代謝性疾病中巨噬細(xì)胞功能及靶向遞送治療研究進(jìn)展*

李鶴，譚曉川，姜棟，張宇佳，鄭穩(wěn)生

(北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院&中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所藥物傳輸技術(shù)及新型制劑北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

巨噬細(xì)胞是先天免疫的組成部分，它可以吞噬病原體或細(xì)胞碎片，并分泌營(yíng)養(yǎng)因子、免疫遞質(zhì)和效應(yīng)子等發(fā)揮作用[1-2]。正常情況下，機(jī)體巨噬細(xì)胞表現(xiàn)為靜息狀態(tài)，宿主微環(huán)境改變產(chǎn)生不同的炎性因子來(lái)影響巨噬細(xì)胞極化，使其參與宿主免疫反應(yīng)。根據(jù)表型和功能可以將其分為經(jīng)典活化M1型巨噬細(xì)胞(classically activated macrophages)和替換活化的M2型巨噬細(xì)胞(alternately activated M2 macrophages)[3-4]。M1型巨噬細(xì)胞可以被γ干擾素(interferon gamma，IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)和脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)[5]，而M2型巨噬細(xì)胞可以被白細(xì)胞介素4(interleukin 4，IL-4)或IL-13誘導(dǎo)[6]。極化巨噬細(xì)胞會(huì)分泌多種細(xì)胞因子，M1型巨噬細(xì)胞可以分泌TNF-α、IL-6、IL-12、IL-23、一氧化氮、活性氧等因子介導(dǎo)促炎過(guò)程，防止異物入侵，具有強(qiáng)大的殺滅微生物和抗腫瘤活性[7-8]；M2型巨噬細(xì)胞釋放Ym1(chitinsea 3-like 3)、精氨酸酶1、IL-10和多胺等，具有抗炎活性，并參與細(xì)胞增殖和組織修復(fù)、免疫耐受和腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[9-10]。巨噬細(xì)胞的M1/M2極化不是一個(gè)固定概念，而是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，可以在生理和病理?xiàng)l件下逆轉(zhuǎn)[11-12]。因此M1和M2巨噬細(xì)胞分別是炎癥相關(guān)疾病和癌癥有希望的治療靶點(diǎn)之一。

巨噬細(xì)胞也可以根據(jù)所處位置進(jìn)行分類。與來(lái)自骨髓并在血液中循環(huán)的單核細(xì)胞不同，分化的組織駐留巨噬細(xì)胞，包括肝臟庫(kù)弗細(xì)胞(Kupffer cells，KCs)、脂肪中的組織巨噬細(xì)胞(adipose tissue macrophages，ATMs)、肺中的肺泡巨噬細(xì)胞(alveolar macrophages)、脾中的紅髓和邊緣區(qū)巨噬細(xì)胞(red pulp and marginal zone macrophages)、腦中的小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia)等分布在體內(nèi)各組織。其中，KCs和ATMs是兩種主要代謝組織相關(guān)的巨噬細(xì)胞[13-14]。

1 巨噬細(xì)胞在代謝性疾病中的作用

巨噬細(xì)胞在代謝性疾病中起著非常重要的作用，是治療動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)、非酒精性脂肪肝(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)、2型糖尿病(type 2 diabetes，T2D)等疾病的理想靶點(diǎn)。

1.1AS AS是含高膽固醇和載脂蛋白B的脂蛋白在壁內(nèi)滯留引發(fā)的動(dòng)脈壁慢性炎癥疾病[15]。巨噬細(xì)胞在AS性心血管疾病的發(fā)展中起核心作用[16]。目前研究認(rèn)為，低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)是AS病變中脂質(zhì)蓄積的主要來(lái)源，這些促炎性顆粒觸發(fā)了內(nèi)皮激活，將單核細(xì)胞募集到內(nèi)皮下并分化為M1型巨噬細(xì)胞，隨后巨噬細(xì)胞吞噬未修飾和修飾的脂蛋白，轉(zhuǎn)化為富含膽固醇的泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞的積累有助于脂質(zhì)儲(chǔ)存和AS斑塊生長(zhǎng)[17]。巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌促炎性細(xì)胞因子、趨化因子和活性氧維持局部炎癥反應(yīng)，即將死亡的巨噬細(xì)胞形成斑塊中的壞死核心，極易導(dǎo)致血管破裂，提高隨后的心肌梗死以及卒中的風(fēng)險(xiǎn)[18]。與對(duì)照動(dòng)物相比，在AS動(dòng)物模型，如Apoe-/-小鼠中，循環(huán)促炎性單核細(xì)胞數(shù)量顯著增加[19]，并且在AS病變區(qū)域發(fā)現(xiàn)促炎性M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物TNF-α[20]。盡管許多細(xì)胞類型都有助于形成AS斑塊，包括內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等，但巨噬細(xì)胞在AS病理生理中的作用不可替代[21]，因此巨噬細(xì)胞是AS治療的關(guān)鍵靶標(biāo)之一。

1.2NASH 非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)及其炎癥亞型NASH是引發(fā)全球范圍內(nèi)肝臟相關(guān)疾病發(fā)病率與死亡率的主要原因[22]。TILG等[23]研究表明，KCs活化和促炎細(xì)胞因子釋放在NASH炎癥和肝損傷級(jí)聯(lián)中起著核心作用。M1型巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，如IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12和TNF-α等，可以直接作用于肝細(xì)胞并促進(jìn)脂肪變性、炎癥和肝細(xì)胞損傷[24]。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥C明，KCs激活代表著肝損傷開始，耗竭KCs可以顯著降低肝臟炎癥和脂肪變性，并減輕肝臟損傷[25]。巨噬細(xì)胞定向療法治療NAFLD和NASH已經(jīng)成為了目前研究較多的一種干預(yù)策略，主要包括抑制KCs激活，抑制單核細(xì)胞向肝臟的募集，以及促進(jìn)巨噬細(xì)胞向抑炎的M2表型極化等方法[26]。

1.3T2D 我國(guó)是全球成年糖尿病患者最多的國(guó)家，其中T2D患者占糖尿病患者總數(shù)的90%。胰島素抵抗是T2D的核心特征[27-28]。巨噬細(xì)胞在慢性炎癥和胰島素抵抗中起著重要作用[29-30]。在個(gè)體處于較瘦狀態(tài)時(shí)，ATMs多為M2極化狀態(tài)[31]，M2型巨噬細(xì)胞可分泌IL-10、IL-1和兒茶酚胺等因子來(lái)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝并參與阻斷炎癥反應(yīng)[32-33]，參與維持胰島素敏感性和葡萄糖穩(wěn)態(tài)[34]。而在肥胖狀態(tài)下，在脂肪組織、肝臟和肌肉等胰島素靶器官中觀察到巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，M1型巨噬細(xì)胞分泌大量炎癥細(xì)胞因子，對(duì)胰島素信號(hào)傳遞產(chǎn)生抑制作用，并促進(jìn)了慢性炎癥和胰島素抵抗的發(fā)生[35-37]。白色脂肪組織(white adipose tissue，WAT)是肥胖狀態(tài)下產(chǎn)生慢性炎癥的主要部位，ATMs的積累是調(diào)節(jié)炎癥的關(guān)鍵因素[38-39]。在正常個(gè)體，巨噬細(xì)胞約占WAT的10%，而在肥胖者和小鼠中，巨噬細(xì)胞可以增加到近40%[40-41]。脂肪組織中的M1型巨噬細(xì)胞主要包圍在壞死的脂肪細(xì)胞周圍形成冠狀結(jié)構(gòu)(crown-like structures，CLSs)，在吞噬脂肪細(xì)胞時(shí)持續(xù)釋放促炎性細(xì)胞因子[42]。因此在T2D中，可以通過(guò)耗竭ATMs和KCs，以及下調(diào)M1型巨噬細(xì)胞比例、上調(diào)M2型巨噬細(xì)胞比例來(lái)增加胰島素敏感性[43]。

2 巨噬細(xì)胞靶向釋藥載體

納米粒的設(shè)計(jì)和遞送是巨噬細(xì)胞靶向的常用策略。根據(jù)定義，納米粒是直徑1～1000 nm范圍的粒子。它們的表面連接物決定了它們是針對(duì)特定的細(xì)胞類型(由于受體介導(dǎo)的特異性)還是針對(duì)整個(gè)組織[44]。連接特定配體后納米粒具有了一定的特異性，可以減小脫靶效應(yīng)和載體的毒性[44]。常用的載體材料有殼聚糖(chitosan，CS) 、聚丙交酯-共-乙交酯[poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA]、聚乳酸(polylactic acid，PLA)和葡聚糖(dextran，DEX)等[44]。4～30 nm納米?？梢院苋菀妆痪奘杉?xì)胞吸收[45]。在瘦小鼠中腹膜注射后，納米粒優(yōu)先在肝臟積累；而在肥胖小鼠中，納米顆粒優(yōu)先在脂肪中積累。納米載體可以將地塞米松特異性地遞送至與肥胖相關(guān)的炎性巨噬細(xì)胞中。KUNJACHAN等[46]開發(fā)了包裹多柔比星的殼聚糖納米粒，發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞對(duì)殼聚糖微粒顯示了有效的內(nèi)吞攝取。

脂質(zhì)體特定理化性質(zhì)有利于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的攝取，也是靶向巨噬細(xì)胞簡(jiǎn)單有效的手段之一。EPSTEIN-BARASH、TAKANO等[47-48]比較了直徑50～800 nm的，由中性、正電荷或負(fù)電荷脂質(zhì)組成的多種脂質(zhì)體被巨噬細(xì)胞攝取的效率，發(fā)現(xiàn)由二棕櫚酰卵磷脂(1，2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DSPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(1，2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoglycerol，DSPG)和膽固醇以3：1：2摩爾比組成的、直徑較小(85 nm)帶負(fù)電荷的脂質(zhì)體是被巨噬細(xì)胞內(nèi)在化的最佳選擇，并且直徑較大且?guī)д姾傻闹|(zhì)體可以誘導(dǎo)細(xì)胞因子的活化和細(xì)胞毒性。盡管已有文獻(xiàn)報(bào)道巨噬細(xì)胞對(duì)小脂質(zhì)體(直徑<100 nm)的攝取更多[49]，但其他研究表明，隨著尺寸增加，巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的吸收也會(huì)改善[50]。因此，脂質(zhì)體最佳直徑可能取決于多種因素，包括靶細(xì)胞和脂質(zhì)體制劑的特性，例如受體介導(dǎo)的或非受體介導(dǎo)的攝取[47]。陽(yáng)離子脂質(zhì)體可以實(shí)現(xiàn)藥物的高效細(xì)胞遞送，常用于體外基因遞送[51]。帶正電荷的脂質(zhì)體與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜和細(xì)胞表面蛋白聚糖之間的靜電相互作用可以促進(jìn)細(xì)胞攝取，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體會(huì)引起細(xì)胞毒性，從而限制了其在臨床上的安全性[52]。而帶有負(fù)電荷的脂質(zhì)，例如磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，PS)和磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol，PG)可以被巨噬細(xì)胞優(yōu)先識(shí)別[49]，F(xiàn)IDLER等[53]發(fā)現(xiàn)中性磷脂酰膽堿(phosphatidyl cholines，PC)和PS組成的陰性脂質(zhì)體被巨噬細(xì)胞攝取更多。CHONO等[54]發(fā)現(xiàn)使用由蛋黃磷脂酰膽堿、膽固醇和過(guò)氧化二異丙苯(dicumyl peroxide，DCP)以摩爾比7：2：1比例組成的，直徑分別為70，200和500 nm的陰離子脂質(zhì)體可以用于向巨噬細(xì)胞輸送藥物，從而治療AS。巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞的體外吸收隨著粒徑的增加而得到改善，但是在體內(nèi)，使用直徑200 nm脂質(zhì)體可在AS小鼠中實(shí)現(xiàn)最佳主動(dòng)脈遞送[55]。

此外，還有其他載體可以用于巨噬細(xì)胞靶向。碳納米管(carbon nanotubes，CNTs)具有較大的表面積和較高的長(zhǎng)徑比，已經(jīng)成為遞送各種生物活性物質(zhì)的新型納米載體之一。NAHAR等[56]將功能化的多壁碳納米管用于兩性霉素B的靶向，發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞對(duì)其攝取增加，并克服了兩性霉素B相關(guān)的不良反應(yīng)，包括發(fā)冷、發(fā)熱、惡心和劑量依賴性腎毒性等。嵌段共聚物是在水溶液中自組裝的聚合物囊泡[57]，像脂質(zhì)體一樣，聚合體也包含水性內(nèi)部，該內(nèi)部通過(guò)疏水膜與外部隔開。與脂質(zhì)體相比，嵌段共聚物更易于修飾，并具有更好的穩(wěn)定性，適于疏水性和親水性藥物的遞送[58]。LIU等[59]制備的PEG-PCL-PDEA三嵌段共聚物顯示了對(duì)蛋白質(zhì)極高的包封率，裝載FITC-細(xì)胞色素C的嵌段共聚物囊泡可有效將蛋白質(zhì)遞送到RAW264.7細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)。BAGALKOT等[60]構(gòu)建了帶有吞噬信號(hào)的模型雜合脂質(zhì)-乳膠(LiLa)納米粒，并發(fā)現(xiàn)其可以優(yōu)先靶向AS和脂肪組織炎癥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械腗1型巨噬細(xì)胞，使用PPAR-γ激動(dòng)劑羅格列酮(rosiglitazone，Rosi)作為模型藥物，發(fā)現(xiàn)LiLa納米粒處理后細(xì)胞中Th1細(xì)胞因子(TNF-α、CCL-2和IL-6)的濃度顯著降低。

3 靶向遞送技術(shù)

藥物遞送系統(tǒng)(drug delivery systems，DDS)可以提高藥物靶向的精確度，提高藥物療效并減小不良反應(yīng)。靶向藥物遞送的主要方法包括主動(dòng)、被動(dòng)、物理化學(xué)靶向策略。被動(dòng)靶向的發(fā)生是由于藥物、載體在癌癥或者炎癥部位的微血管滲漏的患病部位產(chǎn)生的高滲透長(zhǎng)滯留效應(yīng)(enhanced permeability and retention effect，EPR)。除了控制載體粒子的物理化學(xué)性質(zhì)以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的靶向性外，還可將配體摻入脂質(zhì)體制劑中以特異性靶向細(xì)胞。目前常用兩種巨噬細(xì)胞的主動(dòng)靶向策略包括：靶向巨噬細(xì)胞上或巨噬細(xì)胞內(nèi)的受體，以及靶向巨噬細(xì)胞分泌的或作用于巨噬細(xì)胞的細(xì)胞外信號(hào)。使用配體靶向策略進(jìn)行藥物遞送可以增加靶標(biāo)特異性，減少細(xì)胞的非特異性攝取并改變免疫細(xì)胞的反應(yīng)。按照巨噬細(xì)胞發(fā)揮作用的機(jī)制，可將其分為抑制單核細(xì)胞募集、抑制巨噬細(xì)胞活化，以及調(diào)整巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)3個(gè)部分。

3.1抑制單核細(xì)胞募集 炎癥狀態(tài)下的肝臟、脂肪和血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌趨化因子，例如CCL2和TNF-α等，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞活化和增殖，并促進(jìn)其轉(zhuǎn)化為M1樣表型，M1型巨噬細(xì)胞會(huì)進(jìn)一步表達(dá)和分泌細(xì)胞因子，例如IL-6、IL-1β、TNF-α和iNOS2等，加重慢性炎癥和疾病進(jìn)展[61]。因此可以通過(guò)干擾趨化因子信號(hào)傳導(dǎo)來(lái)減少募集入肝臟、脂肪和血管內(nèi)皮的單核細(xì)胞數(shù)量[62]。

趨化因子干擾作為治療肝臟疾病的靶向療法已得到深入研究，對(duì)趨化因子信號(hào)的干擾可以通過(guò)抗趨化因子或受體的單克隆抗體，受體拮抗劑，或阻斷趨化因子誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的小分子抑制劑來(lái)實(shí)現(xiàn)[63]。單核細(xì)胞的招募與CCL2/CCR2及CCL1/CCR8等趨化因子與其受體的相互作用有關(guān)，CCR2和CCR5的雙重抑制劑Cenicriviroc可有效阻斷CCL2介導(dǎo)的單核細(xì)胞向肝臟的募集，并改善NASH癥狀[64-65]。CCR2在免疫細(xì)胞向白色脂肪組織和肝臟的募集中起著至關(guān)重要的作用，而CCR2抑制劑Propagermanium可減輕肝臟炎癥和NASH的發(fā)展[66]。趨化因子CCL5/RANTES在肝炎癥和纖維化的進(jìn)程中起重要作用。CCL5/RANTES抑制劑Maraviroc在高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD模型中改善了肝脂肪變性[67]。這些研究表明，CCL/CCR途徑與巨噬細(xì)胞募集有關(guān)，并且抑制這些途徑顯示出潛在的治療作用。

在病理?xiàng)l件下，也可以使用對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生特定毒性的分子，如雙膦酸鹽(氯膦酸鹽和唑來(lái)膦酸)來(lái)耗竭巨噬細(xì)胞。由于炎癥部位增強(qiáng)的血管滲透性，可以通過(guò)適當(dāng)大小(直徑50～100 nm)納米載體來(lái)被動(dòng)進(jìn)入病理組織的滲漏血管，并在目標(biāo)部位積聚?；谥|(zhì)體具有靶向單核吞噬細(xì)胞的固有特性，可以用含氯膦酸鹽的脂質(zhì)體，作為巨噬細(xì)胞瞬時(shí)耗竭的特定工具，一旦它們被捕獲并攝入，氯膦酸鹽脂質(zhì)體就暴露于溶酶體磷脂酶，在磷脂雙層降解之后，該溶酶體磷脂酶導(dǎo)致被包埋的藥物在細(xì)胞質(zhì)室內(nèi)釋放，并通過(guò)ATP依賴性機(jī)制引起細(xì)胞凋亡[68]。在AS疾病治療中，斑塊相關(guān)巨噬細(xì)胞的耗竭是減少炎癥和延遲疾病進(jìn)程的潛在途徑。在高脂飲食動(dòng)物模型中，腹膜內(nèi)注射氯膦酸鹽脂質(zhì)體可以使ATMs耗竭，并抑制高脂誘導(dǎo)的體質(zhì)量增加和胰島素抵抗的發(fā)展，基因分析表明ATMs的耗竭與脂肪形成和糖異生相關(guān)基因的下調(diào)有關(guān)[69]。BIN等[70]也獲得了類似的結(jié)果，在飲食誘發(fā)的肥胖小鼠中腹膜內(nèi)注射氯膦酸鹽脂質(zhì)體可減少巨噬細(xì)胞含量，并改善全身葡萄糖穩(wěn)態(tài)和胰島素敏感性，同時(shí)胰島素敏感性激素脂聯(lián)素的血濃度升高。

3.2抑制巨噬細(xì)胞活化 通過(guò)將抗炎劑引入巨噬細(xì)胞胞質(zhì)，可以調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和釋放[71]。具有代表性的是通過(guò)RNA干擾(RNA interference，siRNA)減少炎癥基因的表達(dá)，因?yàn)榭梢酝瑫r(shí)下調(diào)多個(gè)炎癥基因，具有相當(dāng)程度的功效。潛在的靶標(biāo)包括炎性遞質(zhì)，如細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β；趨化因子，如CCL2、CCL3、CCL5[72]；以及參與促進(jìn)炎癥轉(zhuǎn)導(dǎo)的靶標(biāo)，如NF-κB成員的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)[73]。

肝巨噬細(xì)胞的炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，如NF-κB、ASK1、JNK等在巨噬細(xì)胞活化中發(fā)揮重要作用。LOOMBA等[74]開發(fā)了炎癥信號(hào)通路凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1，ASK1)的抑制劑Selonsertib，治療顯示其對(duì)肝細(xì)胞代謝以及巨噬細(xì)胞活化有影響，在一項(xiàng)隨機(jī)2期臨床試驗(yàn)中，Selonsertib在NASH和纖維化患者中顯示出纖維化、炎癥以及凋亡和壞死的血清生物標(biāo)志物的改善。MARADANA等[75]在患有飲食誘發(fā)的NASH的小鼠中研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體包裹的親脂性姜黃素或骨化三醇，姜黃素和骨化三醇都是NF-κB抑制劑，包裹二者的脂質(zhì)體被肝巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞攝取后抑制了肝炎癥、脂肪堆積、纖維化和胰島素抵抗。AOUADI等[76]使用β1，3-D-葡聚糖包裹的siRNA顆粒作為有效的口服遞送載體，該載體可能使小鼠巨噬細(xì)胞中的促分裂原激活的絲裂原激活蛋白激酶4(mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4，Map4k4)基因沉默，進(jìn)而抑制TNF-α和IL-1β等炎癥因子的產(chǎn)生，保護(hù)動(dòng)物免受脂多糖誘導(dǎo)的致死性。WANG等[77]將抗氧化劑共價(jià)綴合到環(huán)狀多糖β-環(huán)糊精上得到抗氧化納米粒，發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞可以高效、快速地內(nèi)化納米粒，并通過(guò)抑制ROS、TNF-α、IL-1β和MCP-1等促炎因子的分泌減輕炎癥因子誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥和細(xì)胞凋亡，并有效抑制泡沫細(xì)胞形成，改善ApoE-/-小鼠AS發(fā)展。

3.3調(diào)整巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)

3.3.1糖基化受體 巨噬細(xì)胞表面表達(dá)甘露糖受體(mannose receptors，MR)和半乳糖C型凝集素1/2(macrophage galactose-type c-type lectin 1/2，Mgl1/2)等C型凝集素受體，可以通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用使遞送系統(tǒng)內(nèi)在化，有利于糖基化藥物遞送[78-79]，常用于靶向癌癥中的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages，TAMs)。甘露糖受體是一種在巨噬細(xì)胞上高表達(dá)的內(nèi)吞蛋白，而Mgl1/2與寄生蟲感染中M2巨噬細(xì)胞分化有關(guān)。NASH疾病中的KCs可被甘露糖受體靶向極化為促炎表型[80]。

甘露糖基化脂質(zhì)體已多次被證明優(yōu)先靶向巨噬細(xì)胞，與未連接甘露糖的對(duì)照組相比，甘露糖基化的脂質(zhì)體與巨噬細(xì)胞的結(jié)合顯著增加[81]。HE等[82]構(gòu)建了可以口服的甘露糖修飾的三甲基殼聚糖-半胱氨酸綴合的納米粒來(lái)包載小干擾RNA，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，這些納米粒通過(guò)甘露糖受體被巨噬細(xì)胞特異性攝取，有效抑制了巨噬細(xì)胞中 TNF-α的產(chǎn)生，減少了小鼠的炎癥引起的肝損害和致死性。連接甘露糖配體并包裹CD163基因的聚乙烯亞胺納米?？梢园邢騿魏思?xì)胞，特別是M1型巨噬細(xì)胞，從而將M1巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為M2巨噬細(xì)胞，并釋放抗炎因子以減輕炎癥性疾病的進(jìn)展[83]。

與此同時(shí)，AS病變中也同時(shí)存在著M2型巨噬細(xì)胞，其表型與斑塊穩(wěn)定性相關(guān)，筆者很少見到有研究專門關(guān)注M2型巨噬細(xì)胞在AS發(fā)病機(jī)制中的作用，但由于FR表達(dá)與巨噬細(xì)胞活化和M2分化有關(guān)，因此探索AS病變部位的FR陽(yáng)性巨噬細(xì)胞與斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系，有利于構(gòu)建以FR為靶標(biāo)的藥物來(lái)治療AS中的不穩(wěn)定斑塊[89]。另外，在TAMs中也檢測(cè)到FR-β表達(dá)，這些巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出M2樣功能，并在腫瘤環(huán)境中發(fā)揮強(qiáng)大的免疫抑制功能[90]。因此，基于葉酸的載體可能將藥物遞送至活化的巨噬細(xì)胞而作為炎癥疾病和癌癥的潛在免疫治療工具。

3.3.3F4/80 F4/80糖蛋白是小鼠巨噬細(xì)胞最特異的細(xì)胞表面標(biāo)志物之一，它在大多數(shù)常駐組織巨噬細(xì)胞中高度組成性表達(dá)，包括脾臟中的紅髓巨噬細(xì)胞，腦中的小膠質(zhì)細(xì)胞，肝中的KCs等，而血液中的單核細(xì)胞表達(dá)的F4/80比成熟的巨噬細(xì)胞要少[91]。小鼠的F4/80抗原由Adgre1基因座編碼，而在人類中Adgre1基因mRNA在嗜酸性粒細(xì)胞高度表達(dá)[92]。F4/80 單克隆抗體的產(chǎn)生和應(yīng)用極大地有益于小鼠組織巨噬細(xì)胞的表型鑒定[93]。LAROUI等[94]將TNF-αsiRNA加載到由聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物(PLA-PEG)制成的納米粒中，并將F4/80 抗體的Fab'部分通過(guò)馬來(lái)酰亞胺/巰基基團(tuán)介導(dǎo)的共價(jià)鍵結(jié)合到納米粒表面，發(fā)現(xiàn)該納米?？梢耘cRAW264.7細(xì)胞直接結(jié)合，顯著改善在體外對(duì)RAW264.7細(xì)胞的巨噬細(xì)胞靶向動(dòng)力學(xué)。而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，連接F4/80 抗體的Fab'部分的納米?？梢愿行У販p輕小鼠3%右旋糖酐硫酸鈉的結(jié)腸炎。

3.3.4清道夫受體(scavenger receptors，SRs) SRs是與結(jié)構(gòu)無(wú)關(guān)的膜受體，在巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞上高度表達(dá)，它們廣泛地識(shí)別并攝取具有負(fù)電荷的粒子。SRs是一種病原體受體，能夠結(jié)合病原體和自身來(lái)源的靶向配體，并通過(guò)氧化和乙酰化識(shí)別修飾的LDL[95]。

在AS斑塊形成過(guò)程中，糖蛋白CD36起著非常重要的作用。CD36是清道夫受體B類成員，在巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板和內(nèi)皮細(xì)胞均有表達(dá)。通過(guò)在ApoE缺陷型小鼠中的研究，已經(jīng)清楚地確定了其在AS中的重要性，CD36失活可以顯著縮小病變部位。因此可以利用CD36配體，如GHRPs蛋白家族的海沙瑞林(hexarelin)，來(lái)靶向在AS病變中高表達(dá)CD36的巨噬細(xì)胞[96]。

CD163也屬于SRs，僅表達(dá)在單核細(xì)胞譜系中，并優(yōu)先在M2型以及TAMs巨噬細(xì)胞中表達(dá)[97]。巨噬細(xì)胞活化后，CD163以可溶形式(solubleCD163，sCD163)脫落并進(jìn)入循環(huán)，可作為巨噬細(xì)胞活化的生化標(biāo)記[98]。sCD163的升高與肝臟炎癥、纖維化等肝病的發(fā)展和并發(fā)癥[99]，以及胰島素抵抗和T2D有關(guān)[100]。KAZANKOV等[101]研究發(fā)現(xiàn)，sCD163的表達(dá)也與NASH和NAFLD的嚴(yán)重程度相關(guān)。ETZERODT等[97]設(shè)計(jì)了連接CD163單克隆抗體的聚乙二醇涂層脂質(zhì)體，稱為“隱性脂質(zhì)體”，發(fā)現(xiàn)連接CD163抗體可顯著增加CD163轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和巨噬細(xì)胞對(duì)隱性脂質(zhì)體的特異性攝取。GRAVERSEN 等[102]開發(fā)了2種可生物降解的CD163抗體-藥物偶聯(lián)物脂質(zhì)體，分別將藥物直接連接至CD163抗體，以及將藥物包裹在表面連接CD163抗體的脂質(zhì)體中，在大鼠炎癥模型中使用該脂質(zhì)體包裹合成地塞米松后，其功效可提高50倍，同時(shí)幾乎沒有全身性糖皮質(zhì)激素不良反應(yīng)，包括骨骼動(dòng)員、肌肉質(zhì)量下降、感染和代謝改變等。SVENDSEN等[103]使用CD163抗體與地塞米松的結(jié)合物來(lái)治療果糖誘導(dǎo)的NASH，發(fā)現(xiàn)小劑量即可顯著減少炎癥、肝細(xì)胞膨脹、纖維化和糖原沉積，并且沒有出現(xiàn)明顯的全身性不良反應(yīng)，而沒有結(jié)合CD163抗體的地塞米松在小劑量情況下則沒有這種作用。

5 討論

隨著對(duì)巨噬細(xì)胞在傳染病、炎性疾病、癌癥和代謝性疾病等多種疾病中的作用有更多的研究，人們對(duì)巨噬細(xì)胞的重要性有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)，針對(duì)巨噬細(xì)胞的靶向策略在研究和臨床中也變得越來(lái)越重要。連接配體的靶向療法已成為克服常規(guī)藥物缺乏特異性的一種方法。特定于巨噬細(xì)胞的靶向藥物遞送可將藥物特異性輸送到巨噬細(xì)胞表面或內(nèi)部，從而減少藥物進(jìn)入其他非靶細(xì)胞，增加治療效果，并減小與藥物有關(guān)的毒性。盡管靶向載體具有很多益處，但仍有許多困難需要克服，例如口服生物利用度不高、循環(huán)不穩(wěn)定、組織分布不充分、成本偏高以及毒性等，這些都限制了巨噬細(xì)胞靶向載體在臨床的應(yīng)用。另外，未來(lái)也需要增加對(duì)巨噬細(xì)胞靶向載體的長(zhǎng)期毒性研究，以及在動(dòng)物模型上的臨床前研究，并增加長(zhǎng)期存儲(chǔ)穩(wěn)定性，進(jìn)而推進(jìn)靶向藥物遞送的發(fā)展與應(yīng)用。