血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測在肺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值探究

馬慧霞

（高臺縣人民醫(yī)院，甘肅 高臺 734300）

目前全球死亡率最高的惡性腫瘤為肺癌，肺癌篩查指南將已知肺癌易感基因，1 級親屬中有慢性肺病史或肺癌家族史、至少存在煙草相關(guān)腫瘤的既往史，年齡超過50 歲、每年吸煙大于20 包（既往或目前吸煙），年齡在55～74 歲之間，每年吸煙大于30 包（15 年內(nèi)吸煙或目前正在吸煙）中的1 條即可定義為高危人群，其肺癌患病率較普通人群明顯升高[1]。中國原發(fā)性肺癌臨床診療流程于2015 年將有關(guān)肺癌的血清標(biāo)志物檢測推薦為門診篩查肺癌的檢查之一[2]。而癌胚抗原（Carcinoembryonic Antigen，CEA）、細(xì)胞角蛋白21 片段抗原（Cytokeratin fragment 21-1，Cyfra21-1）、鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原（Squamous Cell Carcinoma Antigen，SCC-Ag）、胃泌素釋放肽前體（Progastrin-Releasing Peptide，ProGRP）被美國臨床生化委員會和歐洲腫瘤標(biāo)志物專家組推薦為診斷肺癌常用標(biāo)志物[3]。為明確其診斷價(jià)值，本研究對肺癌患者血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 表達(dá)水平進(jìn)行檢測，并通過ROC 曲線分析上述指標(biāo)單獨(dú)及聯(lián)合檢測對肺癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 資料

將2018 年1 月—2020 年6 月于高臺縣人民醫(yī)院確診并接受治療的120 例肺部疾病患者作為研究對象，其中60 例肺癌患者作為肺癌組，60 例良性肺疾病患者作為良性肺病組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者經(jīng)病理學(xué)檢查確診為肺癌或良性肺疾??；（2）所有患者配合本次研究并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）無組織病理學(xué)檢測結(jié)果患者；（2）腎功能異常患者（內(nèi)生肌酐清除率不足60 mL/min 或血肌酐超過1.5 倍正常上限）；（3）已接受肺切除手術(shù)、靶向治療或相關(guān)化療患者。肺癌組患者年齡40～75 歲，平均年齡（56.38±4.21）歲；男32 例，女28 例；肝腎功能正常；吸煙時間20～25 包年，平均（22.34±2.13）包年。良性肺疾病組年齡42～78 歲，平均年齡（57.12±4.23）歲；男31 例，女29 例；肝腎功能正常；吸煙時間20～27 包年，平均（23.11±2.14）包年。2 組患者年齡、肝腎功能、吸煙時間、性別等資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 試劑與儀器

恒溫?fù)u床（武漢科學(xué)儀器廠），HD-2001A 型生物芯片檢測儀、生物芯片圖像分析系統(tǒng)軟件、蛋白芯片試劑盒均購自浙江湖州數(shù)康生物科技有限公司，數(shù)碼恒溫電熱水浴箱購自北京長風(fēng)儀器儀表公司。

1.3 標(biāo)本采集

入院當(dāng)天經(jīng)肘靜脈采集患者血液10 mL，置于5 mL 血清管中，保存于4 ℃冰箱內(nèi)。以3 000 r/min速度離心15 min，取上層血清置于EP 管內(nèi)，再保存于-80 ℃冰箱內(nèi)，檢測肝腎功能、血清CEA（參考值低于5 μg/L）、Cyfra21-1（參考值低于2.08 μg/L）、SCC-Ag（參考值低于1.5 μg/L）、ProGRP（參考值低于65 ng/L）水平。

1.4 檢測方法

將各100 μL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品及待測血清分別加到不同蛋白芯片分隔內(nèi)，再置于37 ℃水浴箱中溫浴半小時，再將孔內(nèi)液體倒去，芯片格內(nèi)加入200 μL 洗滌液，超聲震蕩洗滌8 min，再將洗滌液倒去，同樣步驟洗滌4 次；將100 μL 反應(yīng)液加入芯片小方格內(nèi)，置于37 ℃水浴箱內(nèi)溫育半小時，再將液體棄去，同以上步驟洗滌2 次；將蛋白芯片集成塊上部剝離，20 μL等體積液加入每個芯片的膜表面并靜置2 min。蛋白芯片內(nèi)數(shù)據(jù)使用生物芯片檢測儀讀取，圖像分析系統(tǒng)軟件自動讀取圖像，將各被測樣本結(jié)果進(jìn)行分析，并打印數(shù)據(jù)報(bào)表[4]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

利用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行錄入和分析數(shù)據(jù)，血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 水平不符合正態(tài)分布，采用Mann-Whitney U 非參數(shù)檢驗(yàn)；為計(jì)數(shù)資料以例（n）或率（%）表示，行卡方檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌患者及良性肺部疾病患者血中4 種腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平

肺癌組患者血清CEA、Cyfra21-1 水平較良性肺病 組明顯升高（P<0.05），2 組患者血清SCC-Ag、ProGRP 水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

表1 肺癌患者及良性肺部疾病患者血中4 種腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平（）

表1 肺癌患者及良性肺部疾病患者血中4 種腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平（）

2.2 血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 陽性率

血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 在肺癌患者和良性肺病患者血清中的陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

表2 血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 陽性率

續(xù)表2

2.3 腫瘤標(biāo)志物預(yù)測肺癌的特異性及敏感性

單獨(dú)檢測時，Cyfra21-1 的敏感性（93.33%）最高，特異性（73.3%）明顯較低，ProGRP 特異性（96.67%）最高，但是敏感性僅為28.33%；Cyfra21-1 單獨(dú)診斷肺癌的AUCROC為0.868，較CEA、SCC-Ag、ProGRP 單獨(dú)診斷高。CEA 與Cyfra21-1 聯(lián)合檢測時敏感性為88.30%，特異性為90.00%，AUCROC為0.939，高于其他兩種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測。CEA、Cyfra21-1、ProGRP 聯(lián)合檢測時AUCROC為0.948，敏感性為92.67%，特異性為88.33%，高于其他三項(xiàng)聯(lián)合檢測。4 種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測特異性提高至96.12%，敏感性為88.33%，AUCROC高至0.971，診斷價(jià)值最優(yōu)，見表3，如圖1 所示。

表3 腫瘤標(biāo)志物單獨(dú)檢測及聯(lián)合檢測診斷肺癌的特異性、敏感性及AUCROC

圖1 血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 單獨(dú)與聯(lián)合檢測診斷肺癌的ROC 分析結(jié)果

3 討論

目前肺癌死亡率在我國惡性腫瘤中位于首位，也是全球較為常見的惡性腫瘤[5]。但是肺癌的病因較為復(fù)雜，尚不清楚其具體作用機(jī)制，臨床表現(xiàn)具有個體差異，缺乏特異性。即使科學(xué)技術(shù)水平及醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展，新的治療方法及診斷方式不斷出現(xiàn)，但是早期發(fā)現(xiàn)肺癌仍舊較為困難[6]。多數(shù)患者確診時已發(fā)展為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或局部晚期，失去最佳治療時機(jī)[7]。故如何提高肺癌檢測的準(zhǔn)確性及敏感性對患者預(yù)后意義重大。

腫瘤標(biāo)志物為腫瘤細(xì)胞特有，通過腫瘤細(xì)胞大量分泌后進(jìn)入體液，僅在胚胎中存在，但是在正常組織中含量較低。腫瘤標(biāo)志物水平與腫瘤組織的活躍、增生密切相關(guān)。在肺癌早期診斷和早期發(fā)現(xiàn)中腫瘤標(biāo)志物的作用已被臨床廣泛關(guān)注，但是，目前用于肺癌檢測的標(biāo)志物為相關(guān)標(biāo)志物，且臨床使用單一腫瘤標(biāo)志物診斷肺癌的價(jià)值受限，應(yīng)用多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測能夠極大地提高診斷的準(zhǔn)確性及檢測的敏感性[8]。有研究表明，血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測可提高中國人群肺結(jié)節(jié)診斷的特異性和敏感性。本研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者血清中CEA、Cyfra21-1水平明顯高于良性肺疾病患者，SCC-Ag、ProGRP 在良性肺疾病患者及肺癌患者中血清的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；另外，血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 在肺癌患者及良性肺疾病患者中的陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見，若使用單一腫瘤標(biāo)志物診斷肺癌易出現(xiàn)誤診、漏診情況。本研究還發(fā)現(xiàn)，4 項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物單獨(dú)檢測診斷肺癌的特異性均超過60%，但是敏感性較低；而血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 這4 項(xiàng)聯(lián)合檢測AUC 最高，不僅可保持對肺癌診斷的較高特異性，還能提高敏感性，表明四者聯(lián)合對肺癌的診斷價(jià)值最優(yōu)，具有較高特異性，且可減少漏診。

綜上所述，血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、Pro-GRP 等腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測可有效提高對肺癌的診斷價(jià)值。