貴州地區(qū)非綜合征型耳聾患者GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體DNA12S rRNA基因突變分析

韓巍，蘭莉，楊可婕，葉清，黃維，曹祖威，劉宇清，葉惠平

（1.貴州省人民醫(yī)院聽力中心，貴陽(yáng) 550002；2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，貴陽(yáng) 550004）

耳聾是人類最常見的感覺缺陷性疾病之一。耳聾的致病因素很多，分為環(huán)境因素和遺傳因素兩類。遺傳性耳聾分為非綜合征型耳聾（non-syndromic hearing loss，NSHL）和綜合征型耳聾（syndromic hearing loss，SHL）。其中NSHL占遺傳性耳聾的70%以上［1］。遺傳性耳聾存在廣泛的基因變異，流行病學(xué)調(diào)查研究［2-3］發(fā)現(xiàn)，NSHL患者最常見的致病基因?yàn)镚JB2、GJB3、SLC26A4和線粒體DNA12S rRNA。

隨著分子遺傳學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，遺傳因素在NSHL發(fā)病中的作用日益受到重視。研究［4］顯示，不同地區(qū)、民族的NSHL患者基因突變攜帶率具有顯著差異。本研究調(diào)查貴州地區(qū)NSHL患者GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體DNA12S rRNA 基因突變情況，分析NSHL的分布特征，旨在為本地區(qū)耳聾基因突變熱點(diǎn)個(gè)體化診療提供參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年12月至2019年12月貴州省人民醫(yī)院聽力中心經(jīng)過(guò)聽力學(xué)檢查（聽性腦干誘發(fā)電位、純音測(cè)聽、聲導(dǎo)抗）和影像學(xué)檢查［5］確診為NSHL，同時(shí)完成基因檢測(cè)的285例患者為研究對(duì)象。所有研究對(duì)象外周血采集及臨床資料獲取獲得貴州省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者或家屬知情同意并簽署知情同意書。研究對(duì)象年齡4個(gè)月～55歲，平均年齡（10.66±8.24）歲，其中，男159例，女126例。漢族112例，苗族63例，侗族45例，布依族34例、土家族31例。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）耳畸形；（2）純音測(cè)聽為傳導(dǎo)性耳聾或聲導(dǎo)抗異常；（3）中樞神經(jīng)系統(tǒng)導(dǎo)致的語(yǔ)言障礙；（4）長(zhǎng)期外地居住史。

1.2 基因芯片檢測(cè)

抽取受試者外周血3～5 mL，采用耳聾基因芯片檢測(cè)試劑盒（北京博奧生物有限公司）進(jìn)行檢測(cè)，共選擇9個(gè)突變位點(diǎn)，包括c.235delC、c.235-299delAT、c.235delC/IVS7-2A＞G、c.299delAT、c.IVS7-2A＞G、c.2168A＞G、c.1555 A＞G、c.1494C＞G、c.538C＞T，先對(duì)收集的樣本DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，隨后將擴(kuò)增產(chǎn)物與芯片進(jìn)行雜交后進(jìn)行洗滌和干燥，采用晶芯LuxScanTM10K/B微陣列芯片掃描儀掃描，然后收集檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)NSHL患者GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體DNA12S rRNA基因突變情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 貴州地區(qū)NSHL患者耳聾基因突變檢出率

結(jié)果顯示，285例患者中122例（42%）存在基因突變。按照地區(qū)劃分，貴陽(yáng)、清鎮(zhèn)、安順、凱里和畢節(jié)地區(qū)突變檢出率分別為9.47%（27例）、8.77%（25例）、8.07%（23例）、6.32%（18例）、10.18%（29例）；按照民族劃分，漢族、苗族、侗族、布依族和土家族突變基因檢出率分別為15.79%（45例）、12.28%（35例）、6.32%（18例）、4.91%（14例）、3.50%（10例）。見表1。

表1 貴州地區(qū)不同民族NSHL患者突變基因檢查結(jié)果

2.2 GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體DNA12S rRNA位點(diǎn)檢出率比較

結(jié)果顯示，GJB2基因突變檢出率為17.89%，其中c.235delC、c.235-299delAT、c.235delC/IVS7-2A＞G、c.299delAT檢出率分別為12.98%、1.75%、1.75%、1.40%；SLC26A4基因突變檢出率為15.09 %，其中c.2168A＞G、c.IVS7-2A＞G檢出率分別為3.16%、11.93%；線粒體DNA12S rRNA 基因突變檢出率為9.5%，其中c.1555 A＞G、c.1494C＞G檢出率分別為8.77%、0.70%；GJB3基因僅c.538C＞T雜合突變1例，檢出率為0.35%。見表2。

表2 NSHL患者GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體DNA12SrRNA基因位點(diǎn)檢出率比較

3 討論

已有研究［5］顯示，我國(guó)NSHL患者中GJB2、SLC26A4基因突變比例最高。本研究結(jié)果顯示，GJB2基因是貴州地區(qū)NSHL患者最常見的耳聾突變基因，c.235delC位點(diǎn)是最常見突變位點(diǎn)。不同地區(qū)、民族耳聾基因突變存在差異，與以往研究［6］結(jié)果一致。

GJB2基因定位于13q11～q12染色體，屬于縫隙連接蛋白家族，在細(xì)胞間和離子信息傳遞中發(fā)揮重要作用［7］。GJB2基因是國(guó)內(nèi)外研究較多的耳聾基因，由于種族和地域的不同，突變位點(diǎn)及頻率等存在明顯差異，其中以c.30delG、c.35delG、c.167delT及c.235delC檢出率較高，并且有明顯種族特異性［8-9］。研究［10-11］發(fā)現(xiàn)歐美國(guó)家c.35delG為主要突變位點(diǎn)，我國(guó)主要突變位點(diǎn)是c.235delC。本研究結(jié)果顯示貴州地區(qū)漢族、布依族、苗族、侗族及土家族患者c.235delC位點(diǎn)突變最常見，與以往研究結(jié)果一致。

我國(guó)GJB3基因突變?cè)诙@患者中的檢出率＜1%，c.538C＞T是最常見的突變位點(diǎn)［12］。本研究結(jié)果顯示GJB3c.538C＞T突變檢出率為0.35%，與以往研究結(jié)果基本一致。

研究［13-14］顯示SLC26A4基因定位于人類常染色體7q31位點(diǎn)。我國(guó)97.9%大前庭導(dǎo)水管綜合征患者SLC26A4基因發(fā)生突變，其中c.IVS7-2A＞G突變占78.9%。我國(guó)漢族耳聾人群中c.IVS7-2A＞G基因突變率為8.7%。新疆地區(qū)漢族耳聾人群c.IVS7-2A＞G基因突變率高于維吾爾族［15-16］。本研究NSHL患者SLC26A4基因突變檢出率為15.09%，其中c.IVS7-2A＞G為高頻突變位點(diǎn)，檢出率為11.93%。本研究亦發(fā)現(xiàn)貴州地區(qū)不同民族（漢族、苗族、布依族、侗族及土家族）患者均有SLC26A4基因突變，并且存在差異。

線粒體DNA12S rRNA基因突變是導(dǎo)致NSHL的重要原因之一，而且還會(huì)影響氨基糖苷類藥物的敏感性。c.1494C＞T、c.1555A＞G是導(dǎo)致氨基糖苷類耳毒性突變率較高的2個(gè)位點(diǎn)［17］。不同民族、地區(qū)線粒體DNA12S rRNA基因突變發(fā)生率具有明顯差異。高加索人群中c.1555A＞G位點(diǎn)檢出率為0～28.57%。日本NSHL患者c.1555A＞G基因突變率為3.0%～8.7%。我 國(guó)NSHL患 者c.1555A＞G基因突變檢出率為6.62%［18］，本研究NSHL患者c.1555A＞G基因突變檢出率為8.77%，與以往研究結(jié)果一致。

綜上所述，GJB2基因是貴州地區(qū)NSHL患者最常見的耳聾突變基因，c.235delC位點(diǎn)是最常見突變位點(diǎn)。不同地區(qū)、民族耳聾基因突變存在差異。本研究樣本量較小，且僅為一家醫(yī)院的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，不能準(zhǔn)確反應(yīng)本地區(qū)NSHL患者的基因突變發(fā)生情況，今后需擴(kuò)大樣本量來(lái)進(jìn)一步論證。