香菇液體菌種培養(yǎng)基及搖瓶培養(yǎng)條件優(yōu)化

謝 婷 何 娟 張順凱 焦海濤 邊銀丙 肖 揚(yáng)*

香菇液體菌種培養(yǎng)基及搖瓶培養(yǎng)條件優(yōu)化

謝 婷1何 娟1張順凱2焦海濤2邊銀丙1肖 揚(yáng)1*

（1. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)應(yīng)用真菌研究所，武漢 430070；2. 湖北森源生態(tài)股份有限公司，湖北 宜昌 444200）

建立液體菌種優(yōu)質(zhì)高效生產(chǎn)技術(shù)體系是香菇工廠化生產(chǎn)的重要保障。以香菇‘森源16’為試驗(yàn)菌株，選擇菌絲生物量、菌絲球密度和直徑為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用單因素和正交試驗(yàn)L9(34)優(yōu)化香菇搖瓶液體發(fā)酵工藝。結(jié)果：棉稈粉為最佳碳源，麩皮為最佳氮源；優(yōu)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖3 g/100mL，棉稈粉1.5 g/100mL，木屑粉1.5 g/100mL，麩皮0.6 g/100mL，KH2PO40.1 g/100mL，MgSO4·7H2O 0.05 g/100mL；最優(yōu)搖瓶發(fā)酵條件為裝液量100 mL/250mL，搖床轉(zhuǎn)速170 r/min，初始pH 5.5，羧甲基纖維素鈉0.20 g/100mL，漆酶0.05 g/100mL。

香菇；液體菌種；培養(yǎng)基優(yōu)化；搖瓶發(fā)酵；條件優(yōu)化

香菇（）營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，被譽(yù)為“山珍之上品”，且具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、健胃、助消化、抗炎癥、抗菌和抗腫瘤等活性[1, 2]。2018年我國(guó)香菇產(chǎn)量為1 043.12萬(wàn)噸，居世界首位[3]。傳統(tǒng)的生產(chǎn)模式已無(wú)法滿足香菇產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的要求[4]，香菇生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，菌齡不一致，生產(chǎn)成本高，生產(chǎn)過(guò)程易染菌、出菇期長(zhǎng)且整齊度低、投入勞動(dòng)強(qiáng)度大等缺點(diǎn)，成為制約產(chǎn)業(yè)規(guī)?；?、周年化和機(jī)械化發(fā)展的主要因素[5]。菌種生產(chǎn)是食用菌生產(chǎn)的第一道工序，菌種的優(yōu)劣關(guān)系到產(chǎn)業(yè)的成敗[6]。成熟的液體菌種生產(chǎn)技術(shù)是食用菌產(chǎn)業(yè)工廠化、周年化和規(guī)模化生產(chǎn)的關(guān)鍵。目前液體菌種越來(lái)越受到食用菌生產(chǎn)企業(yè)的青睞，已成為食用菌制種產(chǎn)業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)[6-8]。香菇液體菌種與固體菌種相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：一是生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)便；二是菌種純度高，菌齡一致；三是污染率較低；四是標(biāo)準(zhǔn)化程度和管理效率高，能進(jìn)行周年工廠化生產(chǎn)；五是成本降低，利潤(rùn)提高[9]。

成熟的液體菌種生產(chǎn)技術(shù)是食用菌產(chǎn)業(yè)工廠化、周年化和規(guī)模化生產(chǎn)的關(guān)鍵。香菇液體菌種的研究在20世紀(jì)80年代就有報(bào)道，但至今仍未應(yīng)用于大規(guī)模栽培。液體培養(yǎng)發(fā)酵工藝是獲取優(yōu)質(zhì)香菇液體菌種的關(guān)鍵，培養(yǎng)基組成成分、搖床轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)溫度和通氣量等則是其中重要的影響因素[9]。香菇液體培養(yǎng)基組分為氮源、碳源、微量元素、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子等[10]。本研究對(duì)‘森源16’菌株的液體培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，以促成香菇液體菌種的規(guī)模化生產(chǎn)與應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

菌株‘森源16’由湖北森源生態(tài)科技股份有限公司提供。

1.2 培養(yǎng)基配方

母種培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基。對(duì)照液體培養(yǎng)基（CK）：葡萄糖2 g/100mL，玉米粉0.3 g/100mL，麩皮0.4 g/100mL，豆粕0.3 g/100mL，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，pH自然。

選取新鮮無(wú)霉變的木屑粉、豆粕、麩皮、玉米和棉稈等天然基質(zhì)置于電熱恒溫烘箱中烘干，使用粉碎機(jī)粉碎后過(guò)120目篩（孔徑0.125 mm），按配方稱取相應(yīng)重量至對(duì)應(yīng)的對(duì)照液體培養(yǎng)基或優(yōu)化培養(yǎng)基中。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 液體菌種的制備

將大小約0.5 cm2的菌塊接入裝有100 mL培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，每瓶接5塊，接種完畢后置于恒溫?fù)u床中，在170 r/min、25 ℃條件下震蕩培養(yǎng)10天。

1.3.2 培養(yǎng)基配方的優(yōu)化

（1）單因素篩選。培養(yǎng)基碳源選擇葡萄糖、玉米芯粉、棉稈粉、木屑粉，氮源為豆粕粉和麩皮，試驗(yàn)共設(shè)計(jì)9個(gè)配方（表1）。將配方1作為氮源與碳源試驗(yàn)的對(duì)照組；配方1、2和3分別以葡萄糖、棉稈粉、玉米芯粉作為單一碳源；配方8和9分別以麩皮和豆粕作單一氮源，比較兩者之間的差異。每處理3次重復(fù)。

表1 液體菌種培養(yǎng)基碳氮源的單因素配方(g/100mL)

以菌絲生物量（以菌絲干重計(jì)）、菌絲球直徑和密度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定適宜的碳源和氮源組成。菌絲生物量、密度和直徑測(cè)量方法參考實(shí)驗(yàn)室前期工作[11]。所有處理均添加0.05%的MgSO4和0.1%的KH2PO4；搖瓶培養(yǎng)條件為：150 r/min，25 ℃連續(xù)培養(yǎng)10天。

（2）正交試驗(yàn)篩選最佳配方。通過(guò)單因素篩選出各碳源和氮源的濃度（表2）。進(jìn)一步應(yīng)用SPSS22.0軟件設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，以菌絲生物量為衡量指標(biāo)，確定液體菌種發(fā)酵的最優(yōu)配方（表3），每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

表2 液體菌種培養(yǎng)基正交優(yōu)化試驗(yàn)的碳氮源水平

表3 液體菌種培養(yǎng)基配方正交優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.3 搖瓶發(fā)酵工藝的優(yōu)化

（1）使用優(yōu)化的培養(yǎng)基配方對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行單因素篩選。各因素分別為：①羧甲基纖維素鈉，分別設(shè)置0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 g/100mL等5個(gè)濃度，在25 ℃，150 r/min，裝液量100 mL，pH自然條件下培養(yǎng)10天。②外源添加漆酶，分別設(shè)置0、0.01、0.03、0.05、0.07 g/100mL等5個(gè)濃度，在45 ℃下處理24 h。在25 ℃，150 r/min，裝液量100 mL，pH自然條件下培養(yǎng)10天。③搖瓶裝液量，設(shè)置60、80、100、120、140 mL等5 檔，在25 ℃，150 r/min，pH自然條件下分別培養(yǎng)10天。④培養(yǎng)基初始pH，分別調(diào)節(jié)至4、5、6、7、8和pH自然，在25 ℃，150 r/min，裝液量100 mL條件下培養(yǎng)10天。⑤搖瓶轉(zhuǎn)速，設(shè)置140、150、160、170、180 r/min等5個(gè)水平，在25 ℃，裝液量100 mL，pH自然條件下培養(yǎng)10天。以上參數(shù)的最優(yōu)值，均通過(guò)測(cè)定菌絲生物量、菌絲球密度和直徑加以判定。

（2）通過(guò)正交試驗(yàn)確定最佳發(fā)酵工藝。單因素試驗(yàn)確定的各參數(shù)水平如表4所示。進(jìn)一步應(yīng)用SPSS 22.0軟件設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，以菌絲生物量為主要衡量指標(biāo)，確定香菇液體菌種發(fā)酵的最優(yōu)配方（表5），每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

表4 液體菌種發(fā)酵工藝正交優(yōu)化試驗(yàn)的因素水平

表5 液體菌種培養(yǎng)基配方正交優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳、氮源與菌絲生長(zhǎng)的關(guān)系

由圖1-A，B，C可知，配方2的菌絲生物量最大，配方4的菌絲球密度最大、直徑最小，說(shuō)明棉稈粉與香菇的菌絲體生物量、菌絲球的密度和直徑有密切關(guān)系。前期實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果表明，添加少量的木屑粉可以促進(jìn)香菇菌絲生長(zhǎng)[11]。因此選擇棉稈粉、木屑粉和葡萄糖作為最佳碳源應(yīng)用。

不同氮源的菌絲體生物量差異不顯著（圖1-D）。以麩皮為氮源時(shí)，菌絲球的密度和直徑顯著高于豆粕（圖1-E，F(xiàn)），且其懸浮性好。綜合比較3個(gè)指標(biāo)結(jié)果，選擇麩皮作為培養(yǎng)基氮源組分。

2.2 培養(yǎng)基正交優(yōu)化試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)得到的合適碳、氮源，用L9(34)型正交試驗(yàn)表設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化的結(jié)果（表6），極差最大的是因素B，然后依次為因素C、A和D。說(shuō)明棉稈粉是對(duì)香菇液體發(fā)酵菌絲體干重影響最大的培養(yǎng)基組分，其次是木屑粉、葡萄糖和麩皮。極差分析結(jié)果表明，最優(yōu)培養(yǎng)基配方為A3B3C3D2，即葡萄糖3 g/100mL，棉稈粉1.5 g/100mL，木屑粉1.5 g/100mL，豆粕0.6 g/100mL。葡萄糖、棉稈粉、木屑粉和麩皮與菌絲體干重的相關(guān)性均達(dá)到顯著水平（<0.05）。

由于極差分析得到的最優(yōu)配方A3B3C3D2，并未出現(xiàn)在正交試驗(yàn)表中，對(duì)該配方進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證。按此配方培養(yǎng)10天后，測(cè)得菌絲體干重為1.165 g/100mL，高于正交表中的所有處理。

2.3 不同培養(yǎng)條件對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

2.3.1 羧甲基纖維素鈉濃度

粘度影響發(fā)酵過(guò)程中的溶氧濃度，同時(shí)也影響攪拌對(duì)菌絲機(jī)械剪切的作用。調(diào)節(jié)液體發(fā)酵環(huán)境的粘度，能調(diào)節(jié)菌球的大小和數(shù)量，從而制備出適合生產(chǎn)的最佳液體菌種[11]。從圖2-A，B，C可以看出，隨著羧甲基纖維素鈉濃度的增加，各配方的菌絲體生物量和菌絲球直徑都沒(méi)有顯著差異；菌絲球密度則呈先增高后降低趨勢(shì)，其中羧甲基纖維素鈉濃度為0.2 g/100mL時(shí)，菌絲球密度最大。該濃度下菌絲體生物量也較大，而菌絲球直徑小，因此可選其為最佳濃度。

表6 液體菌種培養(yǎng)基優(yōu)化正交試驗(yàn)結(jié)果

注：A為葡萄糖，B為棉稈粉，C為木屑粉，D為麩皮，Ki為各因素同一水平試驗(yàn)指標(biāo)的平均數(shù)。R為各因素的極差。

A～C：碳源篩選；D～F：氮源篩選。培養(yǎng)基編號(hào)見(jiàn)表1。不同小寫(xiě)字母表示處理間差異顯著（P＜0.05）。

2.3.2 漆酶濃度

由圖2-D、E、F可知，隨著漆酶添加量的增加，菌絲體生物量逐漸增大，菌絲球密度和直徑則呈先上升后下降。漆酶添加量≥0.05 g/100mL，菌絲體生物量與對(duì)照相比有顯著性差異。其中漆酶添加量為0.05 g/100mL時(shí)，菌絲體生物量達(dá)到最大，為1.0876 g/100mL，菌絲球密度也為最大，為113個(gè)/mL。故選擇漆酶濃度為0.05 g/100mL作為最優(yōu)添加濃度。

2.3.3 裝液量

隨著裝液量的增加，菌絲體生物量整體呈顯著上升態(tài)勢(shì)，菌絲球直徑逐漸增大，而密度顯著降低（圖2-G、H、I）。兼顧菌絲體干重、菌絲球密度和直徑3個(gè)指標(biāo)，選擇100 mL為最優(yōu)裝液量。

2.3.4 搖瓶轉(zhuǎn)速

搖瓶轉(zhuǎn)速影響培養(yǎng)基內(nèi)溶氧，轉(zhuǎn)速過(guò)高，產(chǎn)生的剪切力影響菌絲體生長(zhǎng)；轉(zhuǎn)速過(guò)低，空氣與培養(yǎng)基氧氣交換不足，影響溶氧水平[9]。隨著轉(zhuǎn)速的提高，菌絲體生物量逐漸降低，菌絲球直徑逐漸減小，菌絲球密度顯著增加（圖2-J、K、L）。說(shuō)明轉(zhuǎn)速越大，液體培養(yǎng)基的溶氧量越大，菌絲所受的剪切力也越大。綜合菌絲生物量、菌絲球密度和直徑3個(gè)指標(biāo)，選擇170 r/min為最佳轉(zhuǎn)速。

2.3.5 初始pH

pH對(duì)菌絲體生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)物生成有重要的作用[12]。隨著初始pH升高，菌絲體生物量先升高后降低，在pH為6時(shí)，達(dá)到最大值，為1.274 g/100 mL，菌絲球密度也最大，達(dá)171個(gè)/mL；菌絲球直徑則較小（圖2-M、N、O）。故篩選出最佳pH為6.0。

2.3.6 發(fā)酵工藝正交優(yōu)化

根據(jù)單因素試驗(yàn)篩選得到的合適發(fā)酵工藝及相對(duì)應(yīng)的濃度和條件，用L9(34)型正交試驗(yàn)表設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化。從表7可以看出，極差最大的因素為B，其次分別為D、C、A?？梢?jiàn)，對(duì)香菇液體發(fā)酵菌絲生物量影響最大的因素是外源添加漆酶，其次為初始pH、搖瓶轉(zhuǎn)速和增稠劑羧甲基纖維素鈉。極差分析結(jié)果，最優(yōu)的發(fā)酵工藝為A3B2C1D1，即羧甲基纖維素鈉0.25 g/100mL，漆酶0.05 g/100mL，轉(zhuǎn)速170 r/min，pH 5.5。方差分析結(jié)果，外源添加漆酶濃度與菌絲體生物量之間的相關(guān)性達(dá)顯著水平（<0.05），而其他3項(xiàng)發(fā)酵條件對(duì)菌絲體干重的影響均未達(dá)到顯著水準(zhǔn)。

由于得到的最優(yōu)發(fā)酵條件A3B2C1D1，依然沒(méi)有出現(xiàn)在正交試驗(yàn)表中，所以對(duì)該發(fā)酵條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)得培養(yǎng)第10天的菌絲干重為0.853 g/100mL，高于正交表中的所有處理。

3 討 論

3.1 香菇液體菌種培養(yǎng)基配方的優(yōu)化

培養(yǎng)基配方直接影響菌種質(zhì)量，它既要提供微生物生長(zhǎng)繁殖所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，又要防止?fàn)I養(yǎng)過(guò)剩、滲透壓過(guò)高而抑制菌體的生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，香菇菌絲在棉稈替代部分木屑的栽培料中生長(zhǎng)較快，且出菇周期明顯縮短、出菇潮次集中[13]。在液體配方中添加部分木屑粉可以促進(jìn)香菇菌絲的生長(zhǎng)[11]，本研究首次引進(jìn)了棉稈粉、玉米芯粉等栽培基質(zhì)作為香菇液體培養(yǎng)基的碳源，以期獲得既能在液體培養(yǎng)中快速生長(zhǎng)又能在栽培料中迅速定植的液體菌種。林剛等[14]對(duì)黃孢原毛平革菌（）的液體培養(yǎng)配方進(jìn)行優(yōu)化發(fā)現(xiàn)，添加木材浸出液的菌絲球產(chǎn)量是未添加浸出液的5倍，且不易感染雜菌；在生長(zhǎng)初期產(chǎn)量增加不明顯，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，菌絲球產(chǎn)量差別加大，因此，木材浸出液對(duì)菌絲球的生長(zhǎng)具有刺激作用。對(duì)秀珍菇、平菇和香菇的培養(yǎng)基優(yōu)化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在純液體培養(yǎng)基中加入適量的固體成分可以完善營(yíng)養(yǎng)成分，并且可以給菌種的菌球形成提供“寄生核”，對(duì)菌絲球的形成與發(fā)育有明顯的促進(jìn)作用[15]。

目前在液體培養(yǎng)基中加入棉稈粉的研究尚未報(bào)道，因此，棉稈粉對(duì)香菇菌絲的作用還需進(jìn)一步研究。香菇對(duì)小分子的有機(jī)碳源利用效果很好，本研究中優(yōu)化配方的葡萄糖含量為3%。溶液中的葡萄糖含量適當(dāng)降低，不僅能節(jié)約成本，溶液中的滲透壓也能相應(yīng)減小。香菇液體培養(yǎng)基的配方優(yōu)化試驗(yàn)顯示，在培養(yǎng)基中加入2%葡萄糖、4%木屑和4%黃豆粉，香菇菌絲的產(chǎn)量最高[16]；也有顯示，添加2%麩皮和1%酵母粉時(shí)香菇菌絲生物量較[17]高。郭興等[18]優(yōu)化元蘑液體培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)酵母膏比蛋白胨、尿素、硫酸銨等氮源更好。本研究只使用了一種氮源，氮源的多樣性對(duì)香菇菌絲的生長(zhǎng)是否存在交互作用，還需作進(jìn)一步的研究。

A～C：羧甲基纖維素鈉濃度篩選；D～F：漆酶濃度篩選；G～I(xiàn)：裝液量篩選；J～L：搖瓶轉(zhuǎn)速篩選；M～O：初始pH篩選。培養(yǎng)基編號(hào)如表1所示。不同小寫(xiě)字母表示處理間差異顯著（P＜0.05）。

表7 香菇液體菌種發(fā)酵工藝優(yōu)化正交試驗(yàn)結(jié)果

注：A為羧甲基纖維素鈉，B為漆酶，C為轉(zhuǎn)速，D為pH，Ki為各因素同一水平試驗(yàn)指標(biāo)的平均數(shù)。R為各因素的極差。

3.2 香菇液體菌種發(fā)酵工藝參數(shù)的優(yōu)化

前人對(duì)于香菇液體菌種發(fā)酵工藝的研究較少，許多培養(yǎng)參數(shù)沒(méi)有系統(tǒng)優(yōu)化。本研究?jī)?yōu)化了初始pH、搖床轉(zhuǎn)速、搖瓶裝液量、培養(yǎng)基的粘度（增稠劑）、外源添加漆酶濃度等參數(shù)，選取菌絲生物量、菌絲球直徑和密度3個(gè)指標(biāo)，對(duì)其進(jìn)行單因素篩選。

香菇為好氣性菌類，想要使菌絲又快又好地生長(zhǎng)，需要在培養(yǎng)時(shí)給予足夠的氧氣。朱家騮等[19]對(duì)金針菇液體菌種的培養(yǎng)條件進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在250 mL三角瓶中，裝液量在50～100 mL以內(nèi)，菌絲球干重增加，而裝液量在100～150 mL之間，菌絲生物量則開(kāi)始降低。這與本研究結(jié)果一致。徐思煒等[20]發(fā)現(xiàn)裝液量和轉(zhuǎn)速對(duì)香菇菌絲生長(zhǎng)的影響較大，其中最優(yōu)轉(zhuǎn)速為180 r/min，最優(yōu)裝液量為100 mL/250mL。本研究得到的最優(yōu)轉(zhuǎn)速為170 r/min。搖床轉(zhuǎn)速越快，培養(yǎng)液中的溶氧量越大，剪切力也隨之增加。因此，適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速會(huì)促進(jìn)香菇菌絲的生長(zhǎng)。培養(yǎng)液的粘度對(duì)溶氧量也有較大的影響，在培養(yǎng)液中加入增稠劑可以增加培養(yǎng)液的濃度，增大剪切力。趙萍[21]對(duì)靈芝深層發(fā)酵過(guò)程中的發(fā)酵液粘度研究發(fā)現(xiàn)，增稠劑濃度為0.15%時(shí)，菌絲球密度大、重量較大且菌絲體大小均勻。本研究中添加0.25%的羧甲基纖維素鈉，讓香菇菌絲在適當(dāng)?shù)恼扯认驴焖偕L(zhǎng)。

pH影響酶的活性及細(xì)胞膜活性，從而影響代謝。胡雯[22]研究發(fā)現(xiàn)，初始pH為5.5，香菇菌絲體生物量及胞外多糖產(chǎn)量最高，與本研究選出的最適初始pH相一致。一般木腐菌較喜歡在偏酸的環(huán)境中生長(zhǎng)，且液體培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基初始pH都會(huì)比終止pH高。原因是高溫滅菌時(shí)pH會(huì)下降，菌絲在分解基質(zhì)的過(guò)程中分泌有機(jī)酸也會(huì)導(dǎo)致pH降低。漆酶不僅分布于動(dòng)、植物體內(nèi)，也存在于多種真菌中參與生物化學(xué)反應(yīng)，具有重要生理功能。漆酶參與木質(zhì)素的降解，為菌體的生長(zhǎng)發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)。本研究首次在液體培養(yǎng)基中添加漆酶，發(fā)現(xiàn)其能顯著提高香菇菌絲生物量。

[1] 常明昌. 食用菌栽培學(xué)[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2003: 138.

[2] Kües U, Liu Y. Fruiting body production in basidiomy- cetes[J]. Applied Microbiology & Biotechnology, 2000, 54(2): 141-152.

[3] 產(chǎn)業(yè)信息網(wǎng). 2020—2026年中國(guó)香菇行業(yè)市場(chǎng)專項(xiàng)調(diào)查及市場(chǎng)發(fā)展前景報(bào)告[EB/OL]. https://www. chyxx.com/ research/202002/835998.html. 2020-2-21.

[4] 陸建明, 張錫鳳. 食用菌液體菌種制備的研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌, 2003(06): 15-17.

[5] 李春霞, 吳建金, 黃亮, 等. 香菇0912液體菌種培養(yǎng)基及搖瓶發(fā)酵條件的篩選[J]. 天津農(nóng)業(yè)科學(xué), 2019, 25(02): 1-6.

[6] 戴建清, 曾志恒. 食用菌液體菌種研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)[J]. 中國(guó)食用菌, 2012, 31(05): 1-3.

[7] Xiao J H, Chen D X, Xiao Y, et al. Optimization of submerged culture conditions for mycelial polysaccharide production in[J]. Process Biochemistry, 2004, 39: 2241-2247.

[8] 郭靜利, 劉旭. 食用菌液體和固體制種技術(shù)比較經(jīng)濟(jì)效益分析[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 44(04): 835-841.

[9] 白秀峰. 發(fā)酵工藝學(xué)[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2003: 134-136.

[10] 呂作舟. 食用菌無(wú)害化栽培與加工[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2008: 109.

[11] 周韜. 香菇液體菌種培養(yǎng)基優(yōu)化及其菌種質(zhì)量評(píng)價(jià)體系的建立[D]. 武漢: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)圖書(shū)館, 2017.

[12] Fang Q H, Zhong J J. Effect of initial pH on production of ganoderic acid and polysaccharide by submerged fermentation of[J]. Process Biochemistry, 2002, 37: 769-774.

[13] 陳黃曌, 蔡英麗邊銀丙. 棉稈屑代料栽培秋季香菇初探[J]. 食用菌學(xué)報(bào), 2013, 20(02): 20-24.

[14] 林剛, 文湘華, 錢易. 液體培養(yǎng)基中添加天然成分對(duì)白腐真菌Phanerochaete chrysosporium生長(zhǎng)的促進(jìn)作用[J]. 環(huán)境科學(xué), 2003(04): 41-47.

[15] 周信華, 王揚(yáng)軍, 陳若霞, 等. 秀珍菇、平菇、香菇液體菌種培養(yǎng)基與培養(yǎng)方式試驗(yàn)[J]. 當(dāng)代蔬菜, 2006(12): 38.

[16] 沈維鐸, 姚志偉, 楊群. 香菇液體培養(yǎng)的工藝優(yōu)化[J].武漢生物工程學(xué)院學(xué)報(bào), 2012, 8(02): 86-89.

[17] 韓冰, 陳順, 于廣峰, 等. 香菇液體深層發(fā)酵優(yōu)化研究[J]. 食用菌, 2019, 41(04): 19-21.

[18] 郭興, 劉繼云, 李占君, 等. 元蘑液體培養(yǎng)基配方篩選[J]. 食用菌, 2019, 41(04): 40-42, 44.

[19] 朱家騮, 張琪曉, 李元梅. 金針菇液體菌種培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件試驗(yàn)[J]. 浙江食用菌, 2009, 17(04): 26-27.

[20] 徐思煒, 張君勝, 周雯. 香菇液體菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 42(12): 290-292.

[21] 趙萍. 影響靈芝深層發(fā)酵因素的探討[J]. 食品科學(xué), 2002(11): 88-92.

[22] 胡雯. 香菇胞外多糖高產(chǎn)菌株篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化及抗氧化性抑菌作用的研究[D]. 南京: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2014.

Optimization of liquid spawn media and shake flask culture conditions of

Xie Ting1He Juan1Zhang ShunKai2Jiao Haitao2Bian Yinbing1Xiao Yang1*

(1. Institute of Applied Mycology,Huazhong Agricultural University,Wuhan, Hubei 430070, China; 2. Hubei Senyuan Ecological Co., Ltd., Yichang, Hubei 444200, China)

The establishment of a high-quality and high-efficiency production technology system for liquid spawn is an important guarantee for the factory production ofs. In this study,Senyuan No.16 was used as the test strain, and the mycelial biomass, mycelial ball density and diameter were used as the main evaluation indicators. Single factor test and orthogonal test L9(34) were used to optimize the liquid culture process ofin shaking flasks. Results showed that cotton stalk powder is the best carbon source and wheat bran is the best nitrogen source. The optimized medium formula is glucose 3 g/100mL, cotton stalk powder 1.5 g/100mL, wood chip powder 1.5 g/100mL, wheat bran 0.6 g/100mL, KH2PO40.1 g/100mL and MgSO4· 7H2O 0.05 g/100mL. The optimal culture conditions for shake flasks are 100 mL/250 mL of liquid volume, 170 r/min of shaker speed, initial pH of 5.5, sodium carboxymethyl cellulose 0.25 g/100mL, laccase 0.05 g/100mL.

s; liquid spawn; medium optimization; shake flask culture

S646

B

2095-0934（2021）03-242-08

湖北省技術(shù)創(chuàng)新專項(xiàng)重大項(xiàng)目（2018ABA095）

謝婷（1995—），碩士，主要從事食用菌栽培方面的研究。

肖揚(yáng)（1979—），副教授，主要從事應(yīng)用真菌生物技術(shù)和食用菌栽培研究工作。E-mail：xiaoyang@mail.hzau.edu.cn。