫度的增加,菌絲生長速度整體呈現先增后減的趨勢,其中23 ℃下菌絲生長最快(8.84 mm/d),15 ℃下菌絲生長最慢(6.63 mm/d)。15~20 ℃下,菌絲生長慢、長勢差,萌發(fā)后所需鋪滿時間也較長。23~25 ℃條件下,菌絲僅需48 h方可萌發(fā),萌發(fā)后10 d內鋪滿平板,整體長勢較好。27~30 ℃條件下,菌絲萌發(fā)時間晚,但生長速度快,整體長勢一般。綜上可知,長根菇菌絲生長對溫度條件的適應范圍較廣,15~30 ℃均能正常萌發(fā),且生長速度較快,但結合菌絲長勢及萌發(fā)時間可得,最適宜長根菇生長的溫度為23~25 ℃。

    表4 不同溫度對長根菇菌絲生長的影響Tab.4 Effect of different temperature on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

    圖2 不同溫度對長根菇菌絲生長的影響Fig.2 Effect of different temperature on the mycelial growth of Oudemansiella radicata

    3 結論與討論

    在以往國內學者對長根菇的研究中,或深或淺都有提到長根菇菌絲生長階段對碳氮源的吸收較為廣泛[9-10]。本文也證實了這一點,在試驗所選5種碳源、7種氮源中,除氮源尿素外,長根菇菌絲對其他氮源都能較好的吸收,且對酵母膏的吸收是最好的,這一點同李建宗的研究結果相同,不同的是長根菇菌絲對碳源乳糖的吸收與否存在較大差異,這很有可能因地方上長根菇品種上的差異造成的,但具體原因需更進一步的研究。樊有賦等人研究長根菇鱗柄變種的營養(yǎng)條件得到,長根菇鱗柄變種同樣能吸收碳源乳糖,且最佳氮源為硫酸銨和牛肉膏[11],這同本文及李建宗的研究結果有相似也有差異的地方,品種可能是造成這類差異的首要原因之一。本研究還發(fā)現長根菇菌絲生長對碳氮比要求不嚴,碳氮比10∶1~100∶1均能較好、較快的生長,最適碳氮比為40(葡萄糖)∶1(蛋白胨),且菌絲在15~30 ℃下均能萌發(fā)且較快生長,有較廣的適溫范圍。綜上說明長根菇菌絲生長對碳氮源的種類及配比選擇都較為廣泛,對溫度的適應范圍也廣,在生產中,該菌種母種生產應是易于把握的。但實際上長根菇目前仍無法實現較為大規(guī)模的種植推廣,這難關很大可能集中在子實體原基的形成和子實體的生長上,具體需要更進一步對長根菇栽培技術進行系統(tǒng)的研究。

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