不同產(chǎn)地羅漢松種子揮發(fā)油GC-MS分析

彭益淳，林樂珍，黃增瓊

(廣西醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧 530021)

羅漢松種子為羅漢松科羅漢松屬植物羅漢松Podocarpusmacrophyllus(Thunb.) D.Don或短葉羅漢松Podocarpusmacrophyllus(Thunb.)D.Donvar.maki(Sieb.) Endl.的果實，由種子和花托組成[1]。羅漢松主要分布在我國江蘇、湖南、浙江、福建、廣東和廣西等地，廣西北海是全國最大的羅漢松種植基地，種植面積達1660 hm2[2]。文獻記載羅漢松種子具有治療血虛面色萎黃和心胃痛的功效[1]。目前，國內(nèi)外關(guān)于羅漢松種子化學(xué)成分的研究報道較少。20世紀60-70年代，日本學(xué)者研究了羅漢松種子及同屬其他植物種子中的降二萜內(nèi)酯類化合物[3-6]。近年來，國內(nèi)學(xué)者孟軍[7]、龐逸敏[8]和Feng[9]先后研究了羅漢松種子中的氨基酸、多糖和降二萜內(nèi)酯類成分。趙凱麗[10]在廣西北海羅漢松種子揮發(fā)油發(fā)現(xiàn)了具有抗心肌缺血作用的化學(xué)成分川芎嗪，并認為該成分與羅漢松實治心胃痛功效有關(guān)。為了解國內(nèi)其他產(chǎn)地羅漢松種子揮發(fā)油化學(xué)組成，為今后相關(guān)藥理作用研究及藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考，本研究采用GC-MS法對國內(nèi)六個不同產(chǎn)地羅漢松種子揮發(fā)油的化學(xué)組成進行了測定和分析，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

WJX-A500高速多功能粉碎機(上海緣沃工貿(mào)有限公司)；EL-204電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；Varian300-MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國瓦里安公司)。羅漢松實種子采自廣西北海或購買于宿遷市日出種業(yè)有限公司，產(chǎn)地為分別為湖南長沙市、江西奉新縣、江蘇宿遷沭陽縣、福建泉州永春縣、河南洛陽市、湖北恩施市，經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室李瓊講師鑒定為竹柏科植物羅漢松Podocarpusmacrophyllus(Thunb.) D.Don的種子。石油醚(30～60 ℃)和無水硫酸鈉均為分析純。

1.2 揮發(fā)油的提取

取產(chǎn)于河北、湖南、江蘇、四川、廣西、福建的羅漢松種子，按參考文獻[10]所述方法進行提取，均得到氣味芳香的淡黃色液體，置于4 ℃冰箱中備用。

1.3 GC-MS分析條件

1.3.1 氣相色譜條件 VF-5ms石英毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱溫：50 ℃保持4 min，然后以15 ℃/min的速率升溫至110 ℃，再以2 ℃/min的速率升溫至150 ℃，再以20 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持5 min。載氣：He，載氣流速：1 mL/min，進樣溫度：250 ℃，進樣量：1 μL，分流比：50。

1.3.2 質(zhì)譜條件 EI(電子轟擊)：70 eV，倍增器電壓1 250 V，掃描質(zhì)量范圍45～500m/z。

1.3.3 上機前處理及成分分析 分別取不同產(chǎn)地揮發(fā)油樣品2 μL，用石油醚定容至1 mL，即得。樣品進樣測定后，檢索質(zhì)譜庫，以峰面積歸一化法測得揮發(fā)油各組分相對百分含量。

2 結(jié)果

各產(chǎn)地羅漢松種子揮發(fā)油化學(xué)組成及其相對含量，見表1。各產(chǎn)地羅漢松種子揮發(fā)油相對含量最高的4種成分，見表2。

表2 不同產(chǎn)地羅漢松種子揮發(fā)油相對百分含量較高的前四種化學(xué)成分

由圖1可見，以河北產(chǎn)羅漢松種子揮發(fā)油氣相色譜圖為例，在保留時間6 min、8 min、15 min、16 min處有4個較大的峰，按峰面積計算，其含量占3%～10%，經(jīng)鑒定其成分是α-蒎烯、檸檬烯、α-蓽澄茄油烯和古巴烯，在保留時間18 min處有個更大的峰，鑒定為β-石竹烯，按峰面積計算占23%左右；但在福建產(chǎn)羅漢松種子揮發(fā)油中，檸檬烯含量更大，而β-石竹烯的含量更小。

圖1 河北產(chǎn)羅漢松種子揮發(fā)油GC-MS總離子流

由表1可見，各地羅漢松種子揮發(fā)油中的各化合物主要為β-石竹烯、古巴烯、γ-欖香烯、α-蓽澄茄油烯、石竹烯氧化物、α-石竹烯、β-欖香烯、桉油烯醇、β-蓽澄茄烯、檸檬烯、蒎烯等11種；其中β-石竹烯、古巴烯、γ-欖香烯、α-蓽澄茄油烯的含量較高，這4種化合物的相對百分含量之和在各地樣品中均超過40%，而其他成分相對百分含量較少。值得注意的是，在江蘇樣品中并未檢測出γ-欖香烯，而在福建樣品中檢測出了12%的檸檬烯，含量占比遠遠多于其他地區(qū)的樣品。

3 討論

趙凱麗等[10]曾對廣西北海羅漢松種子揮發(fā)油化學(xué)組成進行了GC-MS分析，發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油中含有大量川芎嗪。本研究再次對廣西北海產(chǎn)羅漢松實揮發(fā)油進行了測定，但未鑒定出川芎嗪。我們曾采用HPLC法對本研究所采集的北海產(chǎn)羅漢松種子揮發(fā)油中的川芎嗪含量進行測定，發(fā)現(xiàn)其含量極低[11]。這可能與羅漢松種子采收季節(jié)或種植年份不同有關(guān)。分析羅漢松葉精油的化學(xué)成分[12]，各產(chǎn)地羅漢松種子揮發(fā)油均不含2(1H)-Phenanthrenone，3，4，4a，9，10，10a-hexahydro-7-methoxyl-1，1，4a-trimethyl和貝殼杉烯，但富含β-石竹烯、古巴烯等成分。本研究六個不同產(chǎn)地羅漢松實揮發(fā)油化學(xué)組成與王全澤報道的羅漢松葉揮發(fā)油化學(xué)成分相似[13]，均富含石竹烯、γ-欖香烯、α-蓽澄茄油烯和古巴烯等成分。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，揮發(fā)油中的許多成分具有較高的藥用價值，如β-石竹烯及其衍生物具有鎮(zhèn)咳平喘[14]、鎮(zhèn)痛抗炎[15]、抗氧化[16]等作用。也曾有報道γ-欖香烯、β-欖香烯對HCT-8、KB、K562和EJ腫瘤細胞有增殖抑制作用，其中γ-欖香烯對小鼠艾氏腹水癌有明顯的治療作用[17]。檸檬烯用途廣泛，研究發(fā)現(xiàn)其具有防腐保鮮、抑菌、抗氧化、抗炎等作用[18]，對結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌、皮膚癌等癌細胞的增殖也有顯著抑制作用[19]。此外，檸檬烯對酒精性肝損傷[20]及腦損傷[21]有減輕效果?？梢酝茰y，羅漢松種子揮發(fā)油可能在抗腫瘤方面具有較好的生物活性。下一步我們將對羅漢松實揮發(fā)油的抗腫瘤、抗心肌缺血等生物活性進行深入研究；同時，對更多產(chǎn)地及不同采收季節(jié)羅漢松實揮發(fā)油化學(xué)組成進行分析，以全面了解其活性物質(zhì)及化學(xué)組成。