復(fù)方鱉甲軟肝片治療肝纖維化的機(jī)制研究

邱玲玲 陳雯 支星 肖瑩

九江職業(yè)大學(xué)護(hù)理學(xué)院，江西 332000

肝纖維化是肝臟遭到各種致病原侵襲，引起肝臟損害與炎性反應(yīng)后，導(dǎo)致肝臟結(jié)構(gòu)和肝功能異常改變的病理過(guò)程。在慢性肝病-肝纖維化-肝硬化的病情演變過(guò)程中，肝纖維化是關(guān)鍵的中間環(huán)節(jié)。如何有效地阻斷肝纖維化的發(fā)生發(fā)展，積極治療和逆轉(zhuǎn)肝纖維化，受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的高度重視，對(duì)防治肝硬化肝癌具有重要意義［1-3］。復(fù)方鱉甲軟肝片（Fufang Biejia Ruangan tablet，F(xiàn)FBJ）是原中國(guó)人民解放軍302醫(yī)院在30多年臨床治療經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上研制而成的，它是國(guó)內(nèi)第一個(gè)以治療肝纖維化和早期肝硬化為主的國(guó)家級(jí)中藥新藥，是《肝纖維化中西醫(yī)結(jié)合診療指南》［4］推薦的用于抗纖維化及早期肝硬化的藥物?，F(xiàn)已廣泛用于肝纖維化及多種臟器纖維化疾病的治療。該復(fù)方由鱉甲、莪術(shù)、三七、黃芪、赤芍、冬蟲夏草等11味中藥精制而成，組方復(fù)雜、成分繁多，但目前對(duì)FFBJ抗肝纖維化作用物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚未完全闡明。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于計(jì)算機(jī)虛擬計(jì)算、高通量組學(xué)數(shù)據(jù)分析，利用生物信息學(xué)方法，研究多成分-多靶點(diǎn)-多疾病的機(jī)制，在方法學(xué)上具有整體性、系統(tǒng)性的特點(diǎn)，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方及單味藥的研究［5］。隨著網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的完善與發(fā)展，中醫(yī)藥發(fā)揮臨床療效的分子及機(jī)制研究也逐漸變得可視化、效率化和標(biāo)準(zhǔn)化，其理論的建立為多靶點(diǎn)藥物的研究提供科學(xué)理論支持，也為研發(fā)新藥提供理論源泉［6］。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法和技術(shù)，從系統(tǒng)生物整體的角度探討FFBJ的抗肝纖維化的作用機(jī)理，構(gòu)建成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，為深入探討FFBJ抗肝纖維化的作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 活性成分的篩選口服生物利用度（OB）和類藥性（DL）是藥物篩選、評(píng)價(jià)化合物成藥性的重要的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。因此，通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)技術(shù)平臺(tái)（TCMSP）和文獻(xiàn)檢索收集復(fù)方鱉甲軟肝片11味藥的所有化合物，并根據(jù)其ADME性質(zhì)進(jìn)行篩選，以O(shè)B≥30%和DL≥0.18為篩選標(biāo)準(zhǔn)，篩選出活性成分。

1.2 潛在作用靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)反向藥效團(tuán)匹配方法（PharmMapper）是通過(guò)對(duì)Targetbank、Drugbank、Binding DB和PDTD 4大數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行快速檢索而獲得藥物靶點(diǎn)信息。該服務(wù)器內(nèi)含7 000多個(gè)藥效團(tuán)模型，涵蓋110種臨床適應(yīng)證，具有運(yùn)算速度快、靶點(diǎn)信息全面等優(yōu)點(diǎn)。本研究挖掘TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中FFBJ活性成分的潛在靶點(diǎn)，并登陸PharmMapper服務(wù)器 （http：//www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/），上傳FFBJ的活性成分sdf格式文件，采用“反向藥效團(tuán)匹配方法”得到虛擬篩選結(jié)果，將兩部分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行整合。同時(shí)使用蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（UniProt）中UniProtKB搜索功能（https：//www.uniprot.org/），通過(guò)輸入靶點(diǎn)名稱并限定物種為人，將檢索得到的靶點(diǎn)校正為其官方名稱，經(jīng)上述數(shù)據(jù)庫(kù)檢索和轉(zhuǎn)化，獲取與活性成分相關(guān)的靶點(diǎn)信息。

1.3 肝纖維化疾病相關(guān)靶點(diǎn)獲取登錄Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.drugbank.ca）和OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//omim.org），以“Hepatic fibrosis”為關(guān)鍵詞檢索與肝纖維化相關(guān)的靶點(diǎn)基因，作為肝纖維化的靶基因。

1.4 活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析將獲得的FFBJ活性成分相關(guān)靶點(diǎn)與肝纖維化靶點(diǎn)基因相映射，使用Venn作圖分析，獲得二者交集靶點(diǎn)基因，然后使用Cytoscape 3.7.0軟件構(gòu)建中藥-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，并根據(jù)化合物與靶點(diǎn)連接情況進(jìn)行拓?fù)浞治?，預(yù)測(cè)FFBJ抗肝纖維化的關(guān)鍵活性成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.5 關(guān)鍵靶點(diǎn)的基因本體（GO）和基因組百科全書（KEGG）富集分析 GO分析主要用于注釋基因的功能，包括細(xì)胞功能、分子功能和生物功能，已被廣泛應(yīng)用于生物基因功能分類［12］。使用clusterprofiler對(duì)FFBJ治療肝纖維化的靶基因進(jìn)行GO富集分析和KEGG通路富集分析，以研究其主要生物學(xué)過(guò)程和代謝通路，以統(tǒng)計(jì)學(xué)超幾何分布定量（P值）篩選P＜0.05的生物過(guò)程及信號(hào)通路，用半編程性質(zhì)的腳本軟件Rproject繪圖將其可視化。

2 結(jié) 果

2.1 FFBJ活性成分的篩選 通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出FFBJ中的活性成分，得到符合條件的成分43個(gè)。另外，Ginsenoside Rb1、Ginsenoside Rg1、Notoginsenoside R1、Ginsenoside Re、Adenosine雖然其OB值相對(duì)較低，但有文獻(xiàn)報(bào)道這5種化合物為FFBJ中的活性成分且含量較高［5］，因此共篩選出48個(gè)活性成分，見(jiàn)表1。

表1 FFBJ的主要活性成分

2.2 FFBJ中主要活性成分的潛在作用靶點(diǎn)信息 將PharmMapper返回的各個(gè)活性成分的潛在作用靶點(diǎn)根據(jù)匹配度f(wàn)it score由高到低進(jìn)行排序，每個(gè)成分取前30個(gè)靶點(diǎn)。并與TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中整理出所有活性成分的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比分析，再將所獲得的活性成分預(yù)測(cè)靶點(diǎn)導(dǎo)入U(xiǎn)niprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因標(biāo)準(zhǔn)化，去除重復(fù)值，歸納總結(jié)篩選出931個(gè)潛在靶點(diǎn)。

2.3 肝纖維化疾病相關(guān)靶點(diǎn)獲取 使用Drugbank、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)收集到肝纖維化潛在靶點(diǎn)，合并去重復(fù)后共得到1 117個(gè)肝纖維化的相關(guān)靶點(diǎn)。

2.4 活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 將931個(gè)FFBJ化合物作用靶點(diǎn)與1 117個(gè)肝纖維化靶點(diǎn)基因進(jìn)行Venn分析，獲得藥物-疾病交集基因70個(gè)，從而得到FFBJ治療肝纖維化的相關(guān)作用靶標(biāo)，將其定義為“關(guān)鍵靶點(diǎn)”，對(duì)應(yīng)FFBJ的44個(gè)活性成分（Frutinone A、Peroxyergosterol、Ginsenoside Rg1、Perlolyrine 4個(gè)成分未找到交集靶點(diǎn)參與相互作用）。

將FFBJ的活性成分、關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape軟件，構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖1。在網(wǎng)絡(luò)圖中，綠色六邊形代表活性成分所作用的靶點(diǎn)，紫色長(zhǎng)方形代表FFBJ所含有的活性成分。分析網(wǎng)絡(luò)圖，可知網(wǎng)絡(luò)圖中共包含節(jié)點(diǎn)（node）114個(gè)，節(jié)點(diǎn)與節(jié)點(diǎn)之間的作用關(guān)系，即邊（edge）384條，展示了FFBJ治療肝纖維化多成分、多靶點(diǎn)的作用。借助Cytoscape對(duì)活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，得到自由度、介?shù)、中心度均大于平均值的成分的交集，篩選出可能是FFBJ治療肝纖維化的關(guān)鍵活性成分18 個(gè) ，即 Calycosin、Formononetin、Ginsenoside Re、alexandrin_qt、ginsenoside Rg5_qt、bisdemethoxycurcumin、Mandenol、DFV、Spinasterol、CLR、adhyperforin、7-Methoxy-2-methyl isoflavone、Mairin、ZINC03860434、quindoline、24-Ethylcholest-4-en-3-one、hyperforin、poriferast-5-en-3beta-ol。同法篩選出可能是FFBJ治療肝纖維化的關(guān)鍵靶點(diǎn)20個(gè)，即ADK、RXRA、CASP3、MMP2、CYP2C9、MAP2K1、NR3C1、FECH、NR1H4、VDR、RBP4、GC、TGFB2、NR1I2、PPARA、GRB2、IL2、SHBG、SULT2A1、NR3C2。

圖1 FFBJ活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 FFBJ治療肝纖維化作用靶點(diǎn)的GO功能分析與KEGG富集分析 70個(gè)藥物活性成分-疾病交集基因影響了92個(gè)生物學(xué)過(guò)程（P＜0.05），選取排名前20的功能信息繪制柱狀圖，如圖2。結(jié)果顯示，F(xiàn)FBJ所涉及的生物信息學(xué)功能與過(guò)程包括類固醇激素受體活性、核受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性、激素受體粘合物、肽內(nèi)切酶活性、細(xì)胞因子受體粘合物、類固醇粘合物、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性、細(xì)胞核激素受體粘合物、羧酸粘合物、有機(jī)酸粘合物、轉(zhuǎn)錄共激活劑活性、絲氨酸、蘇氨酸激酶活性等生物過(guò)程。

圖2 GO功能富集分析柱狀圖

KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)FFBJ治療肝纖維化70個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)顯著富集（P＜0.05）在128條通路上，其中包括PI3K-Akt、癌癥蛋白聚糖、絲氨酸蛋白激酶（MAPK）、乙型肝炎、前列腺癌、IL-17、內(nèi)分泌抵抗、松弛激素、FoxO、腎素、弓形蟲病通路、卡波西肉瘤聯(lián)合皰疹病毒感染、TGF-β1、PPAR與Janus激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子（JAK/STAR）等多條信號(hào)通路。圖3展示了前20位KEGG通路富集分析結(jié)果，其中參與PI3K-Akt信號(hào)通路的關(guān)鍵靶點(diǎn)數(shù)量最多，共18個(gè)，包括MAP2K1、FGFR1、GRB2、JAK2、IL2、MAPK1、PIK3CG、IGF1等，且靶點(diǎn)MAP2K1、MAPK1、MAPK8、GRB2、MAPK14在前20的信號(hào)通路里涉及10個(gè)以上的信號(hào)通路；靶點(diǎn)CASP3、TGFB2、MDM2、SRC、IGF1、MMP9、MAP2K1、FGFR1、JAK2、HSP90AA1、GSK3B、SRC、MMP2、MET、CDK在前20的信號(hào)通路里涉及5個(gè)以上的信號(hào)通路。

圖3 FFBJ治療肝纖維化關(guān)鍵靶點(diǎn)參與的通路富集信息氣泡圖

3 討 論

復(fù)方鱉甲軟肝片由鱉甲、赤芍、冬蟲夏草、三七、紫河車、黃芪、當(dāng)歸、連翹、莪術(shù)、黨參、板藍(lán)根11味中藥組成，是首個(gè)用于肝纖維化治療的中藥制劑，其臨床療效顯著。因

此，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，借助數(shù)據(jù)庫(kù)和軟件對(duì)FFBJ抗肝纖維化的作用機(jī)制進(jìn)行探討具有重要意義。

采用Cytoscape 3.7.0軟件構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行拓?fù)浞治?，共預(yù)測(cè)到FFBJ治療肝纖維化的18個(gè)活性成分和20個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)。通過(guò)Rproject對(duì)靶點(diǎn)基因進(jìn)行GO富集分析和KEGG代謝通路分析，得到GO中92個(gè)生物過(guò)程條目和128條KEGG通路。圖1表明，F(xiàn)FBJ抗肝纖維化的活性成分和靶基因之間是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，交互作用顯著，可見(jiàn)FFBJ治療肝纖維化具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)。李艷等［7］表明黃芪的主要成分為黃酮類，可通過(guò)抗脂質(zhì)過(guò)氧化，減少肝細(xì)胞變性、壞死，產(chǎn)生抗肝纖維化作用。本研究得到的活性成分中的毛蕊異黃酮、芒柄花素度值較高（依次為10、18），均屬于黃芪黃酮類成分，這就從理論上印證上述研究結(jié)果。Yuan等［8］發(fā)現(xiàn)人參皂苷、三七皂苷可通過(guò)Notch、TGF-β1/Smad3等信號(hào)通路顯著抑制肝成纖維細(xì)胞發(fā)揮抗肝纖維化作用，而本研究也預(yù)測(cè)出了抗肝纖維化的皂苷類成分如人參皂苷Re、人參皂苷Rg5。此外筆者還發(fā)現(xiàn)FFBJ中未見(jiàn)報(bào)道的Mandenol、bisdemethoxycurcumin、adhyperforin、Mairin、Spinasterol、7-Methoxy-2-methyl isoflavone、CLR、ZINC03860434、quindoline、hyperforin 24-Ethylcholest-4-en-3-one度值較大（大于9），連接靶點(diǎn)多、類藥性也較高，提示這些化合物也可能是FFBJ潛在的抗肝纖維化活性成分，有必要進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)驗(yàn)證。

Venn分析得到FFBJ作用靶點(diǎn)與肝纖維化靶點(diǎn)的交集基因共70個(gè)，經(jīng)拓?fù)浞治龅玫?0個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，其中MAP2K1、NR3C1、FECH、RXRA、RBP4、TGFB2、PPARA（大于8）等靶基因度值較大，可能是FFBJ治療肝纖維化的重要靶點(diǎn)。進(jìn)一步提煉FFBJ治療肝纖維化的生物學(xué)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)其涉及類固醇激素受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性、細(xì)胞因子受體黏合物、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性、絲氨酸/蘇氨酸激酶活性等生物過(guò)程，這與肝纖維化疾病的發(fā)展有一定關(guān)聯(lián)性。另外，通過(guò)對(duì)70個(gè)交集基因進(jìn)行KEGG信號(hào)通路富集分析，發(fā)現(xiàn)128條信號(hào)通路與肝纖維化的發(fā)病顯著相關(guān)（均P＜0.05），包括PI3K-Akt、癌癥蛋白多糖、MAPK、乙型肝炎、IL-17、TGF-β1、PPAR、JAK/STAT等信號(hào)通路。而拓?fù)浞治龅玫降年P(guān)鍵靶點(diǎn)在上述信號(hào)通路中多次富集，如靶點(diǎn)RXRA、CASP3、MMP2、MAP2K1、TGFB2、GRB2、IL2。肝纖維化主要病理特征為細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）分泌增加以及降解減少，引起ECM大量沉積，而肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）是分泌ECM的主要效應(yīng)細(xì)胞，在肝纖維化過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。肝纖維化是多種細(xì)胞因子和多條信號(hào)通路共同參與、交互作用的復(fù)雜過(guò)程，從而實(shí)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)肝纖維化的可能。盧瑋等［9］綜述肝纖維化相關(guān)重要的 主要信號(hào)通路，如MAPK、PI3K/Akt、IL-17、TGF-β1、PPAR、JAK/TAT等信號(hào)通路。這與本研究中FFBJ肝維化靶點(diǎn)的KEGG代謝通路富集結(jié)果幾乎一致，表明FFBJ具有多靶點(diǎn)、多通路抗肝纖維化的潛能。

TGF-β1/Smads信號(hào)通路是TGF-β1促纖維化作用中最經(jīng)典的途徑，通過(guò)作用于HSC表面的TGF-β1受體進(jìn)而引發(fā)促纖維化效應(yīng)，在HSC的活化與增殖、ECM的沉積和肝纖維化的發(fā)展過(guò)程中具有重要意義。本研究中GO富集分析的生物學(xué)過(guò)程也涉及TGF-β1轉(zhuǎn)錄因子活性和關(guān)鍵靶點(diǎn)TGFB2。研究表明FFBJ藥物血清能顯著抑制HSC分泌TGF-β1，抑制肝Kupffer細(xì)胞活化，起到抗肝纖維化的作用［10］。且試驗(yàn)證實(shí)黃芪總黃酮、黃芪多糖、黃芪甲苷、莪術(shù)油、赤芍總苷（芍藥苷）、人參皂苷、阿魏酸鈉均可通過(guò)抑TGF-β1/Smad信號(hào)通路的激活，下調(diào)TGF-β1、Smad2等蛋白使得HSCs的活化受到抑制［11-12］。此外，F(xiàn)FBJ中動(dòng)物藥成分如蟲草多糖、鱉甲水煎液均有報(bào)道通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β1下游信號(hào)通路，減少ECM的合成，達(dá)到治療肝纖維化的效果［13］。

MAPK能夠通過(guò)HSC活化、增殖、凋亡等過(guò)程參與肝纖維化的形成與逆轉(zhuǎn)，包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）、p38 MAPK和c-Junnh2末端激酶（JNK）3大類，是介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的高度保守調(diào)節(jié)因子。Li等［14］報(bào)道黃芪甲苷Ⅳ通過(guò)抑制氧化應(yīng)激的產(chǎn)生和相關(guān)的p38MAPK活化來(lái)抑制HSC活化，Boye等［15］認(rèn)為黃芪甲苷可通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β1/Smad途徑改善肝纖維化和肝細(xì)胞癌。

JAK/STAT信號(hào)通路是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一條重要的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，該通路參與多種細(xì)胞的炎性反應(yīng)并調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡，是眾多細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的共同途徑。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示三七總皂苷能夠降低肝纖維化大鼠血清中AST、ALT的表達(dá)，下調(diào)肝組織中α-SMA、TGF-β1的水平，其作用機(jī)制可能是通過(guò)JAK/STAT信號(hào)通路誘導(dǎo)HSCs凋亡，產(chǎn)生抗纖維化作用［16］。

PPAR-γ信號(hào)通路是抗肝纖維化的重要信號(hào)通路，可維持HSC處于靜止?fàn)顟B(tài)，一旦PPAR-γ基因被抑制，PPAR-γ的表達(dá)減少，HSC轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顮顟B(tài)。此外，還有研究表明，PPAR-γ激動(dòng)劑可以抑制TGF-β1所誘導(dǎo)的ECM表達(dá)上調(diào)，發(fā)揮其抗纖維化作用。成揚(yáng)和汪美鳳［17］證實(shí)黃芪提取物可通過(guò)PPAR-γ和RXR信號(hào)通路產(chǎn)生抗大鼠肝纖維化的作用。孫利兵［18］發(fā)現(xiàn)含有槲皮素和毛蕊異黃酮的沙苑子黃酮（FAC）能抑制β-catenin的表達(dá)而導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路下游靶細(xì)胞PPAR-γ表達(dá)增加，進(jìn)而抑制HSC的增殖。

特異性阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路能夠抑制HSC的增殖、遷移，促進(jìn)HSC的凋亡。在本研究中，PI3K-Akt信號(hào)通路上富集的核心靶點(diǎn)數(shù)最多，達(dá)18個(gè)，包括RXRA、MAPK1PIK3CG、IGF1、IL-4、JAK2、KDR等。本研究還發(fā)現(xiàn)了IL-17通路（富集靶點(diǎn)數(shù)11個(gè)），Meng等［19］在大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，IL-17通過(guò)激活KCs和HSCs中的NF-κB/STAT3發(fā)揮促炎和促纖維化作用。NF-κB是不同炎癥因子發(fā)揮促炎反應(yīng)導(dǎo)致纖維化的共同信號(hào)通路。楊瑩［20］研究發(fā)現(xiàn)，鱉甲寡肽I-C-f-6能夠上調(diào)炎性抑制因子IL-4、IL-10的表達(dá)，抑制腫瘤壞死因子的合成，下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子Kappa B（NF-κB）的表達(dá)，提高機(jī)體的抗炎能力。Zhang等［21］發(fā)現(xiàn)木犀草素通過(guò)調(diào)控Nrf2/NF-κB/P53通路減輕氯化汞誘導(dǎo)的肝損傷。邵丹陽(yáng)證實(shí)［22］芍藥苷能降低肝纖維化基本指標(biāo)α-SMA、Collagen-I的表達(dá)，有效地抑制促炎因子的釋放，可能通過(guò)調(diào)控LXRs-STAT3信號(hào)通路改善肝纖維化的發(fā)展進(jìn)程。Hou等［23］研究顯示，人參皂苷Rb1可通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路來(lái)完成對(duì)炎性反應(yīng)的應(yīng)答，促進(jìn)HSC凋亡。羅飄等［24］研究表明Rg1通過(guò)調(diào)節(jié)NF-κB/VCAM-1信號(hào)途徑抑制炎癥損傷，減輕膽汁淤積性肝纖維化。此外，癌癥蛋白多糖在本研究中富集靶點(diǎn)數(shù)也較多（16個(gè)靶點(diǎn)），蛋白多糖是一類能連接蛋白骨架的多糖分子，如透明質(zhì)酸酶（HA）、硫酸軟骨素等。HSC活化狀態(tài)下，合成分泌出大量HA，并加劇前膠蛋白合成，而HA可促進(jìn)膠原白分子的聚集，使肝臟基底骨架不斷纖維化，而促進(jìn)肝纖維化。

綜上所述，F(xiàn)FBJ抗肝纖維化的過(guò)程涉及多條通路、多個(gè)靶點(diǎn)以及多個(gè)生物過(guò)程，其中本研究預(yù)測(cè)的MAPK、TGF-β1、PPAR、JAK/STAT信號(hào)通路均在理論上得到了驗(yàn)證，且報(bào)道的作用于這些通路的成分可能同樣存在于FFBJ中。而預(yù)測(cè)的通路PI3K/Akt、IL-17、癌癥蛋白多糖信號(hào)通路也有研究證實(shí)是抗肝纖維化的作用通路，但涉及的成分與FFBJ相關(guān)尚未得到證實(shí)；成分木犀草素、人參皂苷Rb1、Rg1、芍藥苷、鱉甲寡肽證實(shí)可通過(guò)NF-κB通路發(fā)揮抗肝纖維化作用，但該通路在本研究中未被預(yù)測(cè)到；這些均為未來(lái)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證FFBJ抗纖維化關(guān)鍵靶蛋白及作用機(jī)制提供了思路與線索。