黃芪、茯苓等增強(qiáng)免疫力中藥復(fù)方篩選研究

呂夢琪，王言之，環(huán) 飛,3，胡 奇,3，孫亞琴，張青考，李世芬,3

(1.南京醫(yī)科大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇 南京 211166；2.南京醫(yī)科大學(xué) 第一臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 211166；3.江蘇省醫(yī)藥農(nóng)藥獸藥安全性評價(jià)與研究中心，江蘇 南京 211166;4.石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035)

在新冠肺炎對人類社會(huì)構(gòu)成嚴(yán)峻挑戰(zhàn)的背景下，以提高免疫力為靶向的藥物研究正逐步成為當(dāng)下熱點(diǎn).一方面，以瑞德西韋[1]為典型的新型化學(xué)合成藥物不斷得到研發(fā)；另一方面，基于中藥學(xué)的復(fù)方制劑成為預(yù)防、調(diào)理甚至治愈病患的有效手段[2].明代吳又可在《溫疫論》中以“本氣”和“外邪”的關(guān)系為切入點(diǎn)對疫病進(jìn)行了系統(tǒng)性的論述，相對于先前古籍進(jìn)一步地認(rèn)識(shí)到瘟疫是內(nèi)在原因和外在原因共同作用的結(jié)果[3]；而當(dāng)代的龐穩(wěn)泰等[4]將25個(gè)地方方案與中醫(yī)藥防治新冠診療的國家方案進(jìn)行比較和歸納，發(fā)現(xiàn)針對“濕、毒”致病的核心病機(jī)是各方案重要的共性特征，反映出我國現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)對傳統(tǒng)理念的繼承和發(fā)揚(yáng).許多中藥在治療已有的病灶外還能讓機(jī)體充滿“本氣”、增強(qiáng)免疫功能、減少“外邪”入體的觀念已經(jīng)成為普遍共識(shí).

考慮到許多病毒細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移過程較為復(fù)雜，往往并不局限于一條通路，故復(fù)方制劑相對于單獨(dú)用藥所具備的多靶點(diǎn)多層次[5]的優(yōu)勢在當(dāng)下的藥理學(xué)研究中得到廣泛關(guān)注.吳水生等[6]采用大鼠模型對理中丸及其拆方進(jìn)行研究，合理驗(yàn)證了中藥復(fù)方的疾病縮減效應(yīng)[7]與多成分多靶點(diǎn)的整合、協(xié)同作用存在一定聯(lián)系.基于以上，現(xiàn)進(jìn)行增強(qiáng)免疫力復(fù)合配方的功效檢驗(yàn)及篩選.

1 材料和方法

1.1 樣品來源及組成原則

依據(jù)石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供的黃芪茯苓膠囊擬定本實(shí)驗(yàn)復(fù)方，成分包括黃芪、茯苓、陳皮、當(dāng)歸、金銀花，用水提取，濃縮提取液并干燥，制成提取物.

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)BALB/c健康雄性小鼠200只，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司繁殖場提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(滬)2017-0005，合格證號(hào)：20170005027172.

1.3 劑量選擇和樣品配制

受試復(fù)方按劑量不同設(shè)定為3個(gè)配方，擬定劑量分別為 4.5 g/(人·d)、3.0 g/(人·d)、1.5 g/(人·d)(體重 60 kg 計(jì))，按人體擬定劑量的10倍設(shè)定劑量，增強(qiáng)免疫力配方1、2、3的劑量分別為0.75、0.50、0.25 g/kg/d(bw).另設(shè)一個(gè)溶劑對照為 0 g/kg/d(bw).受試樣品用無菌水配制，配制濃度分別為75、50、25 mg/mL，經(jīng)口單位體重每日一次給予小鼠相應(yīng)劑量的受試物，小鼠灌胃量為 0.1 mL/10 g(bw).

1.4 試驗(yàn)方法：

參考文獻(xiàn)[8-9]的方法，將所有小鼠稱量體重，并以此為標(biāo)準(zhǔn)將其隨機(jī)平均分為V、W、X、Y、Z 5個(gè)大組，再將每大組分成以10為數(shù)量單位的4個(gè)劑量組.對V組小鼠進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、NK細(xì)胞活性試驗(yàn)；W組小鼠進(jìn)行耳廓腫脹試驗(yàn)；X組小鼠進(jìn)行抗體生成細(xì)胞檢測和半數(shù)溶血值HC50的測定；Y組小鼠進(jìn)行碳廓清試驗(yàn)；Z組小鼠進(jìn)行腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn).連續(xù)灌胃1個(gè)月，測定各項(xiàng)指標(biāo).

2 結(jié)果

2.1 小鼠胸腺、脾臟器官

由表1結(jié)果可見，0.25、0.50、0.75 g/kg/d(bw) 組胸腺體比和脾體比與 0 g/kg/d(bw) 組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).

2.2 ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化

由表2結(jié)果可見，和空白組相比，其余各劑量組吸光度差值出現(xiàn)不同程度的增長，0.75 g/kg/d(bw) 組相對平均增加了0.069，差異較顯著且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而各組間NK細(xì)胞活性無明顯差異(P>0.05).

表1 小鼠胸腺、脾臟器官體比結(jié)果

表2 V組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及NK細(xì)胞活性試驗(yàn)結(jié)果

2.3 DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH

由表3結(jié)果可見，0.75 g/kg/d(bw) 組耳殼增重顯著高于 0 g/kg/d(bw) 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).

2.4 小鼠溶血空斑數(shù)及血清半數(shù)溶血值(HC50)

由表4結(jié)果可見，隨受試物劑量的增加，小鼠溶血空斑數(shù)及血清半數(shù)溶血值亦出現(xiàn)增長，0.75 g/kg/d(bw) 組顯著高于 0 g/kg/d(bw) 組，同比增幅分別達(dá)到29.73%、21.78%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05).

2.5 小鼠碳廓清能力

由表5結(jié)果可見，0.75 g/kg/d(bw) 組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)a顯著高于 0 g/kg/d(bw) 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而對比其余實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0.50、0.25 g/kg/d(bw) 劑量組雖然吞噬指數(shù)也出現(xiàn)一定的增長，但與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)目有限存在一定聯(lián)系.

表3 DNFB誘導(dǎo)W組小鼠DTH實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 X組小鼠溶血空斑數(shù)及血清半數(shù)溶血值

表5 Y組小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬百分率及吞噬指數(shù)

由表6結(jié)果可見，在腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬指數(shù)一項(xiàng)上，0.50、0.75 g/kg/d(bw) 組均顯著高于 0 g/kg/d(bw) 組，且后者增幅更大；此外，0.75 g/kg/d(bw) 組吞噬百分率和對照組相比平均上升了3.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).

表6 Z組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語與討論

參照衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)之增強(qiáng)免疫力功能試驗(yàn)的結(jié)果判定，在本試驗(yàn)條件下，增強(qiáng)免疫力篩選研究配方1具有增強(qiáng)免疫力功能作用.

從成分上看，本配方中黃芪[10]、茯苓[11]、陳皮[12]、當(dāng)歸[13]、金銀花[14]等數(shù)味中草藥既均含有黃酮類、揮發(fā)油類物質(zhì)，又各自具備獨(dú)特的微量元素或稀有氨基酸，在抗氧化、抗炎、抗腫瘤因子等方面或存在一定的協(xié)同作用.這種通過合理配比多種有效組分而建立對機(jī)體功能多系統(tǒng)、多靶點(diǎn)、多途徑的綜合調(diào)節(jié)機(jī)制的設(shè)計(jì)理念恰恰體現(xiàn)了復(fù)方用藥的診療優(yōu)勢及特色[15].

近年來，我國各地區(qū)疾病譜中傳染性疾病、母嬰疾病[16]帶來的負(fù)擔(dān)相對降低，而以“三高”為典型的慢性非傳染性疾病的發(fā)病率不斷上升.在沒有特效藥的情況下，西藥雖然起效快，但預(yù)后存在一定的不確定性，或會(huì)引發(fā)較為嚴(yán)重的不良反應(yīng)，故相較于單一西藥，中藥聯(lián)合西藥在臨床治療中有更光明的前景.有研究表明，在女性冠心病的治療中，使用中藥生脈散合酸棗仁湯聯(lián)合西藥[17]能夠在護(hù)肝、清心、止血、降血壓等多方面有效提高心肌供血功能，減少疼痛，體現(xiàn)了中西醫(yī)聯(lián)合的獨(dú)特優(yōu)勢.

鑒于當(dāng)下絲綢之路、海上絲綢之路等多種渠道讓中藥學(xué)傳播到世界各地[18]，為我國中藥保健品的研發(fā)和推廣帶來良好契機(jī)，進(jìn)一步深化對中藥藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究迫在眉睫.建立并優(yōu)化更多的復(fù)方制劑配方，既是形成正向文化輸出的內(nèi)核需求，更是提升群眾身體素質(zhì)、踐行一級(jí)預(yù)防理念的利民之舉.