E6/E7 mRNA檢測聯(lián)合液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)用于宮頸癌早期診斷的價值

劉漢起，譚艷玲，高淑平，陳桂茹，周欣瀅，袁衛(wèi)維，林善群

陽春市人民醫(yī)院檢驗中心1、病理科2、婦科3，廣東 陽春 529600

宮頸癌的病死率較高，盡早診斷對于患者預(yù)后改善有積極作用。液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)檢查取樣方便，可定期復(fù)查，圖像較傳統(tǒng)抹片更清晰，能夠早期診斷宮頸癌和其癌前病變，降低宮頸癌發(fā)生率及死亡率，現(xiàn)已廣泛用于宮頸癌的篩查[1]。但有研究發(fā)現(xiàn)，TCT檢查容易受到主觀判定的影響，有一定漏診率[2]。既往研究認(rèn)為，高危型人乳頭瘤病毒病毒(HPV)持續(xù)感染和宮頸癌的發(fā)病有關(guān)[3]。HPV感染能夠刺激HPVE6、E7的表達，E6/E7 mRNA能夠引起細(xì)胞周圍紊亂，增加惡性腫瘤發(fā)生風(fēng)險[4]。E6/E7 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平能夠反映癌基因E6、E7情況，以評價機體HPV感染情況[5]。本研究旨在分析E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT檢查在宮頸癌早期診斷中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年6月至2020年12月廣東省陽春市人民醫(yī)院婦科收治的300例高危型HPV DNA陽性患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：性生活史大于3年；無盆腔相關(guān)治療史；高危型HPV DNA陽性，均接受E6/E7 mRNA及TCT及陰道鏡病理組織活檢；生殖道無急慢性炎癥；非妊娠、哺乳或經(jīng)期婦女；排除傳染性疾病和其他惡性腫瘤者。300例患者年齡30～55歲，平均(44.38±3.56)歲；孕次0～6次，平均(3.57±0.34)次；產(chǎn)次0～4次，平均(2.16±0.25)次；經(jīng)陰道鏡宮頸病理組織活檢確診慢性宮頸炎患者192例，CΙNⅠ級46例，CΙNⅡ級30例，CΙNⅢ級17例，宮頸癌15例。

1.2 方法

1.2.1 HPVE6/E7 mRNA檢測 患者取膀胱結(jié)石位，暴露宮頸，用宮頸脫落細(xì)胞專用采樣刷采集細(xì)胞并放置在取樣瓶內(nèi)。檢測HPV E6/E7 mRNA表達情況，依據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行HPVE6/E7 mRNA陰性及陽性判定[6]。

1.2.2 TCT檢測 患者取膀胱結(jié)石位，暴露宮頸，用宮頸脫落細(xì)胞專用采樣刷采集細(xì)胞并放置在含有保存液的新柏氏細(xì)胞學(xué)測試瓶內(nèi)，并進行相關(guān)檢測。按照貝塞斯達系統(tǒng)分類法[6]對檢測結(jié)果進行分類，其中低度鱗狀上皮內(nèi)病變、高度鱗狀上皮內(nèi)病變、鱗狀細(xì)胞癌(SCC)為TCT檢測陽性。

1.2.3 病理活檢 用陰道鏡采集可疑病灶組織，送至病理科活檢。診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)制定的分類標(biāo)準(zhǔn)[6]，其中宮頸上皮內(nèi)瘤變CΙNⅠ、CΙNⅡ、CΙNⅢ、SCC為病理活檢陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

HPV E6/E7 mRNA診斷宮頸癌的特異度高于TCT，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；TCT診斷的靈敏度高于HPV E6/E7 mRNA，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，HPV E6/E7 mRNA與TCT診斷的準(zhǔn)確率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT診斷的特異度、靈敏度及準(zhǔn)確率明顯高于HPV E6/E7 mRNA、TCT單獨檢查，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 HPV E6/E7 mRNA、TCT單獨與聯(lián)合檢測診斷宮頸癌的特異度、靈敏度及準(zhǔn)確率比較(%)

3 討論

流行病學(xué)報道，臨床分期和宮頸癌患者預(yù)后有直接關(guān)系[7]，早期宮頸癌的生存率顯著高于中晚期，盡早診治是改善此類患者預(yù)后的關(guān)鍵[8]。

宮頸細(xì)胞學(xué)涂片檢查在宮頸癌及癌前診斷中有重要作用，傳統(tǒng)巴氏涂片的質(zhì)量較差，細(xì)胞丟失率和假陰性率高，臨床開展受到限制。TCT檢查為目前最常用的宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查，可減少涂片中黏液、炎癥細(xì)胞及紅細(xì)胞等影響，增加閱片視野清晰度，減少誤診及漏診可能性[9]。TCT較傳統(tǒng)巴氏涂片更為標(biāo)準(zhǔn)及嚴(yán)格，可提高診斷準(zhǔn)確性。但有研究發(fā)現(xiàn)，CΙN及宮頸癌多為局灶性、多中心的病理變化，TCT的取材存在局限性，采集細(xì)胞量不足，從而影響TCT檢查的準(zhǔn)確性[10]。另有研究認(rèn)為，TCT為人工閱片，有較強的主觀性[11]。

目前研究已表明持續(xù)高危型HPV感染為宮頸癌前病變和宮頸癌發(fā)生的危險因素，但研究指出，大部分女性新發(fā)HPV感染能夠在兩年內(nèi)自行消退，和宮頸癌的發(fā)生無密切聯(lián)系[12]。HPV DNA分型檢測的特異度相對較低，假陽性率高，導(dǎo)致過度治療及不必要的隨訪。E6、E7蛋白能夠參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，E6、E7蛋白可加快細(xì)胞分裂，影響細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞永生化，從而發(fā)生宮頸癌前病變及宮頸癌[13]。E6、E7蛋白又可引起HPV發(fā)生免疫逃逸，促進細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)宮頸細(xì)胞發(fā)生惡性病變。HPV E6/E7 mRNA為癌基因E6、E7轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，其可評價癌基因活性，有研究認(rèn)為，HPV E6/E7 mRNA能夠作為評價宮頸癌風(fēng)險的有效指標(biāo)[14]。舒小芳等[15]研究也表明，HPV E6/E7 mRNA和宮頸病變的相關(guān)性較HPV DNA更強，能夠預(yù)測宮頸病變進展情況。有文獻報道，HPV E6、E7能夠降低機體免疫功能[16]。HPV E6/E7 mRNA陰性提示機體未HPV感染，或者HPV為初始感染，進展可能性較低。HPV E6/E7 mRNA陽性提示機體存在HPV感染，且為活躍期，HPV病毒癌基因已經(jīng)發(fā)生整合，并出現(xiàn)轉(zhuǎn)錄翻譯，且拷貝數(shù)越高，癌基因活性更強，宮頸癌發(fā)生風(fēng)險越高[17]。本研究以陰道下活檢為金標(biāo)準(zhǔn)，觀察發(fā)現(xiàn)，TCT及HPV E6/E7mRNA單獨檢查的準(zhǔn)確率與病理結(jié)果比較相對較低，和有關(guān)文獻報道相符[18]。

近年來有研究報道，HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT檢查能夠提高宮頸癌的檢出率[19]。陳瑛瑛等[20]研究也發(fā)現(xiàn)，HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT檢查能夠反映細(xì)胞形態(tài)改變，起到互補作用，降低宮頸病變的漏診率，并可預(yù)測宮頸病變進展情況。本研究中，HPV E6/E7 mRNA在早期宮頸癌診斷中的特異度較TCT高，靈敏度較TCT檢測低，HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT檢測的特異度、靈敏度及準(zhǔn)確率顯著高于單獨HPV E6/E7 mRNA、TCT檢測，進一步表明兩種方式聯(lián)合檢測能夠彌補單項檢測存在的不足，提高宮頸癌診斷的特異度及靈敏度，為早期宮頸癌的診斷提供參考依據(jù)，并可避免假陽性所致的過度治療。但二者聯(lián)合檢測的準(zhǔn)確率與病理組織活檢比較仍有差異，表明二者聯(lián)合仍無法取代病理組織活檢，但可作為早期宮頸癌篩查的有效手段。另有研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)后E6/E7mRNA聯(lián)合TCT檢測在隨訪宮頸癌前病變和宮頸癌復(fù)發(fā)中有重要作用，對預(yù)后監(jiān)測及臨床隨診有較高的指導(dǎo)價值[21]。但本研究未對患者進行隨訪監(jiān)測，E6/E7 mRNA、TCT在宮頸病變預(yù)后中的作用有待進一步研究。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT檢查能夠提高早期宮頸癌診斷的靈敏度和特異度。